Способ обработки спермы индюков Советский патент 1988 года по МПК A61D7/02 

CD

.(

Изобретение относится к искусственному осеменению сельскохозяйственных животных, в частности к способам обработки спермы самцов птиц.

Пример. Сперму от индюков получают асканийским способом, оценивают по подвижности спермиев и другим показателям, разбавляют защитной средой в соотношении 1:3 при комнат- ной температуре. Затем ставят в хо- лодиль(шк на эквилибрацию, которая продолжается 55-70 мин. Увеличение и уменьшение периода эквилибрации спермы индюков при плюсовой темпера- туре ведет к заметному сн яоению подвижности оттаянных спермиев и проценту целых акросом.

Щ оведенные исследования показали, что при применении более коротко го ( ьдан) периода эквилибрации в спермиях не создается условий для пассивного осмотаческого ультрафильтра, не поступает уравновешивания концентрационных градиентов вещества, растворенных внутри спермиев и находящихся в окружа ощей его среде.

Кроме того, при таком коротком периоде эквилибрации спермии более восприимчивы к повреждению, обуслов ленному токсическим действием криоп- ротектора.

Так, подвижность спермиев после оттаивания при 55-70-мннутном хранении составила 3,46-3,61 балла, а при 10-40-минутном только 0,54-2,14 балла.

Это подтверя дается и большей степенью деструктивных изменений цито- плазматической мембраны спермиев

(94 29-99,54% против 76,6-75,7%).

После 55-70-минутного охлаящения спермы при в нее вводят крио- протектор НН-диметилацетамид. этом диметилацетамид вводят в раз- бавленную сперму за 20-70 с до глубокого замораживания. Исследованиями также доказано, что увеличение периода эквилибрации спермы с крио- протектором свьш1е 70 мин перед за- мораживанием вызывает снижение биоло пической полноценности спермиев.

Сразу после введения;криопротекто ра сперму насьш1ают водородом в течение 20-30 с и приступают к ее замо- раживанию. При зтом указанным приемом обработки спермы перед замораживанием позволяют на 5,7% повысить оплодотворенность, на 7,6% имводи-

мость яиц и на 7,3% вывод индюшат (табл. 1).

Технический прием насыщения спермы водородом перед замораживанием позволяет снизить процессы переокисления липидов мембран спермиев и придать замораживаемой субстанции форму полых сфер. Образование полых сфер приводит к более разоренному распределению спермиев и созданию индентичных условий снижения температуры во всем объеме замораживаемого биологического объекта.

Увеличение оплодотворяющей способности спериютев при насьш ении спемы водородом перед замораживанием и после оттаивания в сравнении с необг работанной, но замороженной по предлагаемому режиму спермой (2 группа) и в сравнении с прототипом (1 группа) достигается за счет ингибирова- ния аэробного ферментативного окисления, снижения процессов переокисления липидов мембран спермиев, интенсивное окисление которых при действии низких температур приводит к накоплению токсических продуктов.

После насыщения спермы водородом осуществляют трехзпатное замораживание в облицованных необлицованных гранулах, в пайетах или же на внутренней поверхности стеклянных флаконов, вращагацихся в морозильной камере.

Для регистрации температуры образца спермы при замораживании в качестве датчика использовали дифференциальную термопару с выходом на ре- гистрирукнцее устройство - самописец Н 399.

При замораживании спермы в гранулах охлаждение образцов проводят от 2-4 до (-12)-(-14) С за 180-240 с, затем от -14 до (-58) - (62)0 за 160-180 с и до -196 С за 20-30 с.

При замораживании во флаконах и пайетах подготовленную для замораживания сперму вносят в морозильную камеру, предварительно охлажденную до , вьщерживают в течение 180- 240 с, затем вводят в морозильную камеру пары азота в течение 160-180 (образец при зтом охлаждается до (-58)-(-62)с, после чего флаконы или пайеты опускают в жидкий азот, где образец охлаждается до (температура жидкого азота) за 20 - 40 с.

Замороженную сперму переносят для хранения в сосуды Дьюара или стационарные хранилища для биологических объектов. Оттаивают сперму в водяной бане при 65-70°С.

Рекомендуемый режим замораживания его оптимальные-и граничные параметры проверены вначале по подвижности оттаяных спермиев (табл. 2 и 3), а затем и по их оплодотворякщей спо- собности (табл. 4).

Представленные в табл. 3 данные свидетельствуют о том, что лучшая подвижность спермиев (3,3-3,6 балла) наблюдается при охлаждении спермы до (-12)-(-14)с в течение 180-240 с При увеличении спермы или уменьшении температуры или продолжительности охлаждения спермы относительно разработанного оптимума, отмечается достоверное снижение биологической

полноценности спермиев.

Наиболее оптимальным периодом замораживания спермы на втором этапе установлено охлаждение ее до -58 - (-62)с за 160-180 с. При этом получена максимальная подвижность оттаянных спермиев - 3,6-3,8 балла. Скорость замораживания образца спермы На этом этапе составляет 15-18 /мин. После охлаждения- образца с этой же скоростью до температуры ниже - 62 С, а также переход на более медленную скорость замораживания не улучшали подвижности оттаянных спермиев. Поэтому логическим завершением исследований явился переход на более высокие скорости охлаждения. Дальнейшее замораживание образцов спермы в интервале от -62 до (температура жидкого азота) проводили со скоростями: 50, 70, 100, 150°, мин или погружали сразу в жидкий азот (скорость 200-400°/мин), однако существенных различий по подвижности оттаянных спермиев не наблюдали. После программного охлаждения спермы до -58 - (-62)°С образцы сразу опускали в жидкий азот, при этом образцы, замороженные в гранулах, достигают температуры за 20-30 с, а об50 превосходит по оплодотворенности (на 6,3%) и выводу индюшдт (на 6,1%) известный способ обработки спермы (прототип).

