Способ получения сухой агглютинирующей сыворотки для диагностики вибриоза лососевых рыб Советский патент 1986 года по МПК A61K38/36 C12N1/00 

I1 Изобретение относится к микробиологии, в частности к серологической диагностике вибриоза лососевых рыб. Цель изобретения - повьппеиие активности и стабильности агглютинирующей сыворотки для диагностики вибри оза лососевых рыб. Штамм Vibrio augui11arum № 7-25/ хранится в коллекции микроорганизмов Всесоюзногб ордена Трудового Красного Знамени государственного научноконтрольного института ветеринарных препаратов и имеет регистрационный номер 7-25/1. Исходный штамм Vibrio auguillarm выделен в Эстонской ССР в 1978 г. из крови радзгасной форели. Из этого штамма путем целенаправленной селекции получен стабильный штамм Vibrio auguillarum 7-25/1, обладающий генет чески закрепленными культуральными морфологическими и биохимическими свойствами, характеризующимися следу кяцими призиаками. Культуральные и морфологические свойствао Величина клеток односуточной агаровой культуры (1,6-2,5) X (0,4 1,0) мкМо Слабоизогнутые палочки, подвижны, с одним полярно расположен ным жгутиком. Спор и капсул не образует. По Граму не окрашивается. Мясо-пептонный агар с 1,5% NaCl (рН 7,2-7,4): через 24 ч при 20 гладкие колонии, блестящие с ровным краемс Щелочной мясо-пептонный агар (рН 8,0-8,2): через 24 ч мелкие, крупные, блестящие колонии. Дифференциально-диагностический агар с пенициллином (рН 8,0-8,2): через 24-48 ч на сине-зеленой среде выпуклые, гладкие колонии желтого цвета Дифференциально-диагностическая .среда TCBS (рН 7,9-8,0): через 1824 ч на голубовато-зеленой среде плоские колонии желтого цвета. J Кровяной агар (5% бараньих эри троцитов 0,5% NaCl): через 24 ч кру лые, слизистые, полупрозрачные коло нии. Мясо-пептонный бульон с 1,5% NaC через 24 ч равномерное помутнение, образование нежной пленки на поверх ности бульона. f Физико-биохимические признаки. 2 Размножаются при5-35 С. Оптимум роста 18-25 с, рН 7,2-8,2. Оптимальная концентрация NaCl в питательиой среде 1,5%. Разжижает желатину, гид- ролизует крахмал, дает о -гемолиз на кровяном агаре. Реакция на оксидазу, каталазу, тест окисления - ферментации по Хыо-Лёйфсону, на ацетилметилкарбинол положительная. Восстанавливает нитраты до нитритов, сероводорода не образует, мочевину не расщепляет. Образует индол на среде с триптофаном. Ферментирует без образования газа арабинозу, галактозу, декстрин, мальтозу, маннит, маннозу, сахарозус Не ферментирует одонит, изодульцит, лактозу, ксилозу, инозит, рафинозу, арабинозу. Обладает лецитиназной активностью, Положительная аргининдигидролазная реакция Не декарбоксилирует лизин и орнитин. Антиге1 ные свойства. Обладает специфическим антигеном. Агглютинируется диагностической сыворотной Vibrio auguillarum. В качестве антигена при иммунизации кроликов используют двухсуточную культуру штамма 7-25/1 Vibrio auguillarum, выращенную на МПА с добавлением 1,5% NaCl. Культуру;.рмьшают сте- . рильным физиологическим раствором, добавляют формалин до конечной концентрации его в суспензии 0,3% и двукратно отмывают от примесей питатель-ной среды формалинизированным физиологическим раствором на центррнфуге при 3000 об./мин в течение 30 мин. После по.следнего центрифугирования осадок культуры разводят до определенной концентрации по оптическому стандарту мутности ГИСК им. Л.,А.Тарасевича. Пример 1. Агглютинирующую сыворотку для диагностики вибриоза лососевых рыб получали путем пятикратной гипериммунизации кроликов массой 2,0-2,5 кг, антигеном, приготовленным из культуры Vibrio auguillarum 7-25/1, с интервалом 7-8 дней. Антиген готовили с таким расчетом, чтобы в 1 мл содержалось 10 млрд микробных клеток по оптическому стандарту мутности. Первую инъекцию кроликам проводили подкожно, последующие внутривенно в объемах 0,5; 0,5; 1,0; 1,0; и 1,5 мл, что соответствовало дозам 5,0; 5,0; 10,0; 10,0 и 15 мпрд микробных кле-

СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ОУХОЙ АГ-. ГЛЮТИННРУЩЕЙ СЬШОРОТКИ ДЛЯ ДИАГНО- СТИКИ ВИБРИОЗА ЛОСОСЕВЫХ РЫБ в реак-ции агглютинации, включающий иммуни- , зацию кроликов-доноров путем после- довательных введений культуры штамма Vibrio auguillarum с последующим тотальным обескровливанием животных, отделением сьшоротки, консервированием борной кислотой ивысушиванием препарата, отличающийся тем, что, с целью повьшения активности и стабильности сыворотки, для иммунизации кроликов-доноров используют культуру штамма Vibrio auguillarura I 7-25/1, а иммунизацию осуществляют (Л пятикратно с интервалом между инъекциями 7-8 дней в дозе 5,0; 5,0;,. 10,0; 10,0; 15,0 мпрд микробных клеток по оптическому стандарту мутности, причем первое введение проводят подкожно, а последующие - внутривенно.: О) сх to