СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ПРЕПАРАТА ДЛЯ ПРОФИЛАКТИКИ И ЛЕЧЕНИЯ ГЕМОРРАГИЧЕСКОЙ ЛИХОРАДКИ С ПОЧЕЧНЫМ СИНДРОМОМ Российский патент 1996 года по МПК A61K35/16 

Изобретение относится к медицине, конкретно к получению специфических иммуноглобулинов для лечения вирусных заболеваний иммунными препаратами.

Геморрагические лихорадки природно-очаговые инфекционные заболевании с тяжелым клиническим течением. Из трех нозологических форм (Крымской, Омской и геморрагической лихорадки с почечным синдромом (ГЛПС)) последняя форма приобретает все большее практическое значение в инфекционной патологии. Наиболее высокий уровень заболеваемости ГЛПС отмечен в Башкортостане, где показатель заболеваемости составляет в среднем 150 случаев в год на 100 тыс. населения ж то время как по России этот показатель только 10 случаев.

Патогенез заболевания довольно сложен и включает в себя несколько основных моментов: попадание вируса из экскрементов животных через пищу, пыль в организм человека, размножение в течение 2 4 недель (инкубационный период), массовое попадание вируса в кровь, вирусемии, токсемии, сопровождающихся лихорадкой, изменениями в моче и геморрагическими проявлениями. Часто болезнь осложняется нарушением почечной функции вплоть до анурии и разрыва почек.

Лечение ГЛПС сводится, в основном, к симптоматической терапии, включающей жаропонижающие, противовирусные, дезинтоксикационные средства. Эффективность этих мероприятий невысока, тяжесть болезни, в основном, определяется индивидуальной реактивностью организма и степенью вирулентности возбудителя.

Известен способ получения иммуноглобулина для лечения крымской геморрагической лихорадки путем гипериммунизации лошадей антигеном вируса лихорадки [1] Однако введение чужеродного лошадиного белка вызывает тяжелые аллергические реакции, поэтому данный иммуноглобулин в настоящее время для лечения людей не используется.

Предложен метод получения препарата для лечения ГЛПС, заключающийся в отборе сырья от реконвалесцентов и отделении иммунной плазмы, которая содержит специфические антитела в титре не менее 1 16. Этот метод наиболее близко стоит к заявляемому способу, так как предусматривает использование гомологичного сырья, содержащего специфические антитела
Однако данный способ имеет недостатки, связанные с необходимостью получать кровь от ослабленных больных-реконвалесцентов, незначительным количеством целевого продукта, отсутствием метода концентрирования активной фракции, вследствие чего ее низкой активностью. Метод может быть осуществлен только в ограниченных масштабах, отсутствует стандартность препарата.

Цель изобретения заключается в повышении специфической активности целевого продукта и достигается тем, что плазму с титром противовирусных антител не менее 1 4 целенаправленно получают от доноров, проживающих в эндемичных по заболеванию ГЛПС районах и выделяют иммунологически активную фракцию, представляющую собой 10 раствор иммуноглобулина с титром специфических антител не менее 1 512.

Сравнительный анализ существенных признаков заявляемого способа и прототипа показывает, что общим для них является сбор крови и отделение иммунной плазмы. Однако в отличие от прототипа, в котором для получения конечного продукта используется кровь от больных-реконвалесцентов, в заявляемом способе кровь получают от здоровых людей-доноров, проживающих в эндемичных по заболеванию ГЛПС районах. Высокое содержание у них противовирусных антител объясняется постоянными контактами в течение жизни, начиная с раннего возраста, с вирусом ГЛПС (контакты с продуктами жизнедеятельности грызунов-переносчиков инфекции).

Полученный из данного сырья иммуноглобулин обладает выраженной клинической эффективностью и является единственным надежным средством для профилактики и лечения этого тяжелого заболевания. Особенно необходимо отметить, что прототип нельзя применять для профилактики ГЛПС, так как введение плазмы внутривенно в амбулаторных условиях невозможно и экономически неоправдано, тогда как внутримышечное применение иммуноглобулина в условиях поликлиники удобно и просто.

В литературе нет данных о получении и лечении ГЛПС специфическим иммуноглобулином, приготовленным из крови лиц, проживающих в эндемичных по данному заболеванию районах. Следовательно, заявляемый способ соответствует критериям "новизна" и "изобретательский уровень".

Пример.

