СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ 6-П-КУМАРОИЛАУКУБИНА Советский патент 1995 года по МПК A61K35/78 

Изобретение относится к химико-фармацевтической промышленности и касается способа получения биологически активных веществ из лекарственного растительного сырья.

Известен способ получения иридоидной фракции, проявляющей свойство повышать физическую работоспособность в условиях стресса, содержащей в качестве главного компонента 6-п-кумароилаукубин, заключающийся в том, что промытый органическими растворителями метанольный экстракт надземной части растения Verbascum songaricum Schrenk (коровяк джунгарский) экстрагируют этилацетатом, этилацетатный экстракт упаривают, остаток растворяют в воде, водный раствор фильтруют через слой окиси алюминия и упаривают.

Однако указанный способ не обеспечивает получения вещества, обладающего достаточно высокой фармакологической активностью.

Целью изобретения является повышение фармакологической активности и расширение сырьевой базы.

Поставленная цель достигается способом получения 6-п-кумароилаукубина путем экстракции надземной части растения рода Verbascum метанолом с последующим растворением упаренного экстракта в воде, промывкой последовательно бензолом, эфиром, хлороформом, очисткой на колонке с сорбентом, в котором отличие состоит в том, что экстракции подвергают коровяк красивый (Verbascum speciosum Schrenk), экстракт после очистки окисью алюминия хроматографируют на колонке с полиамидом, затем на колонке с силикагелем в системе хлороформ метанол (4:1) при соотношении вещества и носителя 1:40.

П р и м е р. 1,5 кг сухой измельченной надземной части коровяка красивого (Verbascum speciosum) исчерпывающе экстрагируют метиловым спиртом (8 х 4 л). Объединенный метанольный экстракт концентрируют при пониженном давлении до объема 0,3 л, разбавляют водой до объема 0,5 л и промывают последовательно бензолом (4 х 0,25 л), эфиром (8 х 0,25 л), хлороформом (4 х 0,25 л) и пропускают через слой (высотой 30 см, диаметром 7,5 см) нейтральной окиси алюминия, предварительно промытой водой. Затем окись алюминия промывают водой (150 мл), элюаты объединяют, упаривают при пониженном давлении до объема 50 мл и помещают на колонку с полиамидом Woelm (65 см х 4,5 см). Колонку промывают водой, собирают фракции по 50 мл. Фракции N 3-8, содержащие вещество с R_f 0,80 (хроматография на бумаге марки С в системе н-бутиловый спирт уксусная кислота, 4: 1:5, обнаружитель бензидиновый реагент), объединяют и упаривают при пониженном давлении досуха. Остаток (2,5 г) растворяют в 4 мл метилового спирта, смешивают с 20 г силикагеля и помещают на колонку с 80 г силикагеля (марки КСК, 70/230 меш) в системе растворителей хлороформ метанол (4:1). Колонку промывают 3,5 л смеси той же системы. Элюат упаривают при пониженном давлении досуха. Получают 1,95 г (0,13% от веса растительного сырья) светло-желтого порошка с т.пл. 114-115^оС, R_f 0,80, [ α]_D²¹ 125^о (с 0,5, метиловый спирт.

УФ-спектр (EtOH λ_макс): 206, 219, 310 нм.

Индивидуальность вещества подтверждается масс-спектрометрией, переведением в гексаацетат и щелочным гидролизом.

Биологическое действие 6-п-кумароилаукубина испытывали на крысах, подвергнутых комбинированному стрессорному воздействию физической деятельности в условиях антиортостатической нагрузки и гипотермии.

Аналогами по биологическому действию были избраны фракция иридоидов из Verbascum songaricum Schrenk и широко применяемые лекарственные средства: адаптоген растительного происхождения экстракт элеутерококка, а также синтетические стимуляторы психической и физической деятельности организма фенамин и пиридрол.

