СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ИММУНОФЕРМЕНТНОЙ ТЕСТ-СИСТЕМЫ ДЛЯ ОПРЕДЕЛЕНИЯ ЭПИТОПОВ ОБОЛОЧЕЧНОГО БЕЛКА ВИРУСА ПУУМАЛА ПРОТЕКТИВНОЙ НАПРАВЛЕННОСТИ В ВАКЦИННЫХ ПРЕПАРАТАХ ПРОТИВ ГЕМОРРАГИЧЕСКОЙ ЛИХОРАДКИ С ПОЧЕЧНЫМ СИНДРОМОМ Российский патент 2015 года по МПК G01N33/535 G01N33/547 A61K39/12 

Описание патента на изобретение RU2565543C2

Изобретение относится к области биотехнологии, в частности к получению вакцины для профилактики геморрагической лихорадки с почечным синдромом (ГЛПС), а именно, к способу получения тест-систем, предназначенных для контроля содержания в вакцинном препарате специфических вирусных белков - индукторов иммунного ответа против хантавирусов - возбудителей ГЛПС.

Геморрагическая лихорадка с почечным синдромом - острое, вирусное заболевание зоонозной природы, характеризующееся системным поражением мелких кровеносных сосудов, геморрагическим диатезом и своеобразным поражением почек, высоким уровнем заболеваемости, тяжёлым течением (нередко с летальным исходом) и стойкой потерей трудоспособности. Отсутствие специфических средств лечения и профилактики обусловливают высокую социальную и медицинскую значимость ГЛПС как в России, так и во многих странах мира. Случаи заболевания ГЛПС выявлены в 57 административных регионах Российской Федерации и составляют ежегодно 8-10 тысяч больных, при этом 98% заболеваемости регистрируется в Европейской части России, из которых 98% случаев ассоциированы с вирусом Пуумала.

Наиболее эффективным методом борьбы с ГЛПС является вакцинопрофилактика, что было продемонстрировано в Китае и Южной Корее. В настоящее время коммерческие вакцины против ГЛПС производятся только в Китае, однако ни одна из этих вакцин не может применяться в европейских регионах России, так как не обеспечивает защиты от вируса Пуумала - возбудителя ГЛПС в этих регионах.

Для изготовления и контроля вакцины против вируса Пуумала необходимо решить проблему разработки эффективных методов контроля содержания специфических антигенов - индукторов иммунного ответа в вакцинных препаратах, в том числе на технологических этапах их производства. Одним из способов иммунохимического определения вирусных белков - антигенов является метод иммуноферментного анализа.

В настоящее время ФГУП ПИПВЭ им. М.П.Чумакова выпускает иммуноферментную тест-систему "Хантагност", с помощью которой можно выявлять антитела к различным эпитопам нуклеокапсидного белка. Однако наибольшую значимость при конструировании вакцинного препарата имеют протективные белки, в данном случае поверхностный белок GN:GC, определенные эпитопы которого индуцируют выработку вирус-нейтрализующих антител.

Целью предлагаемого изобретения является конструирование иммуноферментной тест-системы для определения оболочечного белка вируса Пуумала, являющихся индуктором гуморального иммунного ответа, ассоциированного с вирус-нейтрализующими свойствами антител.

В качестве основы такого метода были приготовлены мышиные моноклональные антитела, обладающие нейтрализующей активностью против вируса Пуумала.

Принцип действия предлагаемого изобретения основан на специфическом иммунохимическом взаимодействии моноклональных антител, обладающих нейтрализующей активностью, с соответствующими эпитопами оболочечного белка вируса Пуумала, полипротеина GN:GC. Визуализация антигена, связавшегося с моноклональными антителами, осуществляется с помощью меченных пероксидазой хрена высоко авидных IgG к вирусу Пуумала, выделенных из сыворотки крови реконвалесцента ГЛПС.

Коротко, процесс конструирования иммуноферментной тест-системы «ХАНТА-ПУУ» включает: получение очищенных моноклональных антител (мАТ) к хантавирусу Пуумала, отбор клонов антител, обладающих вирус-нейтрализующей активностью, наработка и очистка нейтрализующих мАТ, выделение IgG из сыворотки крови реконвалесцентов ГЛПС с высокими титрами специфических антител к вирусу ПУУ и приготовление конъюгата, с пероксидазой хрена (далее пероксидазный конъюгат); комплектация набора тест-системы.

