СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ 6-α-(ТРАНС-ЦИННАМОИЛ)РАМНОПИРАНОЗИЛАУКУБИНА Советский патент 1996 года по МПК A61K35/78 

Изобретение относится к химико-фармацевтической промышленности и касается способа получения биологически активных веществ из лекарственного растительного сырья.

Известен способ получения фракции иридоидов, обладающей способностью повышать физическую работоспособность, заключающийся в том, что промытый органическими растворителями водный раствор метанольного экстракта надземной части растения Verbascum songaricum Schrenk экстрагируют этилацетатом, этилацетатный экстракт упаривают, остаток растворяют в воде, водный раствор фильтруют через слой окиси алюминия и упаривают.

Однако указанный способ не обеспечивает получения вещества, обладающего высокой фармакологической активностью.

Целью изобретения является повышение фармакологической активности и расширение сырьевой базы.

Поставленная цель достигается способом получения 6- α-(транс-циннамоил)рамнопиранозилаукубина путем экстракции надземной части растения рода Verbascum метанолом с последующим растворением в воде упаренного экстракта, промывкой последовательно бензолом, эфиром, хлороформом, очисткой на колонке с окисью алюминия и упариванием, в котором в качестве источника растительного сырья используют Verbascum laxum Filar.et.jav. водный раствор экстракта которого дополнительно промывают этилацетатом и после пропускания через слой окиси алюминия хроматографируют на колонке с полиамидом, затем на колонке с силикагелем в системе хлороформ метанол (4:1) при соотношении вещества и носителя 1:50.

П р и м е р. Сухую измельченную надземную часть (0,25 кг) растения Verbascum laxum Filar. et. jav. настаивают с метиловым спиртом (6 х 0,8 л). Объединенные метанольные вытяжки упаривают, остаток (50 г смолки) растворяют в воде (200 мл), промывают последовательно бензолом (4 х 50 мл), эфиром (4 х 50 мл), хлороформом (4 х 50 мл), этилацетатом (6 х 50 мл) и водный раствор пропускают через слой (800 г) нейтральной окиси алюминия, предварительно промытой водой. Затем окись алюминия промывают водой до отрицательной реакции на иридоиды, объединенные водные элюаты упаривают при пониженном давлении до объема 100 мл, помещают на колонку с полиамидом (4,5 см х 65 см), колонку промывают водой, собирая фракции по 50 мл, которые анализируют методом бумажной хроматографии. Фракции N 4-9, содержащие вещество с R_f 0,87 (БХ, бумага марки С, система растворителей: н-бутанол: уксусная кислота:вода, 4:1: 5, обнаружитель бензидиновый реактив), объединяют, упаривают при пониженном давлении досуха и остаток (1 г) хроматографируют на колонке с 50 г силикагеля (КСК, 70/230 меш) в системе хлороформ-метанол (4:1). Из элюата получают 0,358 г (0,14% от веса растительного сырья) 6-α-(транс-циннамоил)рамнопиранозила- укубина в виде белого аморфного порошка, проявляющегося на хроматограмме единичным пятном с R_f 0,87 (БХ).

Найдено, С 58,17; Н 5,83.

С₃₀Н₃₈О₁₄.

Вычислено, C 57,86;H 6,15.

Индивидуальность вещества подтверждена масс-спектрометрией, переведением в гептаацетат и щелочным гидролизом.

Биологическое действие 6-α -(транс-циннамоил)рамнопиранозилаукубина испытывали на крысах, подвергнутых комбинированному стрессорному воздействию физической деятельности в условиях антиортостатической нагрузки, гипоксическо-гиперкапническому стрессу и ряду других фармакологических тестов. Аналогами по действию были выбраны фракция иридоидов из Verbascum songaricum Schrenk и широко применяемые лекарственные средства адаптоген растительного происхождения экстракт элеутерококка, а также синтетические стимуляторы психической и физической деятельности организма фенамин и пиридрол. При исследовании антигипоксических свойств 6 -α -(транс-циннамоил)рамнопиранозилаукубин сравнивали также с более специфическим фармакологическим средством пирацетамом, обладающим антигипоксическим действием. О действии препаратов на выносливость к комбинированному стрессу (сочетание мышечной работы, антиортостатической нагрузки и гипотермии) судили по разнице в максимальной длительности физической деятельности фиксированных вниз головой за хвост над поверхностью воды с температурой 18^оС интактных и опытных крыс, вынужденных совершать беспрерывные плавательные движения. Длительность физической деятельности определяли в минутах от начала опыта до наступления полного мышечного утомления животных, в результате чего они гибли, захлебываясь водой.

6-α-(транс-Циннамоил)рамнопиранозилаукубин и сравниваемые с ним фракцию иридоидов, экстракт элеутерококка (упаренный досуха спиртовый экстракт), фенамин и пиридрол растворяли отдельно в 0,5 мл дистиллированной воды и вводили внутрибрюшинно, подкожно или per os однократно (за 30 мин до опыта) или двукратно (за 17 ч и за 30 мин до опыта) крысам весом 130-150 г в диапазоне доз от 0,5 мг до 100 мг сухого препарата на 1 кг живого веса. Контрольным крысам вводили 0,5 мл дистиллированной воды. Результаты опытов приведены в табл. 1.

