Способ моделирования хронического тонзиллита Советский патент 1984 года по МПК A61B10/00 

а

ее

ч

а Изобретение относится к медицин а именно к отаринолярингологии, и может найти применение при разрабо ке способов лечения хронического т филлита. Известен способ моделирования хронического тонзиллита путем инфильтрации миндсшин вирулентной стрептококковой культурой со стиму лятором Фрейнда -Cl. Однако известный способ является неадекватным .возникновению тонзиллита У человека; Известен способ моделирования хронического тонзиллита путем снижения иммунореактивности организма с последующим введением аденовирус но-микробного материала f 2 j. Указанный способ является кратковременным. Цель изобретения - увеличение длительности воспалительного процесса. Указанная цель достигается тем/ что при осуществлении способа путе снижения иммунореактивности организма с последующим введением в ткань миндалин аденовирусно-микроб ного материала, снижение иммунореактивности осуществляют путем многократного введения антигена . из ткани миндалин до появления в сыворотке крови специфических антител в титрах 1:256 - 1.:512 с последующим внутритонэиллярным введе нием гиповирулентного варианта референс-штамма стг штококка Даше в дозе 10-20 млн. микробных тел. Первая стадия. Приготовление тканевого антигена для иммунизации . Тканевой антиген готовят из минд ЛИН человека, удаленных во время оп ративных вмешательств. Миндалины уд ют в стерильных условиях, отмывают зиологическим раствором, взвешивают и размельчают в блендоре с небольшим количеством физиологическо го раствора до состояния тонкой эмульсии. Затем эмульсию заливают физиологическим раствором до соотношения 1/0 г ткани на 10 мл физраствора; рН эмульсии доводят до 8,0-8,5 с помощыо 0,2-1%-ного раствора едкого натра. Материал ос тавляют при 4-6 С в течение 2 ч с периодическим перемешиванием. Зате рН доводят до 8,0 и подвергают .центрифугированию в течение 40 мин при 4000 об/мин. Осадок отбрасывают, а надосадочную жидкость подкис ляют слабым раствором уксусной кис лоты до рН 6,0. Образовавшийся оса док удаляют центрифугированием, а надосадочную жидкость подкисляют до рН 4,5. Выпавший осадок удаляют центрифугированием, промывают .подкисленной до рН 5 4,5 дистиллированной водой и затем растворяют в дистиллугрованной воде, подщелачивают 1%-ным раствором едкого натра до рН 7,2. Всю.обработку ткани ведут в стерилЬ . ных условиях и на холоде. Концервацию материала осуществляют путем добавления раствора формалина до 0,2%-ной концентрации. Антиген хранят при до 2 мес. В приготовленном антигене микрометодом по Къельдалю определяют количество азота и пересчитывают на белок, количество которого колеблется от 7 до 10 мг-%. Вторая стаддая. В качестве тестмикроба для внутритонзиллярного заражения г животных используют референс-штамм. стрептококка Даше, который при внутривенном и внутрибрюшинном введении в дозе 500 1000 млн. микробных тел белым мышам весом 15-20 г вызывает 95 100%-ную гибель от септикопиемий, а при внутритонзиллярном введении, например, кроликам в дозах. 10 20 млн. микробных тел -флегманозное поражение. . Используемый штамм стрептококка Даше направлено.культивируют н средах в присутствии повышающихся концентраций антибиотиков, снижая тем самым вирулентность в 10 20 раз. В опытах исрользуют антибиотикорезистентные генерации микроорганизмов, не вызывающие у контрольных животных развития флегманозного поражения слизистых при внутритонзиллярном заражении в дозах 10-2Q млн. микробных тел. Третья стадия. Воспроизведение хронического тонзиллита у кроликов. Кроликам весом 2,5-3,0 кг подкожно пятикратно вводят тканевый антиген с интервалом между инъекциями в 3 для по следующей схеме: первая инъекция - 1 мп тканевого антигена, содержащего 2 мг белка; вторая инъекция - 1 мл тканевого антигена, содержащего 4 мг белка; треться инъекция - 1 мл тканевого антигена, содержащего 6 мг белка; четвертая инъекция - 1 мл тканевого антигена, содержащего 8 мг белка; пятая инъекция - 1 мл тканевого антигена, содержащего 10 мг белка. Через 7 сут после последней инъекции антигена производят пробный забор крови с целью определения титра противотканевых сывороточных антител. В опытах используют животных с титрами антител в пределах 1:256 - 1:512. При отсутствии таковых животным однократно вводят одкожно тканевой антиген в дозе, содержащей 10 мг -белка. Через 7 сут после последней инъкции антигена в основание миндалин i ри помощи инъекционной иглы под

контролем зрения вводят 10 NUIH в 0,1 МП микробных тел суточной стрептококковой культуры авирулентного варианта референс-штамма Даше.