Более подробно получение тест-системы осуществляют следующим образом.

I. Получение моноклональных антител. Мышей линии BALB/c иммунизируют очищенным препаратом инактивированного вируса Пуумала (штамм К-27/Уфа-85) в дозе 100 мкг/мышь, иммунизацию проводят в подушечки задних лап дважды с двухнедельным интервалом. Клетки подколенных лимфоузлов иммунных мышей гибридизуют с клетками мышиной миеломы линии SP2/0 по стандартной методике, используя полиэтиленгликоль 4000. Гибридомные клетки, продуцирующие специфические антитела, подвергают 2-4-кратному клонированию методом предельных разведений. Клоны гибридомы с устойчивой продукцией антител нарабатывают в культуре в среде DMEM (HyClone) с добавлением 5% фетальной телячьей сыворотки. Для наработки антител гибридомные клетки вводят в перитонеальную полость мышей, через 7-14 дней регистрируют развитие асцитных опухолей.

Асцитные жидкости проверяют на содержание специфических антител методом иммуноферментного анализа. Для этого образцы, содержащие очищенные антигены хантавирусов в концентрации 100 нг/мл в фосфатносолевом буфере (ФСБ), вносят в лунки иммунопанели (Costar, 3018), с последующей инкубацией при 6±2°C - 18 часов. Далее в лунки вносят 3% бычий сывороточный альбумин (БСА) (Sigma, 8159) и панели оставляют в течение 1 ч при комнатной температуре (22±3°C). После отмывания панели (здесь и далее: 5 раз по 5 мин раствором 0,01 М ФСБ + 0,05% Tween-20) в лунки вносят культуральную жидкость гибридомы. После 1 ч контакта при 37°C лунки отмывают и вносят меченные пероксидазой хрена IgG против иммуноглобулинов мыши (Sigma, A4416). В качестве индикаторной системы используют субстрат-индикаторную смесь (ТМБ, Sigma, Т8665). Антитела (IgG) выделяют из асцитных жидкостей аффинной хроматографией на колонке с HiTeap ProteinG (GE Healthcare, 17-0405-03). Очищенные моноклональные антитела стандартизуют по белку (до 1 мг/мл) и далее определяют их специфическую активность методом нейтрализации.

II. Отбор клонов, вырабатывающих нейтрализующие вирус антитела, проводят методом реакции нейтрализации (РН). Образцы моноклональных антител, а также контрольных сывороток в 2-кратных разведениях смешивают в равных объемах с культуральной жидкостью, содержащей 50-100 ФОЕ вирусов Пуумала, Добрава, Хантаан и Сеул. После инкубирования при 6±2°C в течение 18-20 часов вирус-сывороточные смеси по 0,2 мл вносят на монослой клеток VERO-E6, выращенных в 24 луночных панелях (Costar, 3524), и оставляют на контакт при 37°С в течение 1 часа, после чего инокулят удаляют и вносят метилцеллюлозное покрытие. Выживший вирус определяют по методу индикации ФОЕ. Титр вирус-нейтрализующих антител в образце определяют как величину, обратную его разведению, подавляющему 80% ФОЕ. В результате проведенных исследований отобран клон ПУУ/G10, который характеризуется способностью нейтрализовать 50-80 ФОЕ вируса Пуумала в концентрации ≥1 мкг/мл при отсутствии нейтрализующей активности по отношению к другим хантавирусам в концентрации 1000 мкг/мл.

