Способ определения жизнеспособности яиц цестод Советский патент 1984 года по МПК A61B10/00 G01N33/48 

со оо оо IND

Изобретение относится к ветернна рии, в частности к определению жизн способности яиц гельминтов. Известен способ определения жи:1не способности яиц тениид, включающий воздействие на них 1%-ного раствора сернистого натрия LlJ. Недостатком этого способа является непригодность его для определени жизнеспособности яиц других видов цестод, как эхинококков. Известен также способ определени Жизнеспособности яиц эхинококков, включаняций активизацию яиц путем ин кубации их при 36-40°С в водном раст воре, содержащем пищеварительный фермент - панкреатин, соду пищевую и овечью желчь 2j. Недостатком данного способа явля ется низкое содержание освободивших ся и подвижных онкосфер, длительность воздействия на яйца, сложность процедуры активирования с применение центрифугирования пробирок для осаждения яиц. Целью изобретения является повыше ние точности способа и его ускорение Поставленная цель достигается тем что проводят активизацию яиц путем инкубации их при 36-40 С в водном растворе, содержащем шпцеварительный фермент - панкреатин, соду пищевую и овечью желчь, перед инкубацией яйца цестод помещают в 1,8-2,2%-ный раствор едкого калия или соляной кислоты на 8-12 мин, Затем инкубируют при 36-40.С,промывают,, добавляют водный раствор, содержащий панкреатин 0,8-1,2JOвeчью желчь 18-22, соду пищевую 1,1-1,5,и вновь инкубируют в течение 10 мни, после чего пробу просматривают под микроскопом. Пример 1. Членики эхинококков с помощью препаровальных игл освобождают от яиц, к последним добавляют дистиллированную воду и полученную суспензию яиц с помощью глазной пипетки вливают в луночку предметного стекла в количестве до 2-3 тыс.яиц. После этого лишняя вода удаляется с помощью фильтровальной бумаги и в луночку добавляется с помощью капельницы или глазной пипетки 1012 капель 2%-ного водного раствора едкого калия. Предметное стекло поме щают в термостат и выдерживают там при 38 О в течение 10 мин. По истечении указанного времени пробу вынимают из термостата и яйца дважды промывают. Для этого раствор осторожно удаляют фильтровальной бумагой так, чтобы не захватить яйца эхинококков и часть освободившихся инкосфер, затем вливают в лунку с помощью капельницы 10-12 капель дистиллированной воды, снова удаляют с помощью фильтровальной бумаги, снова добавляют воду в лунку и вновь удаляют. Под микроскопом можно пронабл(дать освобожденные онкосферы яиц в результате действия 2%-ного раствора едкого калия. После этого в луночки вливают раствор, содержащий пищеварительн.1е секреты, на основе воды, соду пищевую и кишечные ферменты, а именно,%: панкреатин 1, желчь овечья 20 и сода пищевая 1,3, вода дистиллированная остальное, помещают в термостат и выдерживают там при 38 С в течение 10 мин. После этого пробу вновь вынимают из термостата. Для подсчета освободившихся онкосфер часть осадка суспензии переносится на другое предметное стекло, после чего ведется просмотр при малом (объектив X 8) и больщом (объектив х 40) увеличении микроскопа на пред.мет наличия онкосфер и их подвижности. При данном способе освобождается от оболочек яиц 98% онкосфер, из них 79% - подвижных. Пример 2. На шести предметных стеклах с лунками или часовых стеклах поместили с помощью глазной пипетки по 2-3 тыс. зрелых свежевыделенных яиц эхинококков, хранившихся в физрастворе в холодильнике при температуре воздуха . Две пробы яиц были опытными (1 и 2), остальш ге четыре (3-6) - контрольные. В качестве активизирующих сред приготовили три раствора. Раствор 1 - 2%-ный водный раствор щелочи КОН. Раствор 2 имеет следующий состав на дистиллированной воде: сода пищевая (NaHCO ) 1,3%, панкреатин меицинский 1% ,желчь овечья 4 кап./ 1 мл раствора. .Раствор 3 .