Штамм @ @ @ -2384,используемый для очистки промышленных сточных вод коксохимических производств от роданидов Советский патент 1983 года по МПК C02F3/34 C12N1/20 C12N1/20 C12R1/01 C02F3/34 C02F101/10 C02F103/34 

Изобретение относится к микробио логической промышлейности и касает нового штамма бактерий, используемо го для разрушения роданидов при очистке промышленных сточных вод ко сохимичесцих производств. Известны штаммы роданразрушающих микроорганизмов, близких к роду Pseudomonas поп ligusactis и сходных с Bakt „ th iocyanoxidaijs Happoid Штаммы имеют следующую характеристи ку. Морфологические признаки.. Короткие, мелкие, утолщенные палочки, напоминающие кишечные, но размером меньше в 4-5 раз. Длина клеток 0,20,5 мкм. Неподвижные. По Граму окра шиваются отрицательно или в неопред ленный розовато-голубой цвет. Физиологические признаки. Аэроб. Оптимальная температура жизнедеятел ности 25-30°С. Оптимальный рН 6,8-7 Культуральные свойства. При росте на агаризованной среде образуются колонии в виде росинок. На мясопептонном агаре вырастают подобные колонии, но более крупные, при этом среда окрашивается в желто-зеленый. цвет. После культивирования на мяco-nentOHHOM агаре теряет способность окислять роданиды. Биохимические свойства. Не изменяют молоко и Сахаров, не продуциру индол и сероводород, не разжижают мясо-пептонную желатину 1 . Известны штаммы вида Thiobaoiiiu thiocyanoxidan.s разрушающие роданид в сточных водах и имеющие следующую характеристику о Морфологические свойства. Мелкие, короткие, палочки с округленны ми -краями, похожие на ко1 кобактерии Длина клеток 0,5-0,7 мкм, ширина 0,2-0,3 мкм. Располагаются отдельно Спор не образуют. Окрашиваются по Граму отрицательно. Слабо окрашиваются метиленовым синим и фуксином. Подвижны. Размножаются делением. Типичный признак: постоянство формы и величины клеток. Культуральные признаки. На мясопептонном агаре и плотных элективных родановых средах образуют очень мелки, прозрачные, круглые колонии Растут на питательных средах, включающих промышленные сточные воды, содержащие роданиды. Биохимические признаки. Не ферментируют лактозу, глюкозу, маннит, мальтозу, сахароэ-у., не образуют индол, выделяют сероводород Я}. Недостатками штаммов являются: сравнительно цизкая интенсивность окисления роданидов в промышленных сточных водах (до 80 г/м . сутки) , медленное развитие бактерий (5-6 су ток и низкая удельная скорость роста бактерий. Цель изобретения - создание нового штамма, интенсифицирующего процесс окисления роданидов в сточных водах. Поставленная цель достигается использованием штамма Thiobacilfus thiocyanoxidans В-2384 для очистки промьш.шенных сточных вод коксохимических производств от роданидов. Предлагаемый штамм отличается от известных своими морфологическими, физиологическими и биохимическими свойствами, а также выраженной способностью окислять роданистые соединения. Штамм выделен из почвы и адаптирован на питательных средах, содержащих роданиды до 0,4 мг/л. Штамм имеет следующую характеристику. Морфологические признаки. Клетки палочковидные, мелкие, короткие, размером О , .,5-0 ,6 мкм с закругленными краями. Располагаются поодиночно, размножаются делением. Полиморфные, По методу Грама окрашиваются отрицательно. Окраска клеток равномерная, интенсивная. Кислоточувствительны. Включений и спор не имеют, выраженной капсулы не образует. Подвижные , Физиологические свойства. Аэроб, температурный . диапазон роста 25-42С. Оптимальная концентрация водородных ионов среды (рк)- 8,0, при рН 77,5 рост слабый. Добавление к мясопептонному бульону поваренной соли до 2% стимулирует рост, концентрация соли 6% и выше приводит к полной задержке роста культуры. Культуральные свойства. На мясопептонном агаре (МПА суточная культура образует колонии диаметром 23 мм с блестящей поверхностью, возвышенным центром, ровным и плоским краем. Колонии бесцветные, непрозрачные, легко снимаются петлей. Агар вокруг колоний не окрашивается. На МПА с добавлением 3-5% крови зоны гемолиза не дает. На средах Эндо, Левина, Плоскирева колонии мелкие, диаметром 0,5-1 мм сухие, матовые, плоские с приподнятым центром, на висмут-сульфит агаре роста нет. На МПБ по Хиттигеру штамм дает равномерную муть без образования пленки. На синтетической агаризованной родановой среде при 30-37 0 штамм через 48 ч образует мелкие точечные колонии, выпуклые с блестящей поверхностью, ровным краем, непрозрачные. Петлей снимаются легко. Штамм приводит к легкой опалесценции жидкой родановой среды в первые сутки роста при 30-37 0, через 48 ч дает 1:)авномерную муть. Биохимические свойства. Неактивен в отношении глюкозы лактозы, мальтозы, сахарозы, ксилозы, арабинозы.