Таблица 1 Нейтрализующая активность мАТ, полученных к вирусу Пуумала мАТ Субизо-тип МФА с антигенами РН ПУУ ХАН СЕУЛ ДОБ Vero-E6 ПУУ ХАН СЕУЛ ДОБ PUU/G10 IgG2a 2048* <64 <64 <64 <64 1280 <20 <20 <20 PUU/D21 IgG1 4096 1024 4096 4096 <64 <20 <20 <20 <20 PUU/H6 IgG1 4096 4096 4096 4096 <64 <20 <20 <20 <20 Контрольные поликлональные сыворотки ПУУ №421 8192 256 512 512 <64 2560 <20 <20 <20 ХТН №6851 512 4096 2048 4096 <64 <20 1280 40 <20 СЕУЛ №11 256 512 1024 512 <64 <20 40 640 <20 ДОБ №68 256 2048 1024 4096 <64 <20 80 40 2560 Примечание: * - титры антител, выраженные в величинах, обратных разведению образца

III. Конъюгирование иммуноглобулинов из сыворотки крови реконвалесцента ГЛПС-ПУУ с пероксидазой хрена.

Растворяют 5 мг пероксидазы хрена с RZ 3,0 в 1 мл 0,3М бикарбонатного раствора и после полного растворения пероксидазы добавляют 0,025 мл 0,32% раствора формальдегида (1:100). Осторожно перемешивают на магнитной мешалке в течение 30 минут при температуре от 15 до 25°C, затем к смеси добавляют 1 мл 0,04 М раствора периодата натрия. По истечении 30 минут перемешивания цвет смеси (коричневый) приобретает зеленоватый оттенок. Добавляют 1 мл 0,16 М раствора этиленгликоля, перемешивают в течение 1 часа. Смесь диализуют против 1 л 0,01 М карбонатно-бикарбонатного буферного раствора (КББ) в течение 16-20 час при температуре (6±2)°C. Параллельно проводят диализ 1,5 мл IgG ПУУ в концентрации 10 мг/мл в тех же условиях. После диализа активированную пероксидазу переносят во флакон, добавляют 1 мл IgG ПУУ, диализованных против КББ, смесь осторожно перемешивают при температуре 18-25°C в течение 2 час. Добавляют 5 мг NaBH4 и оставляют на 2 часа при температуре (6±2)°C. Полученный конъюгат диализуют против 1 л 0,01М ФСБ в течение 16-20 час при температуре 18-25 °С. После диализа конъюгат извлекают из мешка и наносят на колонку (1,6×90 см) с сефадексом G-100, уравновешенную 1М ФСБ. Элюируют тем же буфером (скорость элюции свободная) при температуре (6±2)°C, собирая фракции по 3 мл. Окрашенные фракции фотометрируют при 280 нм и 403 нм. Определяют отношение оптической плотности (ОП) каждой фракции при 403 нм к 280 нм (показатель RZ - ОП 403/ОП280) и отбирают 1-2 пиковые фракции с RZ 0,45-0,6 (оптимум - 0,5). Конъюгат разводят 1:10 в 1%-ном растворе бычьего сывороточного альбумина на 0,1 М ФСБ. Для хранения в жидком виде разводят 1:2 в глицерине и разливают в инсулиновые флаконы.

Иммуноферментная тест-система «ХАНТА-ПУУ», сконструированная по предлагаемому способу, обладает следующими достоинствами:

1) видовой специфичностью, проявляющейся в том, что тест-система «ХАНТА-ПУУ» выявляет исключительно вирус Пуумала;

2) антигенной специфичностью, проявляющейся в том, что тест-система «ХАНТА-ПУУ» выявляет исключительно эпитопы белка, обладающего протективной активностью, в частности, способностью активизировать гуморальное звено иммунитета, индуцируя выработку нейтрализующих антител;

3) с одинаковой чувствительностью выявляются антигены как живого, так и инактивированного формалином вируса.

Принципиальное отличие предлагаемой тест-системы «ХАНТА-ПУУ» от иммуноферментной тест-системы "Хантагност", выпускаемой ФГУП ПИПВЭ им. М.П.Чумакова согласно ТУ 9388-016-01895045-2010, является способность выявлять исключительно эпитопы поверхностного белка вируса Пуумала, являющиеся индуктором нейтрализующих антител. Определяющим технологическим решением поставленной задачи является получение специфических вирус-нейтрализующих мАТ. Дополнительным контролем специфичности выявления антигенов вируса Пуумала, является использование в качестве вторичных (выявляющих) антител к этому вирусу иммуноглобулинов из сывороток крови реконвалесцентов ГЛПС-ПУУ. Тест-система «ХАНТА-ПУУ» позволяет с одинаковой чувствительностью выявлять антигены как живого, так и инактивированного формалином вируса, что важно с точки зрения оценки специфической активности инактивированных вакцинных препаратов на технологических этапах их производства.

