Способ определения жизнеспособности неполовозрелых форм цестод Советский патент 1987 года по МПК A61B10/00 

1i:i37057

Изобретение относится к ветеринакж

ии, в частности к способам опредеения жизнеспособности лиц и ЛИЧРШОК ельминтов, а также может быть исользовано в медицине.

Цель изобретения - повышение точ- )ости способа, его упрощение и ускоение ,

Способ осуществляют следующим обазом .

Пример 1. Для активизации яиц цестод применяют 0,2%-ньп водный раствор едкого калия или 2%-ный водный раствор соляной кислоты и активизирующий раствор, имеющий следуюий состав пищеварительных ферментов на дистиллированной воде, г, %., панкреатин медицинский 12, сода пищевая 1,3, желчь овечья 20, Раствор рекомендуется использовать не ранее чем через 2 ч после приготовления. Активность его сохраняется 10 ч при комнатной температуре и 36 ч при хранении в холодильнике при температуре воздуха 5-7 С,

Зрелые членики цестоды М. multi- ceps с помощью препаровальных игл освобождают от яиц, к яйцам добавляют воду и получают суспензию яиц, хранящуюся в холодильнике в физрастворе при температуре воздуха 5 С.

На предметное стекло с лункой помещают с 1 каплей воды 100-150 яиц М. multiceps, затем вливают 1 каплю 2%-ного водного раствора соляной кислоты и ставят в термостат при температуре воздуха +62 С. Через 2 мин пробу дост ают и добавляют в нее 6 капель активизирующего раствора и снова помещают в термостат при той же температуре на 2,5 мин. Затем пробу достают и смотрят под микроскопом (объектив 8, окуляр 5) на наличие освободившихся от оболочек он- косфер и их подвижности.

При данном способе освобождается от оболочек 100% онкосфер, подвижность их 100%-ная,

В качестве контроля берут пробу с яйцами М. mu.ticeps и подвергают воздействию О, 2%-ного водного раствора едкого калия или 2%-ного водного раствора соляной кислоты и вместо ак- тив изирующего раствора вливают 6 капель физраствора, по аналогии с опытной группой инкубируют в терг-шстате при температуре воздуха -62 С с экспозицией 2 и 2,5 мин, после чет О иг-следуют под микроскопом. В результате действия раствора 1 яйца были слегка потемневшими, онкосфер не обнаружено.

П р и М е р 2. Зрелые яйца М, mul- ticcps помещают на 2 предметных стекла с лункой (по 40-60 экземпляров). В одну пробу вливают поочередно 1 каплю 2%-ного раствора соляной кислоты, затем инкубируют в термостате, добавляют 5-6 капель активизирующего раствора и снова помещают при той же температуре с экспозицией 13 мин, после чего пробы снова достают из термостата и смотрят под микроскопом.. Пробы помещают в термостат соответственно при следуюш;их температурах воздуха: 47 С - с экспозицией 2 и 3 мин 54 С - 2 и 3 мин; 83°С- 2 и 1,5 мин; 84°С - 2 и 1,5 мин; 107°С - 1 мин.

Результаты показали, что начиная

оо

с 59 с до 84 с при соответствующей экспозиции вылупляемость и подвижность яиц цестод 100%-ные.

I

Пример 3. Для инкубации про- тосколексов цестод применяют тот же

активизирующий раствор пищеварительных ферментов.

На предметное стекло с лункой вливают с 1-2 каплями суспензии прото- сколексов эхинококков (40-60 экземпляров) при комнатной температуре воздуха, зародышевые капсулы с про- тосколексами разрывают с помощью препаровальных игл. Добавляют 5-6 капель активизирующего раствора и помещают предметное стекло в термостат при 62 С на 1 мин. Затем пробу вынимают из термостата и смотрят под микроскопом МБС (объектив 2 и 4, окуляр х8) на наличие подвижных и вывернутых протосколексов.

При данном способе активно двигается и выворачивается 100% протосколексов эхинококков.

В качестве контроля берут часовое стекло с 1-2 каплями (40-60 экземпляров) заведомо мертвых протосколексов. Убивают их путем нагревания часового стекла на спиртовке в течение 1-2 мин до кипения. Затем в пробу вливают 5-8 капель активизирующего раствора

и помещают з термостат при 62°С на 1 мин i5 с. Затем пробу вынимают и смотрят под микроскопом. В результате отмечается отсутствие подвижных и вывернутых протосколексов.

Прим ер 4, На предметное стекло с лункой помещают с 1-2 каплями суспензии 40-60 протосколексов эхинококков, вливают 5-8 капель активизи- рующего раствора и ставят в термостат при +178 с на 5 с, после чего пробу смотрят под микроскопом. По данному способу достигаются 100%-ные подвижность и выворачиваемость прото- сколексов.

В качестве контрольной пробы 1 берут предметное стекло с лункой, помещают туда с 1-2 каплями суспензии 40-60 заведомо мертвых протосколек- сов эхинококков, убитых кипячением. Затем вливают в лунку активизирующий раствор и пробу ставят в термостат при +178°С. Через 5 с предметное стекло с лункой достают из термостата и протосколексы наблюдают под микроскопом на подвижность. В результате в пробе 1 протосколексы деформированы и неподвижны, подвижных и вывернутых экземпляров не найдено.

В качестве контрольной пробы 2 берут предметное стекло с лункой, помещают туда 40-60 экземпляров протосколексов, заливают физраствором и стаСоставитель Е.Дмитриченко Редактор А.Лежнина Техред Л.Олийнык

Заказ 4068/5

Тираж 594Подписное

ВНИИПИ Государственного комитета СССР

по делам изобретений и открытий 113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., д. 4/5

Производственно-полиграфическое предприятие, г. Ужгород, ул. Проектная, 4.

вят в термостат при +178°С. Через 5 пробу вынимают из термостата и смотрят под микроскопом. В результате в пробе 2 протосколексы остаются без изменения, подвижных и вывернутых экземпляров не обнаружено.

Предлагаемый способ можно применя в лабораторной практике для определения максимального срока выживаемости яиц цестод во внешней среде, а так же для культивирования ларвальных стдий цестод.

Формула изобретения

Способ определения жизнеспособности неполовозрелых форм цестод, включающий предварительную обработку их водным раствором едкого калия или соляной кислоты с последующей обработкой активизирующим раствором и. инкубацию, отличающийся тем, что, с целью повышения точности способа, его упрощения и ускорения, инкубацию проводят при температуре окружающей среды от 47 до 178°С в течение 5-180 с.

Корректор Л.Бескид

Изобретение относится к ветеринарии, а также может быть использовано в медицине. Цель изобретения - повьшение точности способа, его упрощение и ускорение. Проводят предварительную обработку неполовозрелых форм цестод 0,2%-ным водным раствором .едкого калия или 2%-ным водным раствором соляной кислоты, затем инкубируют в активизирующем растворе, содержащем панкреатин медицинский, соду пищевую, желчь овечью и дистиллированную воду при температуре окружающей среды от 47- до 178 С, вьщерживая их при этих температурах 5-180 с. Способ позволяет достигнуть 100%-ного освобождения яиц от оболочек, I00%-ной подвижности онкосфер, а также 100%-ной подвижности и выворачи- ваемости протосколексов цестод. fi iS (Л