Способ диагностики функциональной недостаточности эндометрия при привычном невынашивании беременности и бесплодии Советский патент 1984 года по МПК A61B10/00 

СХ)

ел ел

00

:D 1 Изобретение относится к медицине и может быть использовано при диагностике невынашивания беременностиj бесплодии и последующей патогенетически обоснованной терапии. Известен способ оценки состояния эндотермия путем гистологического исследования fl . Недостатком данного способа является сниженная достоверность из-за выявления повреждения только на уров не клетки (идентифицируются лишь грубые клеточные изменения) и его субъективность. Цель изобретения - повышение достоверности определения функциональной недостаточности эндометрия. Поставленная цель достигается тем, что согласно способу диагностики функциональной недостаточности эндометрия у больных при привычном невьвдашивании беременности и бесплодии путем исследования биоптата эндо метрия, в биоптате эндометрия опреде ляют белковьй, липопротеидньш и гликопротеидньй состав- водорастворимой фракции ткани эндометрия методом электрофореза в полиакриламидном геле и при наличии менее пяти фракци протеинов, трех фракций липопротеинов и трех фракций гликопротеинов устанавливают недостаточность эндометрия . Для анализа белков, липопротеинов и гликопротеинов гомогената ткани эндометрия используют дискэлектрофорез в полиакриламидном геле с системой гелей № 1 по Мауреру С2, Способ осуществляют следующим образом. Биоптат эндометрия получают путем взятия цуга эндометрия хаммеровской кюреткой с передней стенки матки на 7-8 и (или) 21-24 дни цикла. После взятия цуга эндометрия его 10-крат но отмывают в физиологическом раств ре и 5-кратно - в дистиллированной воде. По окончании отмывания ткань гомогенизируют и подвергают центриф гированию при 5-8 тыс. оборотов в минуту в течение 15-30 мин. Исследуемые экстракты эндометрия смешивают с 40%-ной сахарозой 1:1 и нано сят на гель в количестве 0,1-0,2 мл при концентрации белка 1-50 мг/мл. Электрофорез проводят 1,5-2 ч при силе тока 4-5 мА через столбик геля Электрофорез заканчивают, когда ок892рашенная подвижная граница 3-4 мл от нижнего конца трубки. По окончании электрофореза извлекают из трубки. Белки фиксируют в 20-40%-ной трихлоруксусной кислоте 15-30 мин и окрашивают специальными красителями: на белок, липопротеины и гликопротеины. По окончании окрашивания гель подвергают денситометрии и анализирзгют содержание белков, липопротеинов и гликопротеинов, исходя из того, что одной фракции (или одному пику на. денситограмме) соответствует один белок, . Для окрашивания белков применяют краситель-- амидочерный 10В, подготовленньй по следующей прописи: амидочерньй 10В - 0,1 г, безводная уксусная кислота - 100,0 мл, дистиллированная вода до 1000 мл. Столбик с гелем помещают в этот раствор и выдерживают в нем 18-24 ч. После окрашивания столбик геля обесцвечивают в 10%-ной уксусной кислоте 24-48 ч или путем электрофореза в, 5%-ной уксусной кислоте i-2 ч. Для вь(явления липопротеинов применяют окрашивание гелем красителем Судан черный В следующего состава: судан черньй В - 1,2 г, 1н раствор МаОН - 20 мл, дистиллированная .вода - 380 мл, этиловый спирт до 1000 мл. Смесь вьщерживают 48-96 ч при и фильтруют. Продолжителькость окрашивания геля 2-3 ч. Обесцвечивание фона проводят в 50%-ном спирте 18-24 ч. Для выявления гликопротеинов столбики геля -обрабатывают 1%-ным водным раствором йодной кислоты 10-15 мин. Затем промывают проточной .