Способ криоконсервации спермы Советский патент 1991 года по МПК A01N1/02 

Изобретение относится к сельскому хозяйству, в частности к технологии искусственного осеменения сельскохозяйственных животных и птиц. ,

Целью изобретения является повышение выживаемости и оплодотворяющей способности семени.

Способ заключается в использовании в качестве криопротектора соединения, которое относится.к классу N-ацилэтаноламинов: N-пальмитоилэтаноламина (ПЭА) и/или N-стеаро- илэтаноламина (СЭА), представляющих собой поверхностно-активные вещества.

Фармокологическое действие этих препаратов изучено, например, ПЭА (как фармацевтический препарат им- пульсин применяется в Чехословакии

для лечения острых респираторных заболеваний вирусной природы.

Способ осуществляют следующим образом.

Ю мг ПЭА и/или СЭА растворяют при тщательном перемешивании в 10000 мг липофильного компонента за- щитной среяы. Свежеотобранную сперму оценивают согласно известному базовому способу и в зависимости от концентрации спермиев в нее вводят защитную среду, а затем добавляют криопротекторную смесь 50-100 мкг на 1 млрд спермиев и перемешивают, эквилибруют при 0-(+5)° в течение 4-5 ч и замораживают в парах жидкого азота до температуры (-19б-)°С.

Пример 1. Приготовляют криопротекторную смесь для 20 проб.

о со о J

GO 05

13 мг ПЭА смешивают с 10000 мг яичного желтка (в соотношении 1:1000). Цельную сперму разбавляют в защитной среде из расчета 10 млн активных спермиев в одной оттаянной спер- модозе при следующем составе среды:

11,5

Лактоза, г

Желток куриных яиц,

мл20,0

Глицерин, мл 5,0

Спермосан - 3 тыс.ед. 50,0

Вода дистиллированная, мл100,0 В разбавленную сперму вводят смесь с криопротектором из расчета 75 мг смеси на 1 млрд спермиев. Затем обработанную сперму охлаждают в холодильнике до 5°С в течение 5 ч (эк- вилибрация) и замораживают в гр нул на фторопластовой пластине в парах жидкого азота. Замороженную сперму хранят в жидком азоте при (-196)°С Одновременно параллельные пробы тех же эякулянтов обрабатывают по базовому способу, которые служат контролем.

Биологическую полноценность спермы, обработанной базовым и предлагаемым способами, оценивают по показателям подвижности и выживаемости спе миев согласно ГОСТу 20909,-75. Результаты проведенных исследований изложены в табл.1.

Примеры 2-6. Сначала приготовляют криопротекторную смесь ПЭА и/или СЭА в глицерине (1:1000) в следующих количествах на 1 млрд сперми

ев;

пример 2. 50 мг смеси (50 мкг ПЭА в 50 мг глицерина){

пример 3. 75 мг смеси (75 мкг ПЭА в 75 мг глицерина);

пример k. 75 мг смеси (75 мкг СЭА в 75 мг глицерина),

пример 5. 75 мг смеси (37,5 мкг ПЭА +37,5 мкг СЭА в 75 мг глицерина)j

пример 6. 100 мг смеси (100 мкг СЭА в 100 мг глицерина).

Цельную сперму разбавляют защитной средой из расчета 10 млн активных спермиев в одной оттаянной спермодозе при следующем составе защитной среды:

Лактоза, г11,5

Желток куриных яиц, мл 20,0

Глицерин, мл5,0

Спермосан(3 тыс.ед.)50,0

Вода дистиллированная, мл100,0

Пример 7. Определяли биологическую полноценность спермы, полученной при применении предлагаемого способа,путем искусственного осеменения коров и телок на небольшом поголовье в колхозах Зоря и Здобуток Жовтня Житомирского района Житомирской области УССР. Контролем служила сперма быков-производителей, замороженная по базовому способу. Зависимость оплодотворяю- щей способности спермы от способа ее криоконсервации приведена в табл.2. Контроль оплодотворения осуществляли ректальным исследованием.

Анализ полученных результатов свидетельствует о преимуществах нового способа по сравнению с известными, которые выражаются в более высокой биологической полноценности спермы.

