Способ определения функционального состояния стенки сосудов Советский патент 1984 года по МПК A61B10/00 G01N33/48 

00

N Изобретение относится к клиничес кой и экспериментальной медицине и может быть использовано для оценки функционального сосудистого эндотелия у больных, а также в эксперимен те у лабораторных животных. Известен способ определения функ ционального состояния сосудистой стенки без биопсии путем исследования крови до и после пережатия сосу дов С 1 . Однако исследование функционального состояния сосудистой стенки пу тем определения концентрации простациклина или его метаболитов недостаточно специфично, так как его источником могут быть не только клетки сосудистого эндотелия, но и клетки легких, желудка и др. Кроме того, используемые с этой целью антисыворотки недостаточно специфичны и дают перекрестные реакции с другими простагландинами в силу .близости их химического строения. Цель изобретения - повышение специфичности способа. Цель достигается тем, что согласно способу определения функционально го состояния стенки сосудов путем .исследования крови до и после их пережатия, в крови, взятой-из пальца, определяют АДФ-индуцированную агрега цию тромбоцитов, вычисляют отношения АДФ-индукцированной агрегации до и после пережатия сосудов конечности иопределяют функциональное состояние стенки сосудов по вычислен ному соотношению. Способ осуществляют следующим образом. о Две пробирки устанавливают в шта тив. В пробирки вводят по 100 мл (мкл)3,14%-ного раствора лимоннокис лого натрия . Мякоть пальца руки: большого протирают спиртом. После вы сыхания спирта обычным способом делают прокол кожы глубиной 3-4 мм. Первую каплю крови осторожно удаляют В силиконированную микропипетку, со держащую 20 мкл 3,8%-ного раствора лимоннокислого натрия, набирают 180 мкл своб.одно вытекающей крови. Стабилизированную кровь выдувают в первую пробирку. Кровь в пробирке ос торожно перемешивают в течение 3040 с. Для определения исходного количества тромбоцитов из первой пробирки в смеситель для красной крови до отме- ки 0,5 набирают кровь и до отметки 101 - разводящую жидкость для подсчета тромбоцитов; Кровь в смесителе перемешивают с разводящей жидкостью и ло подсчета тромбоцитов смесителя хранят при комнатной температуре 40-60 мин (время, необходи мое для лизиса эритроцитов. На руку накладывают манжету манометра для измерения кровяного давления, определяют систолическое давление, повышают давление в манжетке на 10 мм рт.ст. Через 3 мин делают прокол кожи и набирают кровь в микропипетку (20 мкл). Кровь переносят во вторую пробирку и забирают пробу в смеситель для подсчета тромбоцитов. Первую и вторую пробирки устанавливают в , расположенный в центре магнитной мешалки, опускают по металлическому стержню, вводят по 30 мкл раствора АДФ (конечная концентрация в крови 0,01 мг/мл ) и включают магнитную мешалку. Через 5 мин мешалку выключают, берут кровь для подсчета тромбоцитов. Во всех пробах подсчитывают количество тромбоцитов. о степени индуцированной агрегации судят по разнице в содержании тромбоцитов в крови до введения АДФ ( исходное количество I и через 5 мин после введения АДФ. Индуцированную агрегацию рассчитывают % по формуле--- 100-агрегация А где А - исходное количество тромбоцитов;В - количество тромбоцитов в крови через 5 мин после добавления АДФ. У здоровых людей до венозного застоя индуцированная агрегация тромбоцитов равна 60-70%. В крови, взятой после венозного застоя, при нормальной антиагрегационной активности стенки сосудов агрегация тромбоцитов ниже, чем в крови до застоя, что обусловлено поступлением в кровь простациклина, , стимулированным венозным застоем. При снижении антиагрегационных свойств стенки сосудов агрегация тромбоцитов в крови после венозного застоя по своей величине приближается к агрегации тромбоцитов в крови до застоя. По отношению степени агрегации тромбоцитов до и после венозного застоя судят об антиагрегационных свойствах стенки сосудов. При атеросклерозе, диабете, бжоге, постмастактомическом отеке и других . заболеваниях и состояниях организма