Способ обнаружения и подсчета живых микроорганизмов в жидких средах Советский патент 1985 года по МПК G01N21/84 

д САЭ

:д

X

Изобретение относится к микробиологии и может быть использовано для обнаружения и подсчета живых микробных клеток в жидких средах в ускоренном автоматизированном режиме.

Известен способ обнаружения живых микроорганизмов, включающийокрашивание живых микроорганизмов, облучение светом среды, содержащей микроорганизмы, и определение количества живых микроорганизмов по интенсивности флюоресценции красителя на длине волны 580 нм lj .

Однако регистрация полезного сигнала флуоресценции может быть резко ват руднена. за счет флуоресценции сопутствующих примесей, имеющих флюоресценцию в той же спектральной области. 3to приводит к ошибкам в анализе, в ряде случаев делает его вообще невозможным.

Наиболее близким к изобретению по технической сущности и достигаемому эффекту является способ обнаружения и подсчета живых микроорганизмов в жидких средах, включающий витальное окрашивание микроорганизмов красителем, облучение светом потока жидкой среды, регистрацию излучения под углом к направлению распространения облучающего света, обнаружение п. подсчет микроорганизмов в жидкой среде по интенсивности регистрируемого излучения 2j .

Однако известному способу присуща недостаточно высокая избирательность обнаружения и подсчета живых микроорганизмов на фоне примесных частиц.

Целью изобретения является повышение избирательности обнаружения и подсчета живых микроорганизмов на фоне примесных частиц.

Поставленная цель достигается тем что согласно способу обнаружения и подсчета живых микроорганизмов в жидких средах, включающему витальное окрашивание микроорганизмов красителем, облучение светом потока жидкой среды, регистрацию излучения под углом к направлению распространения облучающего света и обнаружение и подсчет микроорганизмов в жидкой среде по интенсивности регистрируемого излучения, в качестве красителя используют соли тет- разолиев, а облучение жидкой среды и регистрацию излучения проводят в диапазоне длин волн от 680 до 740 нм.

Для осуществления данного способа могут быть использованы различные

устройства для. определения концентрации и дисперсного состава частиц в жидких средах.

Способ осуществляют следующим образом.

Микроорганизмы исследуемой порции жидкости подвергают непосредственно в пробе витальной окраске солью тетразолия, например МТТ-метилтиазолилтет разолием бромида .. Для чего в пробу вносят с помощью дозатора 0,15%-ный раствор соли, который готовят на фосфатном буфере Зеренсена в рН 8,2. Раствор соли вносят в пробу в соотношении 1:4 по объему, что является достаточным для витальной окраски микроорганизмов с исходной концентрацией клеток в 1мл Избыток соли тетразолия не влияет на ход реакции витального окрашивания и не требует удаления (отмьшки пробы). Смесь перемешивают, прогревают , 2-5 мин при 39-42с и направляют в проточную кювету устройства для определения дисперсного состава частиц в жидких средах.

Облучение жидкой среды и регистрацию издучения под углом к нг-лравлению распространения облучающего света проводят в диапазоне длин волн 680740 нм.

В этих условиях интенсивность излучения от живых микроорганизмов, прошедших витальное окрашивание, значительно превьш1ает интенсивность излучения от примесных частиц неорганической и органической природы.

Экспериментальную проверку способа проводили на различных жидких средах (физраствор, дистиллированная вода, водопроводная вода, натурные воды поверхностных водоемов и водостоков, сточная жидкость, смывные воды с поверхностей, концентрирующие жидкости импинджеров) с бактериальными нагрузками в диапазоне от единичных клеток в 1 мл до 10 - 10 кл/мл.

Эксперименты проводили с помощьЪ фотоэлектрического анализатора механических примесей ФС-112.

Как показали результаты экспериментов, использование предлагаемого способа позволяет повысить избирательность обнаружения и подсчета живых микроорганизмов в жидких средах

Результаты подсчета микроорганизнов предлагаемым способом совпадали с результатами подсчета независимыми методами - путем подсчета окрашенных микроорганизмов в камере Горяева и методом посевов на твердые питательные среды по Коху, что указывает на

достоверность измерений данным способом.

I

Таким образом, предложенный способ позволяет увеличить избирательность обнаружения и подсчета живых микроорганизмов.

СПОСОБ ОБНАРУЖЕНИЯ И ПОДСЧЕ ТА ЖИВЫХ МИКРООРГАНИЗМОВ В ЖИДКИХ СРЕДАХ, включающий витальное окрашивание микроорганизмов красителем, облучение светом потока жидкой среды, регистрацию излучения под углом к направлению распространения облучающего света и обнаружение и подсчет микроорганизмов в жидкой среде по интенсивности регистрируемого излучения, отличающийся тем, что, с целью повышения избирательности обнаружения и подсчета живых микроорганизмов на фоне примесных частиц, в качестве красителя используют соли тетразолиев, a облучение 1 жидкой среды и регистрацию излучения СП С проводят в диапазоне длин волн от 680 до 740 нм.