Пример 1.

Для определения протективного белка вируса Пуумала в образцах вакцинного полуфабриката (концентрат вируссодержащей культуральной жидкости, очищенный концентрат, инактивированный формалином концентрат) применяют тест-систему «ХАНТА-ПУУ». В лунки иммунопанели вносят мАТ ПУУ/G10 в концентрации 1 мкг/мл в КББ. После контакта в течение 12-18 часов при температуре (6±2)°C в лунки вносят 3% БСА и панели оставляют в течение 1 ч при комнатной температуре. Во вспомогательной панели готовят двукратные разведения исследуемых образцов на ФСБ. После отмывания панели (как описано выше) в лунки вносят исследуемые образцы. После 2-х часового контакта при 37°C лунки отмывают, вносят пероксидазный конъюгат и инкубируют панели 1 ч при 37°C. После отмывки в лунки панели вносится ТМБ (Sigma, T8665) и через 20 мин проводят учет опыта, определяя оптическую плотность в лунках панели с помощью спектрофотометра при длине волны 450. За титр антигена принимают конечное разведение образца, для которого отношение оптической плотности в лунке со специфическим иммуноглобулином превышает показатель оптической плотности с нормальным иммуноглобулином в 2,1.

Таблица 2 Определение поверхностного (GN:GC) антигена вируса Пуумала с помощью иммуноферментной тест-системы ХАНТА-ПУУ Вирус Общий белок по Лоури в мкг/мл Титр вируса в lg ФОЕ/мл Титр антигена до добавления формалина инактивированный формалином ПУУ-К* 10800 7,2 8192 8192 ПУУ F-1** 45 5,6 1024 1024 ПУУ F-2 63 6,2 4096 4096 ПУУ F-3 94 5,4 1024 1024 ПУУ F-4 111 3,8 128 128 ДОБ F-2 89 6,8 <64 <64 XTH F-2 92 7,2 <64 <64 СЕУЛ F-2 69 6,1 <64 <64 Vero F-2 120 0 <64 <64 Примечание. * - неочищенный концентрат вируссодержащей культуральной жидкости; ** - очищенные гельфильтрацией фракции концентратов культуральной жидкости

С целью определения чувствительности метода приводятся данные по содержанию живого вируса в образцах. Для контроля специфичности тест-системы «ХАНТА-ПУУ» использован концентрат культуральной жидкости клеток VeroE6, являющихся субстратом для размножения вируса, а также пиковые по целевому белку фракции очищенных концентратов вирусов ДОБ, СЕУ, ХТН. Результаты, приведенные в таблице 1, свидетельствуют:

1) иммуноферментная тест-система «ХАНТА-ПУУ» выявляет исключительно антигены вируса Пуумала в титрах, пропорциональных титру вируса, и не выявляет антигены вирусов Добрава, Хантаан и Сеул;

2) инактивирование вируса формалином (0,25%) не влияет на чувствительность и специфичность определения антигенов оболочечного белка GN:GC вируса Пуумала.