Как видно из табл. 1, стимулирующее действие 6-α-(транс-циннамоил)рамнопиранозилаукубина проявляется как при однократном, так и при двукратном введении. Максимальная эффективная доза равна 10 мг/кг, двукратное введение которой приводит к увеличению выносливости к стрессу при внутрибрюшинном применении на 95% при подкожном на 80% а через рот на 31% Однократное введение 6-α-(транс-циннамоил)рамнопиранозилаукубина эффективно лишь при подкожном применении. При этом максимальное повышение работоспособности (на 70%) также отмечено в дозе 10 мг/кг.

В ряду аналогов по действию фракция иридоидов положительно действует лишь при двукратном введении. В дозе 30 мг/кг максимальный эффект при подкожном применении равен 40% а внутрибрюшинно 34% Эффективная доза элеутерококка при его подкожном двукратном введении равняется 50 мг/кг, при которой выносливость увеличивается на 40% Активность пиридрола и фенамина (42 и 47%) выявляется при внутрибрюшинном применении в дозах 1,25 и 2 мг/кг соответственно. Как однократное введение фракции иридоидов и экстракта элеутерококка, так и двукратное введение фенамина и пиридрола не приводят к увеличению работоспособности крыс в заданных условиях. Аналоги неэффективны и при применении через рот.

В другой серии опытов изучалось действие 6-α-(транс-циннамоил)рамнопиранозилаукубина на выносливость к гипоксическо-гиперкапническому стрессу (сочетание нарастающего недостатка О₂ и избытка СО₂). Об этом судили по разнице в длительности выносливости интактных и опытных мышей, находящихся в герметически замкнутой камере при температуре окружающей среды, равной 22^оС. Длительность выживаемости определяли в минутах от начала опыта до наступления гибели животных. 6- α-(транс-Циннамоил)рамнопиранозилауку- бин и сравниваемые с ним экстракт элеутерококка и пирацетам растворяли отдельно в 0,2 мл дистиллированной воды и вводили подкожно, внутрибрюшинно или per os однократно (за 15 мин до опыта) или двукратно (за 17 ч и за 15 мин до опыта) мышам весом 19-20 г в диапазоне доз от 2 до 2000 мг сухого препарата на 1 кг живого веса. Контрольным мышам вводили 0,2 мл дистиллированной воды. Результаты опытов приведены в табл. 2.

Как видно из табл. 2, максимальная эффективная доза 6- α-(трансциннамоил)рамнопиранозилаукубина равна 10 мг/кг, двукратное подкожное введение которой приводит к увеличению устойчивости к гипоксическо-гиперкапническому стреccу на 29% Экстракт элеутерококка не увеличивает устойчивости мышей к стрессу. Пирацетам увеличивает выносливость животных при данном виде воздействия при однократном внутрибрюшинном введении на 18%
Острую токсичность 6-α-(транс-циннамоил)рамнопиранозилаукубина, фракции иридоидов, экстракта элеутерококка, пиридрола и фенамина изучали в опытах на белых мышах весом 20-22 г. Препараты растворяли в 0,2 мл воды и вводили внутрибрюшинно мышам. На каждую дозу использовали 6 животных, которых помещали в клетки размером 22х32 см при температуре 22^оС. Через сутки по Литчфильду-Уилкоксону подсчитывали ЛД₅₀ препаратов, которая для 6-α-(транс-циннамоил)рамнопиранозилаукубина составляет 8700 (8309-9109) мг/кг, для фракции иридоидов 12200 (11844-12566) мг/кг, для экстракта элеутерококка 5600 (4409-7112) мг/кг, для фенамина 137 (126-149) мг/кг, для пиридрола 117 (96-143) мг/кг.

Отношение ЛД₅₀ препаратов к их максимально эффективной дозе (ЛД₅₀/ЭД_макс), указывающее, во сколько раз эффективная доза меньше токсической, дает следующий ряд: для 6-α-(транс-циннамоил)рамнопиранозилаукубина 870, для фракции иридоидов Verbascum songaricum Schrenk 407, для экстракта элеутерококка 112, для пиридрола 93, для фенамина 68. Различие токсичности между 6-α-(транс-циннамоил)рамнопиранозилаукубина и аналогами по действию статистически значимо (Р < 0,01).

Таким образом, предлагаемый способ позволяет получить вещество, обладающее более высокой фармакологической активностью.

(57) ТЕКСТ РЕФЕРАТА ОТСУТСТВУЕТ

СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ 6-α-(ТРАНС-ЦИННАМОИЛ)РАМНОПИРАНОЗИЛАУКУБИНА путем экстракции надземной части растения рода Verbascum метанолом с последующим растворением в воде упаренного экстракта, промывкой последовательно бензолом, эфиром, хлороформом, очисткой на колонке с окисью алюминия и упариванием, отличающийся тем, что, с целью повышения фармакологической активности и расширения сырьевой базы, в качестве источника растительного сырья используют Verbascum laxum Filar. et jav., водный раствор экстракта которого дополнительно промывают этилацетатом и после пропускания через слой окиси алюминия хроматографируют на колонке с полиамидом, затем на колонке с силикагелем в системе хлороформ-метанол (4:1) при соотношении вещества и носителя 1:50.