Кровь забирают от доноров в эндемичном по заболеванию ГЛПС районе, возможно применение плазмафереза. Доставляют кровь или плазму в пункт сбора сырья, из каждого образца берут по 1 мл сыворотки и определяют противовирусные антитела в реакции МФА. Если титр антител 1 4 и более, то образцы крови объединяют, если необходимо, отделяют эритроциты сепарированием и плазму объединяют в загрузку объемом 100 л. Титр котловой загрузки составляет 1 64. Процесс фракционирования проводят согласно регламенту производства иммуноглобулина человека нормального. Получают целевой продукт 4,5 литра 10 раствора иммуноглобулина, в котором титр антител к вирусу ГЛПС составляет 1 2048. Препарат разливают в ампулы по 5 мл, проводят все необходимые контроли и используют иммуноглобулин для лечения ГЛПС.

Данным способом приготовлено 5 серий препарата. В таблице 1 показано распределение титров антител в крови доноров, проживающих в эндемичных по заболеванию ГЛПС и контрольных районах.

Из таблицы следует, что количество лиц, имеющих титр специфических антител в крови в проживающих в эндемичных районах, составляет 70 90 от всего количества доноров, тогда как в контрольных районах количество серопозитивных доноров не более 10
Сохранность титров специфических антител в целевом продукте в процессе хранения показала в таблице 2. Титры антител незначительно снижаются только к концу срока годности препарата (2 года с момента выпуска).

Препарат был испытан в двойном слепом опыте на базе 4-й инфекционной больницы г. Уфы. Программа испытаний, разработанная НПО "Иммунопрепарат", утверждена ГИСК им. Л. А. Тарасевича, препараты (противогриппозный иммуноглобулин плацебо и иммуноглобулин против вируса ГЛПС) были зашифрованы комитетом вакцин и сывороток. Одновременно оценивалась эффективность иммунной плазмы (прототип). Испытания проходили с августа 1990 по январь 1992 г.

Больные были преимущественно мужчины в возрасте от 20 до 45 лет, состояние которых при поступлении было расценено как тяжелое. Диагноз ГЛПС во всех группах подтвержден клиническими и серологическими данными (нарастание титров МФА в парных сыворотках в 4 и более раз).

Результаты лечения суммированы в табл. 3.

При сравнении обычного (противогриппозного) иммуноглобулина плацебо, иммунной плазмы и иммуноглобулина, полученного предлагаемым способом, установлена высекая эффективность специфического иммуноглобулина (3 группа). Длительность нахождения больных в стационаре сокращается в 1,5 раза, длительность олигоанурического периода почти в 2 раза, значительно менее выражена интоксикация, ниже уровень мочевины и креатинина крови ( в разгар болезни). Геморрагический синдром был также менее выражен в 3 группе, проявляясь единичными петехиями, кровоизлияниями в местах инъекций, микрогематурией. В группах 1 и 2 (плацебо и прототип) геморрагический синдром проявлялся обширными кровоизлияниями в склеры, конъюнктиву, макрогематурией, носовыми кровотечениями.

Переносимость иммуноглобулина была хорошей, никаких местных и системных реакций ни у одного больного отмечено не было.

Таким образом, получение препарата путем целенаправленного забора крови у лиц, проживающих в эндемичных по заболеванию ГЛПС районах, имеющих постоянные контакты с вирусным материалом, обеспечивает высокое качество исходного продукта, возможность получения значительного количества плазмы от здоровых доноров. Выделение иммунологически активной фракции плазмы (иммуноглобулина) обеспечивает высокую концентрацию антител в целевом продукте (10 растворе иммуноглобулина), который можно применять как для лечения, так и для профилактики заболевания.

Высокая эффективность препарата по сравнению с плацебо и прототипом подтверждена клиническими испытаниями, проведенными по заданию ГИСК им. Тарасевича. Значительно сократилось время нахождения больных в стационаре, уменьшилась длительность олигоанурического периода и выраженность геморрагического синдрома. Следовательно препарат, полученный предлагаемым способом, имеет высокую специфическую активность, клиническую эффективность, что может сделать препарат надежным средством лечения и профилактики ГЛПС. ТТТ1 ТТТ2 ТТТ3

Изобретение относится к медицине и может использоваться при получении специфических иммуноглобулинов для лечения и профилактики ГЛПС. Цель изобретения - повышение специфической активности целевого продукта. С этой целью для получения препарата используют иммунную плазму с титром специфических антител не менее 1 : 4, полученную от доноров, проживающих в эндемичных по заболеванию ГЛПС районах, и выделяют иммунологически активную фракцию (иммуноглобулин), которая должна иметь титр специфических антител не менее 1 : 512. 3 табл.

Способ получения препарата для профилактики и лечения геморрагической лихорадки с почечным синдромом, включающий сбор крови и отделение иммунной плазмы, отличающийся тем, что сбор крови осуществляют от здоровых лиц, при этом используют кровь с титром противовирусных антител не менее 1:4 и отделяют иммунологически активную фракцию крови, представляющую раствор иммуноглобулина с титром специфических антител не менее 1:512.