Способ замораживания спермы птиц Советский патент 1982 года по МПК A61D7/02 

(54) СПОСОБ ЗАМОРАЖИВАНИЯ СПЕРМЫ ПТИЦ

I

Изобретение относится к искусственному осеменению сельскохозяйственных животных, в частности к способам замораживания снермь птиц.

Известен способ замораживания спермы птиц, включающий разбавление спермы, хранение ее в анаэробных условиях, замораживание в парах жидкого азота и последующую оксигенацию при оттаивании 1.

Известен также способ замораживания спермы птиц, заключающийся в том, что сперму разбавляют при комнатной температуре, добавляют в разбавленную сперму этиленгликоль, затем ставят в холодильник при 2-4 С на зквилибрацию, которая продолжается 50-70 мин. Подготовленную к замораживанию сперму накапывают на поверхность фторопластовой пластины, предварительно охлажденной до -60 - -75°С. При этом капельки спермы, .замерзая, образуют гранулы объемом 0,10-0,15 мл. Выдерживают пластину с гранулами в парах жидкого азота 55- 65 с, затем опускают в жидкий азот для

быстрого (250-350 град в мин) охлаждения до -196°С 2.

Однако замораживание спермы известным способом не обеспечивает должное сохранение биологической полноценности и оплодотворяющей способности замороженно-оттаятшой спермы по всем замораживаемым гранулам. Практически невозможно одновременно раскапа пипеткой на охлажденную фторопластовую пластину весь объем замораживаемой спермы, поэтому только часть замораживаемой спермы оказывается в пределах допустимой продолжительности ее выдержки в парах жидкого азота (55-65 с). Подготовка спермы к замораживанию не. соверщенна, так как разбавление спермы проводится при комнатной температуре, когда спермин чувствительны к температурному и осмотическому шокам, и в два приема (разбавление, затем введение криопротектора), что трудоемко. Низкая производительность труда, связанная с необходимостью сбора после замораживания гранул в посуду для их хранения, трудна маркировка спермы от отдельных произ3водителей, а также существует возможность микробной загрязненности необлицованных гранул в процессе заморажива1шя и хранени Целью изобретения является цовышение активности и оплодотворяющей способности спермиев. Поставленная цель достигается тем, что сперму после зквилибрации помещают в тонкостенные металлические кюветы в количестве 0,1-2,0 мл в каждую, а заморажи вшше осуществляют со скоростью 40- 60 град в мин до -98 - -127°С, затем со скоростью 8-15 град в мин до -196°С. Пример. Свежеполученную от гусак сперму охлаждают до в течение 3- 10 мин, разбавля1рт охлажденной до этой же температуры защитной средой, содержащей 15% этиленгликоля, и эквилибрируют в течение 30-90 мин. После зквилибрации сперму переносят в тонкостенные металлические кюветы, например, из алюминия в количестве не более 2,0 мл в каждую. Высота столбика спермы в кювете при этом не более 2,2 мм. При увеличении объема спермы, замораживаемой в одной кювете, т при высоте столбика спермы более 2,2 мм результаты ее низкотемпературной консервации ухудщаются. Толщина стенок кювет 0,2 мм, внутренний диаметр кюветы 25 мм Кюветы со спермой помещают на металлическую пластину, которую затем (рыдерживают в парах жидкого азота так, чтобы скорость снижения температуры спермы составляла 40-60 град в мин при охлаждении до -98 - -127° С, а затем 8-15 град в мин при охлажд ении до -196° С. Скорость замораживания контролируют с помощью любого предназначенного для этих целей пр бора, например .КСП-4 с подсоединенной к нему и качестве датчика термопарой, опущенной в одну из кювет. Удобнее же использовать существующие программные устройства для замораживания спермы. После достижения температуры жидкого азота (-196° С) замороженную сперму в кю ветах переносят на хранение в сосуд Пьюара. Хранят замороисенную сперму в течение длительного времени. В случае возникновения потребности в ней, извлекают необходи мое ко;;чество кювет и оттаивают в воде, подогретой до 80-85°С. В процессе оттаива ния при легком встряхивании кювет хоро що просматривается физическое состояние их содержимого, т.е. момент перехода замороженной спермы из твердой фазы в жи .кую. В это время кюветы извлекают из воды, оценивают замороженно-оттаянпую сп му по активности спермиев и используют для OCCMCIRFIHH. Сравнительные данные активности и оплодотворяющей способности замороженно-оттаянной спермы, обработанной известным и предаагаемым способами, представлены в табл. 1. Активность оттаянных спермиев в зависимости от скорости замораживания представлена в табл. 2. Данные, представленные в табл. 1, свидетельствуют о том, что предлагаемый способ. достоверно (Р 0,999) превосходит известный по оплодотворенности яиц (на 30,2%) и выводу гусят (на 22,8%). .Биологическая полноценность (активность) спермиев увеличивается на 0,5 балла и составляет 5,5 баллЬв. Результаты исследований, представленные в табл. 2, свидетельствуют о том, что при скорости охлаждения 40-60 град в мин критическая зона наступает после охлаждения спермы до -98127°С, т.е. снижать далее температуру спермы с этой же скоростью нецелесообразно, так как в этом случае неминуемы большие потери биологической полноценности спермиев. Необходим переход на другую скорость, более медленную, критическая зона которой уже пройдена (табл. 3). Оптимальным является переход на скорость 10 град в мин с допустимыми пределами колебания от 8 до 15 град в мин. Влияние температуры оттаивания замороженной спермы гусаков па активность спермиев отображается в табл. 4. Результаты исследований, представленные в табл. 4, свидетельствуют о том, что замороженную сперму следует оттаивать при 80-8 5° С. Исследования по оптимизации количества спермы, помещаемой в одну кювету, показывают, что высокая активность замороженнооттаянных спермиев (в среднем 5,5 баллов) достигается при условии замораживания в одной кювете 0,1-2,0 мл спермы. При увеличении объема спермы более 2,0 мл активность замороженно-оттаянных спермиев снижается до 4-2 баллов. Использование предлагаемого способа замораживания спермы по сравнению с известным обеспечивает повыщение биологической полноценности (до 5,5 баллов) и оплодотворяющей способности замороженно-оттаянной спермы (на примере спермы гусаков: оплодотворенность яиц увеличивается на 30,2%, вывод гусят - на 22,8%), в частности предлагаемый способ позволяет получать дополнительно от каждой тысячи инкубируемых яиц 228 голов суточных гусят, а также предлагаемый способ обеспечивает новыщение производительности труда, простоту осуществления.

