Способ определения хлорпропамида в сыворотке крови Советский патент 1984 года по МПК G01N33/48 

ел

ГС Изобретение относится к клиническ биохимии, а именно к способам опреде ления лекарственного препарата хлорпропамида в крови. Известен способ количественного определения хлорпропамида в сыворотке крови, включающий высушивание сьшоротки крови заморажиранием, экст рагирование раствором соляной Кислоты и эфиром уксусной кислоты, нагревание экстракта, добавление к нему метанола и измерение УФ-абсорбции 1 Известен также способ определения хлорпропамида в сыворотке крови путем фотометрирования, основанный на появлении окрашенных в желтьй цвет дериватов динитроанилина t2 1Недостатками известного способа являются трудоемкость и длительность хода определения, а также н достаточ ная его точность при исследовании сы вороток крови, содержащих гемоглобин Цель изобретения - ускорение и по вышение точности способа. Указанная цель достигается тем, что согласно способу определения хлорпропамида в сыворотке крови путем осаждения белков, обработки супернатанта химическими реагентами с последующим фотометрированием обработку химическими реагентами ведут перед осаждением белков, при этом к пробе добавляют метиленовую синь, и полученный цветной комплекс экстра гируют хлороформом. Способ осуществляют следующим образом. У пациента берут 10 мл венозной крови натощак. После этого больной принимает 1,0 г хлорпропамида внутрь Через 24 ч после приема препарата у него вновь берут 10 мл венозной крови, которой дают свернуться, после чего сгусток удаляют центрифугированием в течение 20 мин при 1000 об/мин К 2 мл сыворотки крови добавляют 1 мл водного раствора метиленового синего (25 X ), быстро перемешивают, добавляют 3 мл хлороформа и энергично встряхивают в течение 1 мин. Пробирку оставляют до разделения слоев, затем осторожно отсасывают водный слой переносят в чистую .пробирку, отбирают 2 мл и смешивают с 1 мл 10%-ного водного раствора метафосфорной кисло- 5

ты для осаждения белков. Осадок отделяют центрифугированием в течение 15 мин при 3500 об/мин. Надоеадочной