разцы, замороженные во флаконах и пайетах, - в течение 20-40 с.

После оттаивания при 65-70 с спер- 55 Формула изобретения му вновь насьш1ают водородом, для замедления обменных процессов и более Способ обработки спермы индюков, длительного сохранения биологической включающей разбавление, охлаждение и полноценности ослабленных после от- эквилибрацию с криопротектором при

таивания спермиев, процессы катабо лизма которых возрастают после низкотемпературного анабиоза в присутствии кислорода.

Технический прием насыщения спермы водородом как до замораживания, так и после оттаивания осуществляют следующим образом.

0 Через редуктор из газового баллона для транспортировки и хранения наполняют водородом кислородную подушку, удалив из нее воздух или другой находящийся в ней газ. Водород,

5 находящийся в кислородной подушке, с помощью эбонитового крана, с вмонтированной в него металлической медицинской иглой И-22, пропускают через сперму. При этом продолжитель

0 ность насьщения спермы газом состав ляет 20-30 с при давлении струи газа 18-40 Па.

После насьш;ения спермы водородом после оттаивания сразу же приступа5 ют к искусственному осеменению индеек.

Предлагаемый способ обработки cnepi-ibi обеспеч1шает получение опло- дотворенности яиц в течение первых

0 трех недель на уровне 71-74,6% при

выводе молодняка 60-61% по сравнению с npoTOTi-moM, поддерживают оплодот- воренность яиц и вывод молодняка на более высоком уровне в течение 9 нед.

5 племенного периода.

Результаты, представленные в табл. 4, с-видетельств тот о том, что в среднем по опыту на 63 дня оплодотворяющая способность спермы, обрабо0 танной по лредпоженному способу, достоверно (Р -с 0,01) превосходит прототип по оплодотворенности яиц на 11,7% и вывод индюшат на 11,2%.

Была проведена экспериментальная

5 проверка предложенного способа обработки спермы индюков.

Результаты экспериментальной проверки (табл. 5) показьшают, что предложенный способ достоверно (Р 0,05)

0 превосходит по оплодотворенности (на 6,3%) и выводу индюшдт (на 6,1%) известный способ обработки спермы (прототип).

2-4 с,- замораживание и оттаивание, отличающийся тем, что, с.целью повышения биологической полноценности спермиев, охлаждение спер- мы проводят в течение 55-70 мин, а замораживание осуществляют в следую- g

t4A04946

щем режиме: от 2-4 до (-12)-(-14)С

за 180-240 с, от (-14) до (-58) - (-62) с за 160-180 с, от (-62) до (-196) С за 20-40 с, причем перед замораживанием и после оттаивания сперму насыщают водородом.

Изобретение относится к искусственному осеменению сельскохозяйственных птиц. Целью изобретения является повышение биологической полноценности спермиев. Охлаждение и эквилибра- цию спермы при 2-4 С проводят в течение 55-70 мин. Перед замораживанием и после оттаивания насьщают сперму водородом. Замораживание осуществляют в три этапа: I - от 2-4 до (-12)- (-14) С за 180-240 с, II - от -14 до (-58)-(62) С за 160-180 с, III - от -62 до за 20-40 с. Увеличение оплодотворяющей способности спермиев при насыщении спермы водородом перед замораживанием и после оттаивания достигается за счет ингибирования аэробного ферментативного окисления, снижения процессов переокисления ли- пидов мембран спермиев, интенсивное окисление которых при действии низких температур приводит к накоплению токсических продуктов. Способ обеспечивает получение оплодотворенности ягац в течение первых трех недель на уровне 71-74,6% при выводе молодняка - 60-61%. 5 табл. (Л

Влияние различш к способов обработки спермы до замораживания и после оттаивания на опло- дотворяюцзпо способность спермы индюков

Прототип, без обработки 189

Предлагаемый:

без обработки182

с обработкой до замораживания114

с обработкой до замораживания и после оттаивания129

Таблица 1

32,8 26,4 80,6

35,2 25,8 73,4

40,9 33,1 81,0

53,5 44,1 85,5

CSJ

rt

tr s

t Ю CO

m

« er S Ч to « H

Таблица 4

Оплодотворяющая способность спермы в течение 9 нед. племенного периода, обработанной предлагаемым способом и прототипом,

Способ обработки Проинкуби- % оплодотво- % вывода Z выворовано яиц, ренности яиц молодняка димости шт.яиц

Предлагаемый А20 62,1 48,6 78,2

Известный (прототип)444 50,4 37,4 74,1

Р 0,05 Р 0,01

Таблиц а 5

Результаты экспериментальной проверки . нового способа обработки спермы индюков

Способ обработки Проинкуби- % оплодот- % вьто-% вывоспермы ровано яиц, воренности да мо-димости

шт. яиц лодня-яиц

ка

Известный (прототип)531 50,6 42,7 84,4

Предложенный 473 56,9 48,8 85,9

Составитель А.Филиппова Редактор М. Бандур а Техред М.Дидык Корректор М.Макси вшияец

Заказ 6119/7Тираж 655Подписное

ВНИИПИ Государствеиного комитета СССР

по делам изобретений и открытий 113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., д. 4/5

Производственно-полиграфическое предприятие, г, Ужгород, ул, ПроекТйая, 4