Способ исследования осмотической резистентности эритроцитов Советский патент 1984 года по МПК G01N33/48 

о со

4

СО Изобретение относится к биологии и медицине, в частности гематологии, и может найти применение для изучения состояния консервированных эритроцитов, используемых для трансфузий, а также для диагностики многих заболеваний. Определение осмотической резистентности эритроцитов служит мерой повреждающего воздействия на клетки различных внешних факторов, например фармакологических средств, различных консерватовг обеспечиваю1цих сохранность клеток вне организма, лучевых воздействий, низких температур и т.-п. . Известен способ исследования амот ческой резистентности эритроцитов fl Недостатком данного способа является отсутствие возможности оценить динамику разрушения клетки. Известен также способ исследования амотической резистентности Эритроцитов путем измерения степени гемолиза эритроцитов 2 . Однако известный способ характеризуется невозможностью наблюдения кинетики процесса осмотического гeмгJЛизa. Цель изобретения - обеспечение во-можности наблюдения кинетики проЦ сса. Поставленная цель .достигается гм, что согласно способу исследования осмотической резистентности эритроцитов путем измерения степени гемолиза эритроцитов, взвесь эритро|цитов смешивают с гипотоническим раствором непосредственно в,.кювете спектрофотометра, инкубируют смесь, одновременно регистрируют оптическую плотность при длине волны 650 ими по изменению оптической плотности в зависимости от времени инкубации определяют осмотическую резистивность эритроцитов. Способ осуществлшот следующим образом. Готовят основной раствор Nace с рН 7,4, который по своей осмотическо концентрации соответствует 10% Nace . Из этого основного раствора готовят ряд гипотонических растворов NaCK . Измерения проводят в кювете с длиной оптического хода лучей 1 -см, которая термостатируется при 20°С. Взвесь эритроцитов непосредственно в кювете спектрофотометра смешивают с гипотоническим раствором таким образом, что&л исходная оптическая плотность клеточной взвеси составляла 1,0-1,2 при длине волны 650 нм-, сразу же регистрируют кривую зависимости оптическая плотность-время, по которой судят о кинетике и длительности осмо тического гемолиза. Степень гемолиза эритроцитов для каждого гипотонического раствора определяют по обычному тройному правилу, зная при этом конечную оптическую плотность смеси. . За 100%-ный гемолиз принимают показание оптической плотности взвеси эритроцитов с 0,1%-ным раствором Nc4Cg , а за 0% гемолиза; - с 0,9%r/dti Пример. Для определения осмотическбй резистентности эритроцитов готовят основной раствор .М«Се рН 7,4 г: NaCl180,00 Na2HP04 27,31 2Н-04,86 Н20 диет. 2000.00 Осмотическая концентрация этого раствора соответствует 10% NaCf . Разведением готовят гипотонические растворы ,%: 0,85; О,7; 0,5; 0,3 и 0,1%. Для анализа берут консервированную донорскую кровь с ,Д1вухднев- ным сроком заготовки. 0,01 мп крови смешивают с 3 мл О,9%-ного раствора ticJrW (контроль). Смешивание проводят быстро и непосредственно в кювете спектрофотометра Unicam Sp 8000 и сразу слектрофотометрируют, записывая кривую зависимости оптическая плотность-время. Аналогично проводят измерения в приготовленных гипотонических растворах. По характеру этой зависимости судят о кинетике и длительности гемолиза, степень.гемолиза определяют по обычному тройному . правилу (сял. таблицу}. -п Прим ер 2. Для определения осмотической резистентности эритроцитов готовят основной раствор .NaCf с рН 7,4, г: NaCl180,00 Na HPOi 27,31 аН2Р04-2Н204,86 . диет. , . 2000,00 Осмотическая концентрация этого раствора соответствует 10%.Н«св . Разведением готовят гипотонические растворы NaW , %j 0,9, 0,7, 0,5, 0,3 и 0/1. Для анализа берут консер

СПОСОБ ИССЛЕДОВАНИЯ ОСМОТИЧЕСКОЙ РЕЗИСТЕ.НТНОСТИ ЭРИТРОЦИТОВ путем измерения степени гемолиза эритроцитов, отличающийс я тем, что, с целью обеспечения возможности наблюдения кинетики процесса, взвесь эритроцитов смешивают с гипотоническим раствором непосредственно в кювете спектрофотометра, инкубируют смесь, одновременно регистрируют оптическую плотность при длине волны 650 нм и по изменению оптической плотности в зависимости от времени инкубации определяют осмотическую резистивность эритроцитов.