водопроводной водой 20-30 мин и 10-15 мин дистиллированной водой. Столбики геля помещают в реактив Шиффа на 15-30 мин при комнатной температуре. Состав реактива Шнффа: 0,5 г парафуксина растворяют в 15 мл 1н НС1 при помашивании и доводят до 85 мл дистиллированной водой, с растворенньпШ в ней 0,5 г метабисульфита калия. Смесь выдерживают в темноте 24 ч, после чего добавляют г активированного угля в порошке, встряхивают 2-3 мин и дважды фильтруют. Обесцвечивание геля проводят в растворе матебисульфита кахшя (600 мл дистиллированной воды, 30 мл 1%-ного метабисульфита калия, 30 мл 1н НС1) 15-20 мин-и 3 30-40 мин проточной и дистиллирова ной воде. Денситометрию окрашенных столбико геля проводят на приборе производств Carlzeiss jena ГДР. Для этого их помещают в кювету дляденситометрии и записывают в виде графика показатель оптической плотности при длине волны 560 нм. Расчет денситограмм осуществляют по наличию числа пиков и их выраженности (площадь пика). Пики фракций, не отличающиеся от фоновых значений оптической плотности геля, не учитываются. П р. и м е р 1. Больная П. 37 лет страдает привычным невынашиванием беременности. В анамнезе 1 преждевременные роды на 32 неделе беременности и 4 самопроизвольных выкидьппа сроки 8-10 недель беременности. Результаты обследования вне беременности: группа крови - В(Ш), резусположительная, -несовместимости по ре зусу-фактору и системе АВО с кровью мужа не выявлено. Ректальная температура двухфазная, уровень стероидных гармонов в крови в течение менструального цикла в пределах нормы. При гистеросапьпингографии трубы про ходимы. Гистологическое исследование соскоба эндотермия, произведенного на 22 день менструального цикла фаза секреции. У больной на 7 и 24 дни цикла исследовано состояние эндо метрия по предлагаемому способу. Установлена недостаточность гликолипопротеиновой фракции эндометрия, что указывает на его функциональную неполноценность. П р и м е. р 2. Больная К.,,32 го да. В анамнезе 6 самопроизвольных выкидышей в сроки 5-27 недель беременности, 1 преждевременные роды мер 9 вым плодом. Обследование вне беременности: группа крови В(Ш), резус-положительная, несовместимости по резусуфактору и АВО с кровью мужа не выявлено. Ректальная температура двухфазная. Гистология эндометрия на 23 день, менструального цикла - фаза секреции. Исследование биоптата эндометрия предлагаемымспособом на 7 и 22 дни менструального цикла .выявил снижение уровней фракций протеинов, липидопротеинов и гликопротеинов, что свидетельствует о функциональной недостаточности эндометрия. Таким образом, с помощью предлага|емого способа возможно установить функциональную недостаточность эндометрия в тех случаях, когда известный способ (гистологическое исследование) не обнаруживает изменений в эндометрии. Впервые разработан способ диагностики функциональной недостаточности эндометрия в той группе у женщин, страдающих привычным невьшащиванием беременности и бесплодием, в которой установить причину патологического процесса на основании комплекса современных клинико-лабораторных данных не представляется возможным. Предлагаемый способ позволяет диагностировать функциональную недостаточность эндометрия при патологии репродуктивного процесса (привычное невынашивание и бесплодие неясного генеза) и выбрать или провести коррекцию терапии. Правильно подобранная терапия позволяет у 78% жени1ин с привычным невынашиванием пролангировать беременность и получить жизнеспособного новорожденного и у 23 женткн с бесплодием наступила беременность.

СПОСОБ ДИАГНОСТИКИ ФУНКЦИОНАЛЬНОЙ НЕДОСТАТОЧНОСТИ ЭНДОМЕТРИЯ у больных при привычном невынашивании беременности и бесплодии путем исследования биоптата эндометрия, отлич-ающийся тем, что, с целью повышения достоверности получаемых результатов, определяют белковый, липопротеидный и гликопротеидньй состав водорастворимой фракции ткани эндометрия методом электрофореза в полиакриламидном геле и при наличии менее пяти фракций протеинов, трех фракций липопротеинов и трех фракций гликопротеинов устанавливают недостаточность эндометрия. Ш