Ближайший аналог

Антигены хантавирусов RU 200010888 5 МПК G01N 33/53 1, A61K 39/12 Научно-исследовательский институт эпидемиологии и микробиологии СО РАМН, авторы Кушнарева Т.В., Слонова Р.А., Компанец Г.Г., Заявка: 2000108885/13, 10.04.2000,дата публикации: 27.01.2002 СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ДИАГНОСТИКУ МА ХАНТАВИРУ
СОВ
Антигены хантавирусов RU 2180754, МПК G01N 33/53 1, A61K 39/12 Заявитель Научно-исследовательский институт эпидемиологии и микробиологии СО РАМН, авторы: Кушнарева Т.В., Слонова Р.А., Компанец Г.Г., Заявка: Патентообладатель: Научно-исследовательский институт эпидемиологии и микробиологии СО РАМН, заявка: 2000108885/13, 10.04.2000, Опубликовано: 20.03.2002 СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ДИАГНОСТИКУ МА ХАНТАВИРУСОВ Дата начала отсчетасрока действия патента: 10.04.2000 Антигены хантавирусов RU 99103436, МПК G01N 33/56 9 Заявитель Башкирский государственный медицинский университет, НПО "Башбиомед", авторы: Батыршин Р.А., Плечев В.В., Тимербулатов В.М. заявка: 99103436/14, 01.03.1999, дата публикации заявки: 20.02.2001 СПОСОБ ДИАГНОСТИКИ ГЕМОРРАГИЧЕСКОЙ ЛИХОРАДКИ С ПОЧЕЧНЫМ СИНДРОМОМ Антигены хантавирусов RU 2159439, МПК G01N 33/569 Заявитель Башкирский государственный медицинский университет, НПО "Башбиомед", авторы: Батыршин Р.А., Плечев В.В., Тимербулатов В.М. заявка:99103436/14, 01.03.1999 Опубликовано: 20.11.2000 СПОСОБ ДИАГНОСТИКИ ГЕМОРРАГИЧЕСКОЙ ЛИХОРАДКИ С ПОЧЕЧНЫМ СИНДРОМОМ Дата начала отсчета срока действия патента: 01.03.1999 Предмет поиска Наименование источника информации Автор, фирма (держатель) технической документации Год, место и орган издания (утверждения, депонирования источника) 1 2 3 4 Антигены хантавирусов ГПФ Научно-исследовательский институт эпидемиологии Дата публикации: 27.01.2002

и микробиологии СО РАМН, авторы Кушнарева Т.В., Слонова Р.А., Компанец Г.Г. Антигены хантавирусов ГПФ Научно-исследовательский институт эпидемиологии и микробиологии СО РАМН, авторы Кушнарева Т.В., Слонова Р.А., Компанец Г.Г. Дата начала отсчета срока действия патента: 10.04.2000 Антигены хантавирусов ГПФ Башкирский государственный медицинский университет, НПО "Башбиомед", авторы: Батыршин Р.А., Плечев В.В., Тимербулатов В.М. Дата публикации заявки: 20.02.2001 Антигены хантавирусов ГПФ Башкирский государственный медицинский университет, НПО "Башбиомед", авторы: Батыршин Р.А., Плечев В.В., Тимербулатов В.М. Дата начала отсчета срока действия патента: 01.03.1999 Антигены хантавирусов ГПФ University of Connecticut Health Center, Srivastava P.K. Дата начала отсчета срока действия патента: 01.03.1999