Подвижность спермиев увеличивается на 59,5% при статистически значимом разнице в сравнении со способом- прототипом. Значительно увеличивается абсолютный показатель выживаемости (на 85) при одинаковом времени выживаемости спермиев.

Кроме того, высокий процент опло- дотворяемости коров (6,8%) и телок (90,2%) спермой быков-производителей, замороженной предлагаемым способом;против базового Ct8,7% и

76,9% соответственно, табл.2) свидетельствует о биологической полноценности спермиев при обработке спермы животных предлагаемым способом.

5

0

5

Формула изобретения

1. Способ криоконсервации спермы, включающий разбавление спермы защитной средой, содержащей липофильный компонент и обработку криопротектором, эквилибрацию, замораживание в парах жидкого азота и оттаивание, отличающийся тем, что, с целью повышения выживаемости и оплодотворяющей способности семени, в качестве криопротектора используют N-пальмитоилэтаноламин и/или N-стеа- роилэтаноламин, который предварительно смешивает с липофильным компонентом защитной среды в соотноше-i. нии 1:1000, а затем полученную смесь вводят в разбавленную сперму

э1ЬУ07 Ьb

из расчета 50-100 мкг на Ьмлрл спер- пофильного компонента используют гли- миев.

2. Способ поп.1, отличающийся тем, что в качестве лицерин или яичный желток.

пофильного компонента исп

церин или яичный желток.

Изобретение относится к сельскому хозяйству, в частности к технологии искусственного осеменения сельскохозяйственных животных и птиц. Целью изобретения является повышение выживаемости и оплодотворяющей способности семени. Способ заключается в использовании в качестве кри- опротектора соединения, которое относится к классу N-ацилэтаноламинов: N-пальмитоилэтаноламина и/или N-сте- ароилэтаноламина, который предварительно смешивают с липофильным компонентом защитной среды в соотношении 1:1000. Затем полученную смесь вводят в разбавленную сперму из расчета 50-100 мкг на 1 млрд спермиев. Выживаемость спермиев достигает 8,5 ч, а оплодотворяющая способность спермы 64,8%, 1 з.п.ф-лы, 2 табл. (Л

Способ обработки

- 15

20

20

- 20

- 20

20

Предлагаемый

Базовый

Повышение, %

Предлагаемый

Базовый

Повышение, %

Предлагаемый

Базовый

Повышение, %

Предлагаемый

Базовый

Повышение, %

Предлагаемый

Базовый

Повышение, %

Предлагаемый

Базовый

Повышение, %

Примечание, Введение смеси в количестве 10-40 мкг на 1 млрд спермиев

увеличивает абсолютную выживаемость всего на 30-40%, а . введение 200-500 мкг - не увеличивает ее более чем нз 60-63%.

35

Таблица 2

Способ обработ- Осеменено Оплодотворено от ки спермы голов первого осеменения

голов %

Предлагаемый коровы 5 3564,8

телки 413790,2

Базовый коровы 763748,7

телки .1179076,9

j

Составитель И.Марченко Редактор М.Васильева Техрел А.Кравчук Корректор М.Самборская

Заказ 4619Тираж Подписное

ВНИИПИ Государственного комитета по изобретениям и открытиям при ГКНТ СССР 113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., д. 4/5

Производственно-издательский комбинат Патент, г.Ужгород, ул. Гагарина,101

Таблица 1

Выживаемость при 38 С

Время, ч

Абсолютная

8,19±0,533 5,63+0,168

45,4

7,69±0,235 5,63±0,163

36,59

8,42±0,369 5,63+0,168

49,56

8,31±0,490 5,63+0,168

47,60

8,21+,Q,367 5,63+0,168

45,83 7,53+0,281 5,63+0,168

33,75

44,31+1,923 22,11+1,487

-100,41 36,24+2,177 22,11+1,487

63,91

43,92+2,615 22,11+1,487

38,64 44,07+2,708

22,11+1,487

99,32

44,00+0,193 22,11+1,487

99,00

35,97±2,238 22,11+1,487 62,69