функциональная активность стенки сосудов снижена, поэтому разница в степени агрегации тромбоцитов до и после венозного застоя меньше, чем у здоровых. Пример. Здоровый мужчина, 28 лет. В микропипетку, содержащую 20 мкл 3,8%-ного лимоннокислого натрия, набирали 180 мкл свободно вытекающей крови, С помощью сфигмоманометра определили артериальное давление - 110 мм. Подняли давление в ман жетке до 120 мм. Через 3 мин, не сни мая манжетки, из прокола пальца взяли 1.80 мкл крови в микропипетку, содержащую20 мкл 3,14%-ного лимонно кисло-го натрия. Пробы крови поместили в силконированные пробирки. Перемешивают магнитной мешалкой, подсчитали число тромбоцитов в каждой пробирке, после чего в пробирки добавляли АДФ в конечной концентрации 0,01 мг/мл. Включили- магнитную мешалку. Через 5 мин подсчитали число тромбоцитов. После этого высчитали АДФ-индуцированную агрегацию, а также антиагрегационную активность сосудистой стенки. Получены следующие результаты: До пережа- После ne тия сосу- режатия да сосуда АДФ-индуцированная агрегация,% Антиагрегационная активность стенки сосудов, индекс Следовательно предложенный спосо выявил у здорового человека нормаль ную антиагрегационную активность со судисной стенки. П р и м е р 2. Здоровая женщина, 34 года. Систолическое давление 105 мм рт.ст. В микропипетку, содержащую 20 мкл 3,14%-ного лимонн кислого натрия, набирали 180 мкл свободно вытекающей крови. С помощь сфигмоманометра определяли артериал ное давление, затем подняли давлени в манжетке на 10 мм. Через 3 мин, не снимая манжетки, взяли из прокола фаланги пальца 180 мкл крови в микро пипетку, содержащую 20 мкл 3,14%-но го лимоннокислого натрия. Пробы поместили в силиконированные пробирки перемешали. Подсчитали число тромбо цитов в каждой пробирке. После этог в пробирки добавили АДФ в конечной концентрации 0,01 мг/мл. Включили магнитную мешалку. Через 5 мин подсчитали число тромбоцитов. После эт го вычислили АДФ-индуцированную агр гацию, а также антиагрегационную ак тивность сосудистой стенки. Получены следующие результаты: До пережа- После пе тия сосуда режатия сосуда АДФ-индуцированная агрегация тромбоцитов,% 72 Антиагрегационная активность сосудистой стенки, индекс Примерз. Больной атеросклерозом, 52 года. В микропипетку, содержащую 20 мкл 3,14%-ного раствора лимоннокислого натрия, набирали 180 мкл свободно вытекающей крови. С помощью сфигмоманометра определили артериальное давление - 140 мм рт.ст. Подняли давление в манжетке на 10 мм. Через 3 мин, не снимая манжетки, из прокола пальца взяли 180 мкл крови в микропипетку, также содержащую 20 мкл, 3,14%-ного лимоннокислого натрия. Пробы крови поместили в силиконированные пробирки. Перемещали магнитной мешалкой. Подсчитали количество тромбоцитов в каждой пробирке. После чего в пробирки добавляли АДФ в конечной концентрации 0,01 мк/мл. Включили магнитную мешалку. Через 5 мин подсчитали число тромбоцитов. После этого высчитали АДФ-индуцированную агрегацию, а также антиагрегационную активность сосудистой стенки. Получены следующие результаты:До пережа- После Тия сосуда пережатия сосудаАДФ-индуцированная агрегация,% Антиагрегационная активность стенки сосудов, индексТаким образом, предложенный способ выявил снижение антиагрегационной активности стенки сосудов больного. П р и м е р 4. Больной, 58 лет, мужчина. Диагноз: атеросклероз, ищемическая болезнь сердца. В микропипетку, содержащую 20 мкл 3,14%-ного раствора лимоннокислого натрия, набирали 180 мкл свободно вытекающей крови. С помощью сфигмоманометра определили артериальное давление 140 мм рт.ст. Подняли давление в манжетке на 10 мм.Через 4 мин, не. снимая манжетки, из прокола пальца взяли 280 мл крови в микропипетку, также содержащую 20 мкл 3,14%-ного лимоннокислого натрия. Пробы крови поместили в силиконированные пробирки. Перемешали магнитной мешалкой. Подсчитали число тромбоцитов в каждой пробирке. После чего в пробирку добавляют АДФ в конечной концентрации 0,01 мг/мл. Включили магнитную мешалку. Через 5 мин подсчитали число тромбоцитов. После этого насчитали АДФ-индуцированную агрегацию, а

