Способ диагностики степени тяжести вирусного гепатита В Советский патент 1991 года по МПК G01N33/53 

сл

с

Изобретение относится к медицине, а именно к иммунодиагностике вирусного гепатита. Цель - ранняя диагностика степени тяжести вирусного гепатита B. Способ заключается в том, что в сыворотке крови больного определяют титр гомореактантов и титр R-белков и при титре гомореактантов 1:16 - 1:128 и титре R-белков 1:6400 - 1:12800 диагностируют легкую форму заболевания, при титре гомореактантов 1:256 - 1:512 и титре R-белков 1:25600 - среднетяжелую форму, а при титре гомореактантов 1:1024 - 1:8192 и титре R-белков 1:51200 - 1:102400 - тяжелую форму вирусного гепатита B. Способ позволяет в более ранние сроки диагностировать заболевание. 1 табл.

Изобретение относится к медицине, а именно к иммунодиагностике вирусного гепатита

Цель изобретения - ранняя диагностика степени тяжести вирусного гепатита В

Способ осуществляют следующим образом. Из вены больного берут кровь (3-5 мл), отделяют сыворотку и определяют в ней титр гомореактантов и титр R-белков.

Титрование гомореактантов проводят в реакции пассивной гемагглютинации (РПГА), используя резус-положительные эритроциты человека 0(1) группы, сенсибилизированные Р в -Фрагментами антире- зусного иммуноглобулина человека. Резус-положительные эритроциты человека 0(1) группы отмывают три раза изотоническим раствором хлорида натрия и получают 4%-ную суспензию эритроцитов. Полученную суспензию инкубируют с Р(ав#-фраг- ментом антирезусного иммуноглобулина человека (2 мг/мл) в течение 1 ч при комнатной температуре. После инкубации эритроциты четырехкратно отмывают изотоническим раствором хлорида натрия, готовят 4%-ную суспензию и используют в реакции. Сыворотки крови больных инэктивируют при 56°С в течение 30 мин и адсорбируют эритроцитами человека (резус-положительными 0(1) группы). Затем исследуемые сыворотки разводят %-ной нормальной кроличьей сывороткой в изотоническом растворе хлорида натрия посредством двухкратных серийных разведений. Нормальную кроличью сыворотку перед использованием также инактивируют при 56°С в течение 30 мин и адсорбируют эритроцитами человека. В каждую лунку с разведениями исследуемой сыворотки добавляют 0,025 мл суспензии эритроцитов человека, сенсибилизированных Р(ав -фрагментом антирезусного иммуноглобулина человека, тщательно перемешивают и

iO

,

го со ;о i

оставляют на 18 ч при 4°С. Реакцию учиты- пают визуально.

Титр R-белков в сыворотке крови определяют по ингибированию реакции гемагг- лютинации между резус-положительными эритроцитами человека 0(1) группы и анти-R сывороткой, полученной иммунизацией кроликов R-белками человека (4). Резус-положительные эритроциты человека 0(1) группы отмывают три раза изотоническим раствором хлорида натрия и получают 4%- ную суспензию эритроцитов. В лунку агг- лютинационной доски вносят по 0,1 мл изотонического раствора хлорида натрия, затем в 1-ю лунку добавляют 0,1 мл сыворотки больного (в разведении 1:50) и готовят серию двухкратных разведений. В каждую лунку добавляют 0,1 мл анти-R сыворотки в разведении, превышающем рабочее в 2 раза. В каждую лунку добавляют 0,025 мл 4%-ной суспензии эритроцитов человека, тщательно перемешивают и оставляют на 18 ч при 4°С. Реакцию учитывают визуально. Последнее разведение сыворотки больного, которое еще дает ингибирующий эффект, принимают за титр R-белков.

П р и м е р 1. Больная Л. поступила в гематологическое отделение на 6-й день болезни с жалобами на общую слабость, недомогание. Обьективно: состояние удовлетворительное, легкая желтушность кожи и склер, печень на 2 ел ниже края реберной дуги, мягкая, при пальпации чувствительна. Со стороны других органов патологии не явлено. Билирубин общий 79,2 мкмоль/л (прямой 72,0; непрямой 7,2); АлАТ 5,5 ммоль/(ч.л.); тимоловая проба 5 ед. протром- биновый индекс 85%. Обнаружен HBSAg. Длительность желтухи 11 дн.

Диагноз: Вирусный гепатит В (HBSAg+), легкая форма. Титр гомореактантов в сыворотке крови 1:64, титр R-белков 1:12800. Изменения у данной больной значений им- мумохимических показателей соответствуют таковым при легкой форме заболевания. П р и м е р 2. Больной А., 41 год. В анамнезе - протезирование зубов. Пред- желтушный период Юдн. Предъявлял жалобы на тошноту, отсутствие аппетита, боли в животе, кожный зуд, сонливость. Обьективно: кожа и склеры интенсивно желтушны. Печень на 3 см ниже края реберной дуги, мягкой консистенции, селезенка не увеличена. В крови : лейкоциты 4,4 х 10 /л; СОЭ 3 мм/ч; билирубин 316,4 мкмоль/л (прямой 248,5; непрямой 67,9): АлАТ 5,8 ммоль/(ч.л.); тимоловая проба 18 ед; протромбиновый индекс 57%. Длительность желтухи 56 дн.

Диагноз: вирусный гепатит B(HBSAg+). тяжелая форма. Титр гомореактантов у больного 1:1024. титр R-белков 1:52100. что соответствует изменениям, характерным

для тяжелой формы вирусного гепатита В.

Результаты обследования 79 больных острым вирусным гепатитом представлены в таблице.

Как видно из приведенных данных, тит0 ры гомореактантов и титры R-белков находятся в прямой зависимости от степени тяжести вирусного гепатита В и достоверно отличаются при легкой, среднетяжелой и тяжелой форме заболевания (р 0,01 - 0:001).

5 Уровень гомореактантов и R-белков при различных формах тяжести вирусного гепатита В показан в таблице.

Предлагаемый способ позволяет диагностировать степень тяжести вирусного ге0 патита В уже на 2 - 3-й день желтушного периода, когда еще не происходит разрушение лизосом клеток печени и не наблюдается существенного увеличения активности тканевых ферментов в сыворотке крови, в то

5 время как нарушения метаболизма гепа- тоцитов в этот период сопровождаются повышением в сыворотке крови уровня фрагментов клеточных рецепторов (R-белков) и их комплексов с иммуноглобулинами 0 гомореактантов.

Предлагаемый способ может быть использован в практической работе инфекционных и гематологических отделений. Правильная и своевременная диагностика

5 степени тяжести вирусного гепатита В позволит выбрать адекватную лечебную тактику, что сократит пребывание больного в стационаре и предотвратит летальный исход.

0

Формула изобретения

Способ диагностики степени тяжести вирусного гепатита В, включающий иссле5 дование сыворотки крови, отличающий- с я тем, что. с целью ранней диагностики, в сыворотке крови определяют титр гомореактантов и титр R-белков и при титре гомореактантов 1:16 - V128 и титре R-белков

0 1:6400 - 1:12800 диагностируют легкую фор- му вирусного гепатита В, при титре гемореактантов 1:256 - 1:512 и титре R-белков 1:25600 - средне- тяжелую форму, а при титре гомо5 реактантов 1:1024 - 1:8192 и при титре R-белков 1:51200 - 1:102400 - тяжелую форму.