Способ диагностики геморрагической лихорадки с почечным синдромом Советский патент 1985 года по МПК A61K39/00 

а о сд

со

I

Изобретение относится к способам диагностики особо опасных вирусных инфекций, в частности к способу диагностики геморрагической лихорадки с почечным синдромом (ГЛПС) вирусного природно-очагового зооноза, широко распространенного на территории СССР

Известен способ диагностики гемо рагической лихорадки с почечным синдромом путем определения иммунологических, факторов в крови, в частности антител Ij .

Однако известный способ имеет недостаточную точность, поскольку определение титров антител возможно только на 14-21 день заболевания, обнаружение же антител в первые дни болезни не является диагНостическим признаком. Кроме того, способ сложен в исполнении, так как необходимоисследование парных сывороток и при наличии четырехкратного и более нарастания титров антител можно диагностировать ГЛПС.

Целью изобретения является повышение точности диагностики и упрощение способа.

Указанная цель достигается тем, что согласно способу диагностики геморрагической лихорадки с почечным синдромом путем определения иммунологических факторов в крови больного у исследуют иммунные компле сы, циркулирующие в крови больного, твердофазньгм иммуноэнзиматическин методом и диагностизуют заболевание по наличию специфического антигена в иммунном комплексе.

Пример 1.В микропанели фирмы ФЛОУ или производства Москов кого экспериментального завода добавляют 50 мкл (10 мкг/мл белка) в лунку иммуноглобулина, выделенного из сыворотки переболевшего ГЛПС человека. После трехкратной отмывки О,1 М фосфатно-буферным раствором (ФБР) рН 7,4 панели высушивают-и хр нят при 4 С до использования. Тестируемую сыворотку больного ГЛПС добавляют в объеме по 50 мкл на лунку в две лунки панели с иммунным покрытием. Контакт в течение ночи при 4Со Панели трижды отмывают ФБР, высушивают на воздухе и добавляют по 30 мкл на лунку меченного пероксидазой хрена иммуноглобулина. Источником -иммуноглобулина служит та же

460532

сыворотка переболевшего ГЛПС, что и для иммунного покрытия. Контакт 2 ч при комнатной температуре. После четырехкратного отмыва ФБР и подсушивания на воздухе в каждую лунку добавляют по 100 мкл субстрата, содержащего ортофенилендиамин в 0,1 М цитратно-фосфатном буфере рН 5,0 (0,4 мг opтoфeнIiлeндиaминa

to на 1 мл цитратно-фосфатного буфера) и перекись водорода (0,06%), Контакт - 30 мин при комнатной температуре. Для остановки реакции в каждую лунку добавляют по 50 мкл 2)11 ЪО ,

15 Экстинкцию измеряют при 490 нм в фотометре Титертек.

Ранняя стадия инфекционных заболеваний сопровождается циркуляцией в крови этиологического агента и

0 его растворимых белков-антигенов. Диагностика заболеваний, в частности геморрагической лихорадки с почечным синдромом, основана на выявлении антител в крови больного. Но

5 на ранней стадии инфекции образующиеся антитела связаны избытком циркулирующего антигена в иммуннь е комплексы и не могут быть определены существующими способами,

Q Преимуществом предлагаемого способа является определение специфичности иммунных комплексов. Все патогенные иммунные комплексы формируются в условиях избытка антигена. Это их свойство используется в пред5лагаемом способе дважды:, как для адсорбции на специфические антитела, связанные с твердой фазой, так и для выявления свободных антигенных . детерминант комплекса мечеными спе0цифическими антителами. В реакции присутствуют только специфические

компоненты : антитела против вируса ГЛПС (меченые и немеченые) и антиген вируса ГЛПС, что полностью ис5ключает возможность получения ложноположительных результатов (табл. 1).

Важным преимуществом предлагаемого способа является возможность диагностики тяжелых форм заболева0ния, которые могут протекать как серонегативные ввиду поступления в циркуляцию значительного количества антигена, что приводит как к подавлению иммунного ответа, так и к связыванию в ИК образующихся антител (табл. 2).

Способ позволяет устанавливать окончательный диаг/ноз ГЛПС в первые 3 . дни болезни, поскольку обнаружение антигена в крови больного однозначно свидетельствует об острой инфекции ГЖС. При использовании метода определения антител диагноз может быть установлен при наличии четырехкратного и более нарастания титров антител в парньк сыворотках, что происходит к 1А-21 дню от начала болезни Обнаружение антител в первые дни болезни не является диагностическим признаком, поскольку мржет быть связано с уже перенесенной ранее инфекцией ГЛПС. Максимально ранняя диагностика при помощи предлагаемого способа позволяет проводить рациональное лечение и сократить пребывание больного в стационаре с 40-50 до 20-. 30 д, Сыворотки

Количество обследованных100

Количество положительных результатов

.

Антиген в специ- ( Антитела фическом иммунном комплексе

48

39

О О

15

О О 53 , 4 Определение специфического антигена в составе иммунного комплекса обладает важным преимуцеством пepe применяемым способом, т.е. позволяет диагносцировать тяжелые формы заболевания, протекакнцие как серонегативные случаи. Антитела в таких случаях связаны избытком антигена в иммунные комплексы и не могут быть определены известным способом. Предлагаемый способ выявляет антиген в составе иммунного комплекса и позволяет 1збежать ошибок диагностики, чреватьк летальными исходами. Способ позволяет также определять продолжительность циркуляции антигена в составе иммунного комплекса jB остром периоде болезни, что имеет важное прогностическое значение. Таблица

СПОСОБ ДИАГНОСТЖИ ГЕМОРРАГИЧЕСКОЙ ЛИХОРАДКИ С ПОЧЕЧНЫМ СИНДРОМОМ путем определения иммунологических факторов в крови больного, отличающийся тем, что, с целью повьшения точности диагностики и упрощения способа, исследуют иммунные комплексы, циркулирующие в крови больного, твердофазным иммуноэнзиматическим методом и диагностируют заболевание по наличию специфического антигена в иммунном комплексе. сл

Антитела в сыворотках определяли при помощи рующих антител. непрямого метода флюоресциТо же, что и в табл. 1.

Таблица 2