Способ определения концентрации гепарина в крови Советский патент 1984 года по МПК G01N33/48 

СП

4 Изобретение относится к медицине в частности к определению гепарина в крови,Известен способ определения концентрации гепарина в крови путем титрования плазгФ крови антагонистом гепарина протаминсульфатом в Присутствии активатора свертывания тромбин-кальциевой смеси, заключающийся в регистрации времени образования сгустка при последовательно повьлшении концентрации протаминсуль фата, добавляемого к плазме кровиЩ Недостатком способа являетсяотсутствие стабильного нейтрализующего весового соотношения протаминов с гепарином. Это соотношение колеблется от 1,5 до 4 мг/1 мг гепарина и зависит от значения рН„ Кроме того, протаминсульфат в количестве, превыьдающем количество присутствующего в плазме гепарина, сам оказывает антикоагулянтное действие которое ошибочно может быть припи сано не полностью нейтрал 13ованно му гепарину. Кроме того, низкая селективность протаминсульфата к взаимодействию с гепарином в услови ях крови удлиняет время титрования и определения количества гепарина Нейтрализующая активность протаминсульфата меняется от. препарата к препарату г а также изменяется при кратковременном кранении его в вод ных растворах. Целью изобретения является упрощение способа определения гепарина в крови о Эта цель достигается тем, что определение содержания гепарина в крови ведут с использованием в качестве антагониста гепарина нестехиометричного полиэлектролитног комплекса на основе полиметакрилов кислоты и четвертичной соли поли-4 -винилпиридина при весовом соотношении комплекса и гепарина 2;1-20 При м е р„-Кровь для исследования из краевой вены уха кролика берут в силиконированные пробирки, содержащие 3,8%-ный раствор цитрат натрия в объемном соотношении 9s1 (кровь;цитрат) После добавления ОД ivti 5%-ного раствора гепарина смесь перемешивают и центрифугирую 10 мин со скоростью 3000 об/мин. Плазму отбирают и помещают в термо согат коагулометра Ынитгера и Гросс Исходный раствор нестехиометричног полиэлектролитного комплекса на ос нове полиметакриловой кислоты и четвертичной соли поли-4-винилпиридина 2,2% разводят последователь в 2 раза до концентрации 2,210 % В реагентную прббирку, помещенную в термостат коагулометра, вносят 0,1 мл плазмы, 0,1 ми одного из пр готовленных растворов комплекса и 0,2 мл тромбин-кальциевой смеси такой активности, чтобы свертывание контрольной плазмы наступало за 10-12 с, используя автоматическую пипетку с магнитным пускателем отсчета времени. При-образовании сгустка секундомер коагулометра автоматически отключается. Аналогичные измерения проводят с другими разведениями комплекса. При добавлении нестехиометричного полиэлектролитного комплекса в концентрации. 0,275% (соотношение антигепаринат:гепарин 1,1S1) время свертывания составляет 29,7 с. При увеличении концентрации комплекса в 2 раза (соотношение 2,2il) время свертывания плазмы составляет 10,2 с и не изменяется до достижения 20-кратного переизбытка комллекса. Таким образом, минимальная нейтрализующая доза достигается при концентрации комплекса 0,55, что соответствует концентрации гепарина;„ .,, с-са Р -компле со ч - гепарина п -2,2 0,25% концентрации введенного гепарина, где п - нейтрализующее соотношение комплекс:гепарин. В таблице приводится титрование .плазмы, содержащей 0,08 мг гепарина/1 мл по. известному и пред-. лагаемому.способам. Из-приведенных данных видно,, что для определения гепарина в образце плазмы по известному способу требуется по крайней мере 7 титрований (общее время титрования 24 мин) ,, тогда как по предлагаемому способу уже третий опыт дает необходимый результат, т.е. число операций сокращается в 2,3 раза (время титрования 4 мин 30 с). При использовании дротаминсульфата в качестве .антагониста гепарина невозможно применение автоматического коагулометра, так как происходит выпадение осадка, препятствующее образованию прочных нитей фибрина. В предлагаемом способе для регистрации используют автоматический коагулометр, что сокращает время, необходимое для титрования одного образца. Кроме того, сокращение времени исследования достигается за счет приготовления заранее и возможности длительного хранения растворов нестехиометричного полиэлектролитного комплекса. Протаминсульфат же необходимо заново готовить перед каждым опытом. Поэтому общее время, необходимое для определения содержания гепарина, сокращается почти в б раз. Упрощение определения концентрации гепарина в крови, ведущее к значительному сокращению времени определения, является чрезвычайно важным в послеоперационный период

для своевременного введения точного количества антигепаринового агента, так как уменьшает вероятность опасных пос:ледствий, вызванных гмперкоагуляцией.

СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ КОНЦЕНТРАЦИИ ГЕПАРИНА В КРОВИ путем титрования плазкы крови антагонистом гепарина в присутствии активатора свертывания, отличаю «ий.с я тем, что, с цельи упрощения способа, в качестве антагониста гепарина используют нестехиометрический полиэлектролитный комплекс на основе полиметакриловой кислоты и четвертичной соли поли-4-винилпирндина при весовом соотношении комплекса и гепарина 2 - 20:1.

0,10

0,20

0,050 .

0,075

0,025

0,0125

0,006

10,2+0,4

0/1 10,1+0,5 О,OS 0,025 10,2+Q,4 18,4+0,6 0,0125