О действии препаратов на выносливость к комбинированному стрессу (сочетание мышечной работы, антиортоста- тической нагрузки и гипотермии) судили по разнице в максимальной длительности физической деятельности фиксированных (вниз головой) за хвост над поверхностью воды (18^оС) интактных и опытных крыс, вынужденных совершать беспрерывные плавательные движения. Длительность физической деятельности определяли в минутах от начала опыта до наступления полного мышечного утомления животных, в результате чего они гибли, захлебываясь водой.

6-п-Кумароилаукубин и сравниваемые с ним фракция иридоидов, элеутерококк (упаренный досуха спиртовой экстракт), фенамин и пиридрол растворяли отдельно в 0,5 мл дистиллированной воды и вводили внутрибрюшинно подкожно однократно (за 30 мин до опыта) или двукратно (за 17 ч и за 30 мин до опыта) крысам весом 130-150 г в диапазоне доз 0,5-100 мг сухого препарата на 1 кг живого веса. Контрольным крысам вводили 0,5 мл дистиллированной воды. Результаты опытов приведены в таблице.

Как видно из таблицы, 6-п-кумароилаукубин увеличивает физическую выносливость как при внутрибрюшинном, так и при подкожном применении. Максимальная эффективная доза равна 2,5 мг/кг, подкожное двухразовое введение которой приводит к увеличению выносливости к стрессу на 52% а внутрибрюшинное введение на 42%
Фракция иридоидов и экстракт элеутерококка положительно действуют лишь при двукратном применении. Максимальная эффективная доза при подкожном введении для иридоидов составляет 30 мг/кг, а для элеутерококка 50 мг/кг с активностью для обоих аналогов, равной 40% Активность пиридрола и фенамина (42 и 47% соответственно) выявляется лишь при однократном внутрибрюшинном применении в дозах 1,25 и 2,0 мг/кг.

Острая суточная токсичность 6-п-кумароилаукубина и аналогов изучена в опытах на белых мышах весом 20-22 г. Препараты растворяют в 0,2 мл дистиллированной воды и вводят внутрибрюшинно. На каждую дозу используют 6 животных, которых помещают в клетки размером 22 х 35 см при температуре 22^оС. Через сутки по Литчфилду-Уилкоксону подсчитывают ЛД₅₀ препаратов, которая для 6-п-кумароилаукубина составляет 2700 (2432-2897) мг/кг, для фракции иридоидов 12200 (11844-12566) мг/кг, для экстракта элеутерококка 5600 (4409-7112) мг/кг. Отношение ЛД₅₀ препаратов к их максимальной эффективной дозе (ЛД₅₀/ЭД_макс), указывающее во сколько раз эффективная доза отстает от токсической, дает следующий ряд: для 6-п-кумароилаукубина 1080, для фракции иридоидов 407, для экстракта элеутерококка 112, для пиридрола 93, фенамина 68. Различие токсичности между 6-п-кумароилаукубином и аналогами по действию статически значимо (Р < 0,01).

Таким образом, предлагаемый способ позволяет получить вещество, обладающее высокой фармакологической активностью при повышении физической работоспособности и выносливости организма в условиях комбинированного стресса. Оно выгодно отличается от всех контрольных препаратов большей силой действия, меньшей относительной токсичностью, эффективностью при различных путях и способах введения, а также по сравнению с синтетическими стимуляторами дополнительно отсутствием симпатомиметических эффектов и влияния на адренорецепторы.

СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ 6-П-КУМАРОИЛАУКУБИНА путем экстракции надземной части растений рода Verbascum метанолом с последующим растворением упаренного экстракта в воде, промывкой последовательно бензолом, эфиром, хлороформом, очисткой на колонке с сорбентом, отличающийся тем, что, с целью повышения фармакологической активности и расширения сырьевой базы, экстракции подвергают коровяк красивый (Verbascum speciosum Schrenk), экстракт после очистки окисью алюминия хроматографируют на колонке с полиамидом, затем на колонке с силикагелем в системе хлороформ метанол (4 1) при соотношении выщества и носителя 1 40.