Похожие патенты RU2565543C2

название год авторы номер документа
СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ТЕСТ-СИСТЕМЫ "ХАНТА-N" ДЛЯ ОПРЕДЕЛЕНИЯ СПЕЦИФИЧЕСКОЙ АКТИВНОСТИ ВАКЦИНЫ ПРОТИВ ГЕМОРРАГИЧЕСКОЙ ЛИХОРАДКИ С ПОЧЕЧНЫМ СИНДРОМОМ 2012
  • Дзагурова Тамара Казбековна
  • Ткаченко Евгений Александрович
  • Коротина Наталья Александровна
  • Свешников Петр Георгиевич
  • Солопова Ольга Николаевна
  • Варламов Николай Евгеньевич
  • Малкин Геннадий Андреевич
  • Баловнева Мария Владимировна
  • Соцкова Светлана Евгеньевна
  • Шевелев Алексей Борисович
  • Михайлов Михаил Иванович
RU2590606C2
ШТАММ ВИРУСА - ВОЗБУДИТЕЛЯ ГЕМОРРАГИЧЕСКОЙ ЛИХОРАДКИ С ПОЧЕЧНЫМ СИНДРОМОМ ДЛЯ ИЗГОТОВЛЕНИЯ ВАКЦИННЫХ ПРЕПАРАТОВ (ВАРИАНТЫ) 2009
  • Ткаченко Евгений Александрович
  • Дзагурова Тамара Казбековна
  • Михайлов Михаил Иванович
RU2423520C1
СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ "ДИАГНОСТИКУМА ГЕМОРРАГИЧЕСКОЙ ЛИХОРАДКИ С ПОЧЕЧНЫМ СИНДРОМОМ КУЛЬТУРАЛЬНОГО, ПОЛИВАЛЕНТНОГО ДЛЯ НЕПРЯМОГО МЕТОДА ИММУНОФЛЮОРЕСЦЕНЦИИ" 2010
  • Ткаченко Евгений Александрович
  • Дзагурова Тамара Казбековна
  • Михайлов Михаил Иванович
RU2431148C1
СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ РЕКОМБИНАНТНОГО АНТИГЕНА G2 ХАНТАВИРУСА ДОБРАВА В КЛЕТКАХ E. coli 2011
  • Смирнова Мария Сергеевна
  • Леонович Оксана Александровна
  • Баловнева Мария Владимировна
  • Казеева Тамара Николаевна
  • Белякова Алла Владимировна
  • Дзагурова Тамара Казбековна
  • Филимонова Нина Александровна
  • Ткаченко Евгений Александрович
  • Шевелев Алексей Борисович
RU2495938C2
ШТАММ ВИРУСА ДЛЯ ИЗГОТОВЛЕНИЯ ВАКЦИННЫХ ПРЕПАРАТОВ ПРОТИВ ГЕМОРРАГИЧЕСКОЙ ЛИХОРАДКИ С ПОЧЕЧНЫМ СИНДРОМОМ (ВАРИАНТЫ) 2018
  • Дзагурова Тамара Казбековна
  • Ткаченко Евгений Александрович
  • Ишмухаметов Айдар Айратович
  • Соцкова Светлана Евгеньевна
RU2683508C1
СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ РЕКОМБИНАНТНОГО ФЕРМЕНТАТИВНО-МЕЧЕННОГО АНТИГЕНА G2 ХАНТАВИРУСА В КЛЕТКАХ E.coli С ЦЕЛЬЮ ЕГО ПРИМЕНЕНИЯ В ИММУНОФЕРМЕНТНОМ АНАЛИЗЕ ПРИ ДИАГНОСТИКЕ ГЛПС 2012
  • Смирнова Мария Сергеевна
  • Леонович Оксана Александровна
  • Казеева Тамара Николаевна
  • Кузьмин Владимир Александрович
  • Дурандин Никита Александровна
  • Шибаева Анна Валерьевна
  • Гра Ольга Алексеевна
  • Елагина Елена Михайловна
  • Маракасова Екатерина Семеновна
  • Белякова Алла Владимировна
  • Зылькова Марина Валерьевна
  • Шевелев Алексей Борисович
RU2539836C2
СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ДИАГНОСТИКУМА ХАНТАВИРУСОВ 2000
  • Кушнарева Т.В.
  • Слонова Р.А.
  • Компанец Г.Г.
RU2180754C2
СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ РЕКОМБИНАНТНОГО АНТИГЕНА G2 ХАНТАВИРУСА ДОБРАВА В КЛЕТКАХ E.coli 2012
  • Смирнова Мария Сергеевна
  • Леонович Оксана Александровна
  • Казеева Тамара Николаевна
  • Мутных Елена Сергеевна
  • Папуниди Константин Христофорович
  • Маракасова Екатерина Семеновна
  • Филимонова Нина Александровна
  • Осипенкова Ольга Валерьевна
  • Белякова Алла Владимировна
  • Зылькова Марина Валерьевна
  • Шевелев Алексей Борисович
RU2509805C2
СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ КОМБИНИРОВАННОЙ БИВАЛЕНТНОЙ, КУЛЬТУРАЛЬНОЙ, ИНАКТИВИРОВАННОЙ, КОНЦЕНТРИРОВАННОЙ, ОЧИЩЕННОЙ ВАКЦИНЫ ДЛЯ ПРОФИЛАКТИКИ ГЕМОРРАГИЧЕСКОЙ ЛИХОРАДКИ С ПОЧЕЧНЫМ СИНДРОМОМ 2009
  • Ткаченко Евгений Александрович
  • Дзагурова Тамара Казбековна
  • Набатников Павел Алексеевич
  • Малкин Андрей Евгеньевич
  • Шевелёв Алексей Борисович
  • Воробьёва Мая Сергеевна
  • Белова Галина Андреевна
  • Киктенко Александр Васильевич
  • Михайлов Михаил Иванович
  • Коротина Наталья Александровна
  • Хапчаев Юсуф Хаджи-Бекович
RU2445117C2
Рекомбинантная плазмида pET21-GST-ND, обеспечивающая синтез и секрецию эктодомена Gn гликопротеина вируса Хантаан, и рекомбинантный штамм Escherichia coli BL21(DE3)pLysE pET21-GST-ND - продуцент белка Gn - эктодомена гликопротеина вируса Хантаан 2023
  • Исаева Анастасия Александровна
  • Щербаков Дмитрий Николаевич
  • Яшина Людмила Николаевна
RU2809199C1