Известный

5,0±0,08

Предлагаемый

5,5±0,11

Активность спермиев, баллы, при скорости замораживания,

8101520304050

7,0

6,7 7,0 6,1 6,1

5,8 6,3 5,4 6,0

4,5 6,1 .3,7

3,4

2,5 3,0 3,0

42,8

71,2

30,4

73,0

53,2

72,8

Таблица 2

град в мин

60

7,07,0

7,0

7;о

6,0

7,05,5

7,0

5,0 6,0

5,5

6,0 6,0 6,0 6,0 5,0

7,0 5,0 5,0 5,06,0 6,5 4,0

4,5±0,18

90-100

5,7±0,12

80-85

5,4+0,12

60-65

Формула изобретения

Способ замораживания спермы птиц, преимущественно гусаков, включающий разбавление, эквилибрацию и замораживание спермы в парах жилкого азота, отличающ и и с я тем, что, с целью повышения активности и оплодотворяющей способности спермиев, сперму после эквилибрации помещают в тонкостенные металлические кюветы

40-50

4,3±0,13

3,5iO,08

20-30

3,7±0,10

0-10

в количестве 0,1-2,0 мл в каждую, а замораживание осуществляют со скоростью 4060 град в мин до -98 - -127° С, затем со скоростью 8-15 град в мин до - 196° С.

Источники информации, принятое во внимание при экспертизе

2.Авторское свидетельство СССР № 656621, кл. А 61 D 7/02, 1976.