имеет со едующий состав: сода пищевая 1,3%, панкреатин медицинский 1%, желчь овечья 4 кап./1 мл, олестерин (твин - 80) 0,05%, трипсин 0,4%. Раствор 4 - I %-ный воднь1й раствор сернистого натрия. В лунки предметных стекол двух опытных проб 1 и 2 добавили с помощью капельницы 10 капель раствора 1 . Две контрольные пробы 3 и 4 заполнили 10 каплями раствора 3,конт рольные пробы 5 и 6 заполняли 10 каплями раствора 4. После чего все 6 проб яиц эхинококков поместили в термостат при температуре воздуха 37-38 С. Через 8-10 мин все пробы вынули из термостата. В опытных пробах 1-2 жидкость уда лили с помощью фильтровальной бумаги так,чтобы яйца остались в осадке. Затем лунки заполнили каплями дистил лированной воды и снова удалили над осадсчную часть жидкости. Промывание культуры яиц э инококков повторили 2-3 раза. В контрольных пробах отмывание яиц не проводилось. Результаты воздействия сред наблю дали под малым (х8) и большим (объек тив X 20) увеличением микроскопа. После отмьюания яиц в опытные про бы добавили по 10-12 капель раствора 2. В контрольных пробах 2 и 4 и 5 и 6 оставались прежние активизирующие растворы 3 и 4. Все пробы яиц E.granulosus снова поместили в термостат при режиме 37-38°С продолжительностью на 10 мин По истечении указанной экспозиции пробы яиц эхинококков достали из термостата и наблюдали под микроскопом. Путем подсчета количества вылупленных и подвижных онкосфер учитывали эффективность нового и известных способов активизации яиц. При наличии в пробах онкосфер, в том числе; и активных, часть осад ка с помощью глазной пипетки перено ,сили в другую лунку и исследовали на процентное содержание онкосфер, а также на наличие подвижных зароды дьшей. В случае отсутствия или мало го количества вьщеленньк онкосфер пробы с яйцами снова помещали в тер мостат на 10-15 мин, после чего их исследовали прд микроскопом. При необходимости термостатирование культур яиц повторяли 2-3 раза, общей продолжительностью до 90 мин. Пример 3. На четырех предметных стеклах с лунками или на часовых стеклах поместили с помощью глазной пипетки по 2-3 тыс. свежевыделенных яиц. М. мультицепс, выдавленных из зрелого членика цестоды, хранившегося в физрастворе при температуре воздуха 5 С в холодильнике. Две пробы заведомо живых яиц были подопытными, две служили контролем. В качестве активизирующих сред использовали три раствора. Раствор 1. 2%-ный водньй раствор соляной кислоты (НС). Раствор 2 имеет следующий состав, г/%: сода пищевая (NaHCO) 1,3, панкреатин медицинский 1,2, 4 кап 1 мл раствора дицинский 1,2, желчь овечья 4 кап./ 1 мл раствора, вода дистиллированная остальное. Раствор 3, 1%-ный водный раствор сернистого натрия. В лунки предметных стекол опытных проб 1. и 2 добавили с помощью капельницы по 10 капель раствора 1. Две контрольные пробы 3 и 4 заполнили 10 каплями раствора 3. Затем 4 пробы яиц поместили в термостат при 38 С. Через 9-10 мин все пробы вынули из термостата. В опытах 1 и 2 с помощью фильтровальной бумаги жидкость осторожно удалили так, чтобы яйца остались в осадке. Затем лунки заполнили несколькими каплями дистил лированной воды и снова удалили надосадочную часть жидкостей. Отмывание культуры яиц М,мультицепс повторили дважды, В контрольных пробах отмьшание яиц не проводили. Результаты воздействия сред наблюдали под малым (объектив х 8) и большим (объектив X 20) увеличением микроскопа. После отмьшания яиц в опытные пробы добавили по 10-13 капель раствора 2, В контрольных пробах оставался активирующий раствор 3, Все пробы яиц М,мультицепс снова поместили в термостат при температуре воздуха 37-38 С продолжительностью на 9-10 мин. По истечении указанной экспозиции пробы яиц достали из термостата и наблюдали при малом и большом увеличении микроскопа. Предложенный способ определения жизнеспособности яиц цсстод повьпиает эффективность активизации яиц и,естод, достигается выход 98% освободипшихся онкосфер, из них 80% подвижных, или

5J093324«

в среднем активность повышается в применяться для определения жиздва раза; ускоряет процесс определе неспособности яиц цестод для ния жизнеспособности яиц в 4,5 раза; выявления овоцидных препара предложенный способ может с--успехом тов.

СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ ЖИЗНЕСПОСОБНОСТИ ЯИЦ ЦЕСТОД, включающий активацию яиц путем инкубации их при 36-40 С в водном растворе, содержащем пип1еварительный фермент - панкреатин, соду пищевую и овечью желчь, отличающийся тем, что,с целью повышения точности способа и его ускорения, перед инкубацией яйца цестод помещают в 1,8-2,2%-ный раствор едкого калия или соляной кислоты на 812 мин. (Л