галактозы, маннита, дульцита, инозита, сорбита. Проба Хью-Лейфсона отрицательная (окисление и ферментация глюкозы не происходят), Ацетилметилкарбонил не образует, реакция с метил-рот отрицательная. Крахмал не гидролизует. Протеолитическими свойствами не обладает (желатин не разжижает, молоко не свертывает, реакцию молока не изменяет). Индол и сероводород не образуетi Продуцирует оксидазу/кат.алазу, не облада- ет уреазной активностью.Цитрат в качестве единственного источника углерода не может использовать. В среде Виноградского.окисляет нитриты до нитратов (в пределах 30% от и.С ходного количества нитритов).

Не утилизирует аргинин, лизин и орнитин (аргининдигидролаза) лизини орнитиндекабоксилазы отсутствуют.

Штамм депонирован во Всесоюзном научно-исследовательском институте генетики и селекции промышленных микроорганизмов и ему присвоен шифр ДМПМ В-2384. Хранится в музеях живых культур микробов Кузнецкого филиала Восточного научно-исследовательского углехимического института и кафедры микробиологии Новокузнецкого института усовершенствования врачей.

Выделенный штамм сохраняют в лабораторных условиях на жидкой родановой среде следующего состава: водопроводная вода 1 л} 0,3 г 0,5 г; MpS04 0,1 г; FeSO следы; K HPOij 0,5 г.

Роданразрушающая активность штамма поддерживается путем пересевов на жидкие родановые среды (соотношение 1:4). Инкубация 24 ч при 30 с, в последующем штамм следует хранить при температуре в темноте.

Пример. Штамм ThiobaciJTus thiocyanoxidang, В-2384 используют для обезроданивания промышленных сточных вод коксохимических производств .

Роданазная активность штамма проверена на лабораторной установке со окгочными водс1ми коксохимических производств. Основные, параметры бактериального обезроданивания промьшшенных сточных вод следующие: оптимальная температура процесса обезроданивания 28-30с, рН среды 7,8-8,0. Испытания проводят в ферментаторах периодического куяьтивирования микроорганизмов.

Сточная вода коксохимического производства, содержащая роданиды .450 мг/л, фенолу 1-5 мг/л, общий азот 3000 мг/л, цианиды 15-20 мг/л/ смолы и масла 5р-60 мг/л обезроданивается за 4-5 сут, относительная

скорость окисления 73-92 мг/л в сутки . Остаточное содержание роданидов составляет 1-3 мг/л.

П р и м е р 2. Штамм ThiobacilJ-is tliiocyanoxidans В-2384 используют для обезроданивания родановой жидкой среды с концентрацией роданидов () 240 мг/л,- 500 мг/л/ KH.PO(j 500 мг/л; Ре804следы. Обезроданивание производят в условиях примера 1. Относительная скорость обезроданивания 120 мг/л в сутки. Остаточное содержание роданидов до 1 мг/л.

Предлагаемый штамм интенсивно развивается народановых синтетических средах и МПА в первые сутки.

В динамике обезроданивания многократно изучались ферментативные свойства штамма и существенных отклонени от характеристик исходного штамма не отмечено.

При сравнительно короткой лагфазе период экспоненциального роста культуры наступает уже через 3-5 ч культивирования в отличие от известного, у которого развитие наблюдается на 5-6 сутки. По исследованным параметрам периодическая культура предлагаемого штамма охарактеризована как быстрорастущая.

Таким образом, штамм Tliiobacillus thiocyanoxidans В-2384 обеспечивает эффективное обезроданивание, например, характеризуется высокой (1 сутки) скоростью роста и стабильностью ферментативных свойств.

Активность штамма без аэрации приведена в .табл. 1 и с аэрацией подтверждается данными, приведенными в табл. 2.

Результаты испытаний, ь период проведения испытаний массовая концентрация роданидов в среде и сточной воде колебались от 240 до 500 мг/л, а конечная 1-3 мг/л. Исследования проводились с подачей и без подачи воздуха в ферментатор. Длительность .эксперимента составляла от 1 до 7 суток.

Таким образом, лабораторные испытания штамма В-2384 показали высокую окислительную способность по отношению к роданидам на синт.етической родановой среде 169 мг/Л:- сут , ), а на промышленных водах 83 , что выше известного штамма (до 80 г/м- сут) .

Использование предлагаемого штамма для очистки коксохимических сточных вод от роданидов позволит сократить время обезроданивания (с 5 суток до 1 суток), и увеличить съем роданидов.

Таблица

Штамм,Thiobacillus thiodyanoxidans В-2384 (депонирован в Центральном музее про№Л1шенных микроорганизмов института ВНИИгёнетика, коллекционный номер ЦМПМ В-2384), используемой для очистки промышленных сточных вод коксохимических производств от роданидов. (Л о: оо 00 со