оптической плотности контрольной и опытной проб равная 0,1 соответствует концентрации хлорпропамида 2,5 мг%. жидкостью заполняют фотометрическую кювету и измеряют оптическую плотность на спектрофотометре при длине волны 680 нм против воды. В качестве контроля используется сыворотка крови, взятая у того же больного перед приемом хлорпропамида. По разнице между величинами оптической плотности контрольной и опытной проб определяют концентрацию хлорпропамида в сыворотке крови, пользуясь калибровочным графиком. Построение калибровочного графика происходит следующим образом. Готовят стандартные растворы хлорпропамида следующих концентраций, мг.%: 10,0; 7,5; 5,0; 2,5 (на 0,05 Н растворе едкого натрия). К 2 мл образца раствора хлорпропамица добавляют 1 мл водного раствора метиленового синего (25 х ), перемешивают и экстрагируют комплекс хлорофсузмом, встряхивая смесь с 3 мл последнего. По завершении сепарации водный слой переносят в чистую пробирку, отбирают 2 мл, смешивают с 1 мл водного раствора метафосфорной кислоты (10%) и фотометрируют, как указано вьщ1е. Измерения повторяют на трех заново приготовленных сериях растворов хлорпропамида и по средним величинам оптической плотности, соответствующим каждой из его концентраций,строят калибровочный график. Полученное значение экстракций откладывают на оси ординат, а соответствующие им концентрации хлорпропамида в стандартных растворах - на оси абсцисс. Из полученных точек на осях абсцисс и ординат восстанавливают перпендикулярные к осям ординат до пересечения друг с другом. Точки пересечения этих перпендикуляров являются точками графика зависимости оптической плотности стандартных растворов от концентрации в них хлорпропамида. В контрольной пробе раствор хлорропамида заменяют 2 мл 0,05 Н растором едкого натрия. Вычисляют разниу между оптической плотностью конрольной и опытной проб, а затем на рафике находят значение концентрации лорпропамида, соответствующее этой разнице. Разница между величинами 3. Пример 1. Больной П. 54 ле история болезни № 8790, поступил в клинику пропедевтики внутренних заб леваний с диагнозом сахарный диабет впервые выявленный, портальньш цирр печени. Жалобы при поступлении на сухость во рту, частые мочеиспускан кожный зуд, общее недомогание, слабость. При поступлении: сахар крови натощак 11,2 ммоль/л; сахар в моче Больному было начато лечение дие той с ограничением углеводов и хлор пропамидом. Контроль концентрации хлорпропамида в крови после его при ма внутрь проводился предлагаемым способом. Параллельно исследовали уровень гликемии. Через 24 ч после однократного приема внутрь хпорпроп мида в дозе 1,0 г его концентрация в крови оказалась низкой (0,75 мг%) уровень гликемии существенно не изменился (10,8 ммоль/л). Дальнейший прием максимальной терапевтической дозы хлорпропамида в течение 20 дн не привел к нормализации уровня сахара крови натощак и к исчезновению глюкозурии. Концентрация хлорпропамида в сыворотке крови была низкой (2,5 мг%). Отсутствие компен сации сахарного диабета после перорального лечения в течение 3-х недель заставило отказаться от проводимой терапии и начать лечение инсу лином. В стационаре больной провел 46 дн. Пример. 2. Больной Б. 70 ле история болезни № 9240, поступил в .клинику пропедевтики внутренних заболеваний с жалобами на головную боль, редкие сжимающие боли за грудиной, сухость во рту, частые мочеи пускания. Диагноз: сахарный диабет впервые выявленный, ишемическая болезнь сердца, атеросклероз коронарных сосудов. При поступлении: сахар 524 крови натощак 12,0 ммоль/л; сахар в моче 6%. Больному было начато лечение диетой с ограничением углеводов и хлорпропамидом. Контроль концентрации хлорпропамида в крови после его приема внутрь проводился предлагаемым способом. Параллельно исследовали уровень гликемии. Через 24 ч после однократного приема внутрь хлорпропамида в дозе 1,0 г его концентрация в крови оказалась высокой (5,0 мг%), уровень гликемии существенно не изменился (11,6 ммоль/л). Дальнейший прием хлорпропамида в дозе 0,75 г в сутки в течение 3-х дн привел к нарастанию концентрации препарата в крови до 7,5 мг%. Уровень гликемии натощак все еще оставался высоким (8,6 ммоль/л), однако самочувствие больного значительно улучшилось (прекратилась головная боль, исчезла сухость во рту, уменьшилась частота мочеиспускания). Больной был выписан из стационара на амбулаторное лечение. Дальнейший прием хлорпропамида происходил под наблюдением эндокринолога поликлиники. На двадцатый день лечения уровень хлорпропамида в крови достиг 9,125 мг%, уровень гликемии натощак нормализовался (4,6 ммоль/л), исчезла глюкозурия, В стационаре больной провел 7 дн. Таким образом, предлагаемый способ позволяет своевременно судить о целесообразности назначения хлорпропамида каждому конкретному больному для компенсации сахарного диабета, сокращая тем самым сроки пребывания больных в стационаре. Предлагаемый способ обеспечивает получение данных о концентрации хлорпропамида в крови после его приема внутрь и позволяет определять малые концентрации хлорпропамида в сыворот-. ке крови.

СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ ХЛОРПРОПАЮЩА В СЫВОРОТКЕ КРОВИ путем осаждения белков, обработки супернатанта химическими реагентами с последующим фотометрированием, о т л и ч а rout и и с я тем, что, с целью ускорения и повышения точности способа, обработку химическими реагентами ведут перед осаждением белков, при этом к пробе добавляют метиленовую синь и полученный цветной комплекс экстрагируют хлороформом.