В опыт для воспроизведения хронического тонзиллита взято 15 кроликов. Наблюдение за животными проводилось в течение 6 мес с момента заражения: первые 10 дней животных осматривали через 1 день, в последующем - еженедельно.

После введения в миндалины стрептококковой культуры на следукяций день отмечалось ухудшение общего состояния, гиподинамия, отказ от пищи. При осмотре области зева наблюдались некоторые проявления острого воспалительного процесса: Увеличение и гиперемия миндалин, иногда с наличием пленчатых налетов белесоватого цвета.

На 3-5 сут. как общие, так и местные признаки острого тонзиллита исчезали. Стрептококковая культура с поверхности миндалин выделялась в течение 7-15 дней.

.В тканях миндалин кроликов, удаленных в разные сроки (1,5 - 3,6 и 12 мес после инфицирования миндалин стрептококковой культурой, регистрировались катоморфологические изменения, характерные для хронического тонзиллита. Эти изменения отмечались, в основном, в паренхиме миндалин и проявлялись значительным разрастанием соединительной ткани капсулы и трабекул миндалины, наличием множественных инфильтратов, иногда с участками размягчения в центре (см. табл. 1|.

В лимфоидной ткани миндалин во всех случаях выявляли гиперплазию

фолликулов с активными центрами размножения. На отдельных участках фолликулы атрофированы, замещены соединительной тканью.

Кровеносные сосуды паренхимы

в одних местах расширены, просвет их заполнен форменными элементами крови, в других местах просвет сосудов сужен, стенки их утолщены, местами отмечено формирование пеоиваскулярных инфильтратов.

Иммунологические изменения представлены в табл. 2.

Иммунологические исследования проводились с кровью 10 кроликов, у которых хронический, тонзиллит воспроизводился предлагаемым способом, кроликов у которых воспалительный процесс в миндалинах вызван по известному способу и б здоровых животных, составивших контрольную группу.

Использование предлагаемого способа моделирования хронического тонзиллита у кроликов обеспечит воспроизведение патоморфологических признаков и клиническое течение (до 12 мес), максималх но приближенное к хроническому тонзиллиту человека, что особенно важно при решеНИИ актуальных научных проблем в Области оторинолярингологии.

Предлагаекый способ моделирования хронического тонзиллита представит 35 возможность разработать и широко внедрить в практику здравоохранения более эффективные методы профилактики и лечения хронического тонзиллита, что имеет большое социальное зназначение.

40

Т а б л и ц а

СПОСОБ МОДЕЛИРОВАНИЯ ХРОНИЧЕСКОГО ТОНЗИЛЛИТА путем снижения иммунореактивности организма с последующим введением в ткань миндалин -аденовирусно-микробного г материала, отличающийся тем, что, с целью увеличения длительности воспалительного процесса, снижение иммунореактивности осуще-; ствляют путем многократного введения антигена из ткани миндалин до появления в сыворотке крови специфических антител в титрах 1:256 1:512 с последующим внутритонзиллярным введением гиповирулентного варианта референс-штамма стрептококка Даше в дозе 10-20 млн. микробных тел. а

Предлагаемый

Наличие диффузной лимфоидно.плазмоклеточной инфильтрации, мно. жественных инфильтратов в паренхиме миндалин иногда с участками размягчения в центре. Кровеносные сосуды резко расширены, переполне вы кровью, фолликулы с активными центрами размножения

Разрастание соединительной ткани, наличие множественных инфильтратов, пролиферативные васкулиты, фолликулиты с активными центрами размножения, диффузная лимфоидно-плазматическая инфильтрация

12

1,5

Прототип

6

12 Иммунологические изменения тонзиллита по предлагаемому и

Продолжение табл. 1

Наличие идентичных инфильтратов, разрастание соединительной ткани капсулы и т.рабекул, атрофиля фолликулов, в некоторых случаяхзамещение их соединительной тканью

Единичные крупные фолликулы с активными центрами размножения, выражены явления опустошения и замещения фолликулов соединительной тканью. Стенки кровеносных сосудов склерозированы, просвет их сужен, умеренная лимфоидно-плазмоклеточная инфильтрация

Кровеносные сосуды всех калибров резко расширены, переполнены кровью Границы между фолликулами нечеткие, в самих фолликулах выражены активные центры размножения. В межфолликулярной ткани и в эпителии - диффузная лимфоидно-плазматическая инфильтрация

Эпителий и межфолликулярная ткан умеренно инфильтрованы лимфоцитами и плазматическими клетками. Фолликулы обычной формы, активные центры размножения отсутствуют. Кровеносные сосуды без видимых изменений

То же Таблица2 при моделировании хронического известному способам