также антиагрегационную активность сосудистой стенки. Получены следующие результаты:

После пере-До пережажатия сосутия сосуда да

84

60

10

1,4

Таким образом, обнаружено снижение антиагрегационной активности сосудистой стенки у больного с ишемической болезнью сердца.

П р и м е р 5. Больная, 51 год. Диагноз: отек левой верхней конечнос ти 1У-ОЙ степени, состояние после комбинированного лечения рака молочной железы. Операция была произведена в 1977 г. В микропипетку, содержащую 20 мкл 3,14%-ного раствора лимон нокислого натрия из здоровой и отечной конечности набирали по 180 мкл свободно вытекающей крови. С помощью сфигмоманометра определяли артериальное давление на здоровой руке 160 мм рт.ст. и на отечной конечности - 130 мм рт.ст. В обеих конечностях подняли давление на 10 мм. Через 3 мин., не снимая манжетки, из прокола пальца взяли 180 мкл крови в микропипетку, содержащую 20 мкл 3,14%ного раствора цитрата натрия. Пробы крови поместили в силиконированные пробирки. Подсчитали число тромбоцитов в каждой пробирке. После этого в пробирки добавили АДФ в конечной концентрации 0,01 мг/мл. Включили магнитную мешалку. Через 5 мин подсчитали число тромбоцитов. Через 20 мин подсчет повторили. Вычислили спонтанную и индуцированную агрегацию, а также антиагрегационную активность сосудистой стенки. Получены следующие результаты:

коДо пережа- После петия сосуда режатия сосуда

АДФ-индуцированная агрегация, % ,73 30 Антиагрегационная активность стенки сосуда, индекс2,4 Конечность с постмастэктомическим отеком

До пережа- После петия сосуда режатия сосуда

АДФ-индуцированная агрегация, % 90 80 Антиагрегационная активность стенки сосуда, индекс1,1

Таким образом, предложенный способ позволил у.становить и количественно характеризовать степень нарушения функционального состояния сосудистой стенки конечности с постастэлтрмическим отеком. Предложенный способ, следовательно, можетявиться индикатором степени реабилитации микроциркуляторных процессов в отечной конечности после операции.

Приведенные.примеры свидетельствуют о том, что предложенный способ может количественно оценить функциональное состояние стенки сосудов у различного контингента больных на малом объеме крови - 0,36 мл, вместо 4,0 мл традиционным методом. Подобное уменьшение расхода крови на одно определение открывает возможность для многократного использования способа в процессе лечения и внедрения способа в терапевтическую, хирургическую, онкологическую и педиатрическую практику.

СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ ФУНКЦИОНАЛЬНОГО СОСТОЯНИЯ СТЕНКИ СОСУДОВ путем исследования крови до и после их пережатия, отличаюцийс я тем, что с целью повышения специфичности способа, в крови, взятой из пальца, определяют АДФ-индукцированную агрегацию тромбоцитов, вычисляют отношение АДФ-индуцированной . агрегации до к после пережатия сосуда конечности и определяют функциональное состояние стенки сосудов по вычисленному соотношению.