Среда для разбавления и замораживания спермы быков Советский патент 1985 года по МПК A61D7/02 

сд ел to

О)

ю

Изобретение относится к сельскому хозяйству, в частности к искусственному осеменению сельскохозяйственных животных.

Известна среда для разбавления и замораживания спермы животных, включающая дисахара, желток куриного яйца, глицерин, внутрикомплексные соли щелочно-земельных металлов - кальция и магния с аминополиуксусными кислотами, серную кислоту и сульфат калия I.

Известна также среда, дополнительно включающая двунатриевый двуводный этилендиаминтетраацетат, а в качестве источника магния и кальция - лимоннокислый аммоний 2.

Недостатком этих сред является то, что они не обеспечивают полноценного сохранения сперматозоидов быков.

Известна среда для разбавления и замораживания спермы быков, включающая лактозу, источник кальция этилендиаминтетраацетат двунатриевый двуводный, желток куриного яйца, глицерин и воду 3.

Однако эта среда обладает недостаточным холодозащитным действием, так как в ее составе содержится кальцийдинатриевая соль этилендиаминтетрауксусной кислоты, соотношение кальция и натрия в которой не является оптимальным для защитного действия спермы быков от холодового удара как при охлаждении от 30-35°С до О-4°С, так и при замораживании от О до . В среде наблюдается избыток кальция.

Важно, чтобы в период адаптации и эквилибрации спермы в диапазоне температур от 30 до О-4°С и при замораживании синтетическая среда предохраняла сперматозоиды от вредных последствий изменения концентрации водородных ионов, которые имеют место в слабозабуференных синтетических средах. Указанная среда не содержит солевых компонентов, придающих ей буферные свойства, и применима лищь при низких степенях разбавления спермы быков (1:19) при относительно высоком содержании подвижных сперматозоидов в дозе 10-15 млн., что экономически не эффективно.

Введение в состав среды дефицитной кальций-динатриевой соли этилендиаминтетрауксусной кислоты и кокарбоксилазы делает среду дорогостоящей и трудновыполнимой.

Целью изобретения является лучщее сохранение биологической полноценности сперматозоидов при замораживании.

Поставленная цель достигается тем, что среда, включающая лактозу, источник кальция, этилендиаминтетраацетат двунатриевый двуводный, желток куриного яйца, глицерин и воду, дополнительно содержит

натрия двууглекислый, а вкачестве источника кальция - гидратокиси кальция при следующем соотнощении ингредиентов, мае. %:

Лактоза5,0 -8,0

Гидрат окиси кальция0,20-0,05 Этилен диа минтетра ацетат двунатриевый

двуводный1,320,30

Натрий двууглекислый0,03-0,14

Глицерин6 -15

Желток куриного яйца15 -10

ВодаОстальное

Пример. Приготовили три состава среды (см. табл. 1).

Каждый состав среды испытывался в лабораторных условиях на подвижность и выживаемость сперматозоидов после оттаивания спермы (число проб 10). Полученные результаты представлены в табл. 2.

Оптимальный вариант данной среды, вес. %: лактоза 6,4; гидрат окиси кальция 0,12; этилендиаминтетраацетат двунатриевый двуводный 0,66; натрий двууглекислый 0,08; глицерин 7,5; желток куриного яйца 14,2 имеет физиологически нормальную концентрацию водородных ионов (рН 6,8) и более высокие криозащитные свойства в сравнении с другими испытанными вариаитами. Подвижность после оттаивания (4,6±0,09) статистически достоверно (td 2,3-2,5) превышает этот показатель в других вариантах.

Сравнительная эффективность предлагаемой среды с известной приведена в табл. 3.

В результате осеменения 691 телки спермой быков, замороженной в разработанной среде, получили при содержании 5,10- и 20-25 млн. подвижных сперматозоидов в дозе стельность 58-75, 62-74 и 62-76%. Стельность в контрольной среде соответственно составила 44-60, 57-68 и 60-67%.

Среда обладает высокими холодозащитными свойствами при больших степенях разбавления, т. е малом содержаиии подвижных сперматозоидов в дозе, в результате чего повышается оплодотворяющая способность оттаянной после замораживания спермы быков, содержащей 5 млн. подвижных сперматозоидов в дозе, на 14-15% в сравнении с контролем. Эффективность использования спермы повышается в 2-5 раз, так как оплодотворяющая способность спермы замороженной в предлагаемой среде и содержащей 5 млн. подвижных сперматозоидов, не уступает сперме, замороженной в контрольной среде и содержащей 10 и 20- 25 млн. подвижных сперматозоидов.

Таблица 1

СРЕДА ДЛЯ РАЗБАВЛЕНИЯ И ЗАМОРАЖИВАНИЯ СПЕРМЫ БЫКОВ, включающая лактозу, источник кальция, этилендиаминтетраацетат двунатриевый двуводный, желток куриного яйца, глицерин и воду, отличающаяся тем, что, с целью лучшего сохранения биологической полноценности сперматозоидов при замораживании, среда дополнительно содержит натрий двууглекислый, а в качестве источника кальция - гидрат окиси кальция при следующем соотношении ингредиентов, мае. %: Лактоза5,0 -8,0 Гидрат окиси кальция0,20-0,05 Этилендиаминтетраацетат двунатриевый двуводный1,32-0,30 Натрий двууглекислый0,03-0,14 Глицерин6 -15 Желток куриного яйца15 -10 ВодаОстальное W

Лактоза

Гвдрат окиси кальция

Этилендиаминтетраацетат двунатриевый двуводный

Натрий двууглекислый

Глицерин

Желток куриного яйца

Вода дистиллированная

Подвижность сперматозоидов после оттаивания

среды спермы, баллы (5 параллельных образцов в каждой пробе, т. е. 5 X 10 50)

1 2 3 Контроль

8,0

6,4 0,05 0,12

0,30

0,66 0,08

0,14 15,0 7,5 10,0 14,2 о 100

До 100 Таблица 2

Абсолютный показатель выживаемости в оттаянной сперме, условные единицы, при 2-4С М + m

243 + 21,6 227 +. 22,3 204 + 32,6 179 t 12,0