Реферат патента 2015 года СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ИММУНОФЕРМЕНТНОЙ ТЕСТ-СИСТЕМЫ ДЛЯ ОПРЕДЕЛЕНИЯ ЭПИТОПОВ ОБОЛОЧЕЧНОГО БЕЛКА ВИРУСА ПУУМАЛА ПРОТЕКТИВНОЙ НАПРАВЛЕННОСТИ В ВАКЦИННЫХ ПРЕПАРАТАХ ПРОТИВ ГЕМОРРАГИЧЕСКОЙ ЛИХОРАДКИ С ПОЧЕЧНЫМ СИНДРОМОМ

Предлагаемое изобретение относится к области биотехнологии и касается способа получения иммуноферментной тест-системы для определения эпитопов оболочечного белка вируса Пуумала протективной направленности в вакцинных препаратах против геморрагической лихорадки с почечным синдромом (ГЛПС). Охарактеризованный способ включает получение мышиных моноклональных антител, обладающих нейтрализующей активностью по отношению к вирусу Пуумала. Сорбцию таких антител на поверхность иммунопанели. Выделение IgG из сывороток крови реконвалесцентов ГЛПС с высокими титрами специфических антител к вирусу Пуумала. Приготовление конъюгата специфических IgG с пероксидазой хрена. Представленное изобретение позволяет с одинаковой чувствительностью выявлять оболочечный белок как живого, так и инактивированного вируса Пуумала, посредством чего контролировать содержание в вакцинном препарате указанного вируса, являющегося возбудителем геморрагической лихорадки с почечным синдромом. 2 табл., 1 пр.

Формула изобретения RU 2 565 543 C2

Способ получения иммуноферментной тест-системы для определения эпитопов оболочечного белка вируса Пуумала протективной направленности в вакцинных препаратах против геморрагической лихорадки с почечным синдромом (ГЛПС), включающий получение мышиных моноклональных антител, обладающих нейтрализующей активностью по отношению к вирусу Пуумала, сорбцию их на поверхность иммунопанели, выделение IgG из сывороток крови реконвалесцентов ГЛПС с высокими титрами специфических антител к вирусу Пуумала и приготовление конъюгата специфических IgG с пероксидазой хрена.

Документы, цитированные в отчете о поиске Патент 2015 года RU2565543C2

RU 2008125435 A, 27.12.2009
US 20080108051 A1, 08.05.2008
US 20040053216 A1, 18.03.2004
FREDRIK ELGH et al., Serological Diagnosis of Hantavirus Infections by an Enzyme-Linked Immunosorbent Assay Based on Detection of Immunoglobulin G and M Responses to Recombinant Nucleocapsid Proteins of Five Viral Serotypes, JOURNAL OF CLINICAL MICROBIOLOGY, May 1997, Vol
Скоропечатный станок для печатания со стеклянных пластинок 1922
  • Дикушин В.И.
  • Левенц М.А.
SU35A1
Кипятильник для воды 1921
  • Богач Б.И.
SU5A1
СПОСОБ ИЗГОТОВЛЕНИЯ ЦВЕТНЫХ КИНЕМАТОГРАФИЙ 1923
  • Чернобаев П.В.
SU1122A1

RU 2 565 543 C2

Авторы

Дзагурова Тамара Казбековна

Ткаченко Евгений Александрович

Коротина Наталья Александровна

Свешников Петр Георгиевич

Солопова Ольга Николаевна

Варламов Николай Евгеньевич

Малкин Геннадий Андреевич

Баловнева Мария Владимировна

Соцкова Светлана Евгеньевна

Михайлов Михаил Иванович

Даты

2015-10-20Публикация

2013-04-10Подача