Способ определения нарушения оплодотворяющей способности эякулята Советский патент 1985 года по МПК A61B10/00 

Изобретение относится к медицине и может быть использовано при лабораторной диагностике мужского бесплодия и последующей патогенетической терапии.

Известен способ определения нарушения оплодотворяющей способности эякулята путем определения ферментативной активности эякулята ij.

Недостатком известного способа является его низкая точность.

Цель изобретения - повглвение точности способа.

Поставленная цель достигается тем, что согласно способу определекия нарушения оплодотворяющей cjtoсобности эякулята, включающему определение ферментативной активности эякулята, в пробе определяют актив- ность креатинфосфокиназЫр гидроокси.бутиратдегвдрогеназМ;, лактатдегидрогеназы, рассчитывают соотношение гйдрооксибутиратдегидрогеназы к лактатдегвдрогеназе и при снижений этого соотношения менее 1,0 и одно™ временном повьшении активности крватинфоофокиназы относительно нор№ определяк5Т нарушение оплодотворяющей способности-эякулята,

Способ осуществляют следующим образомо .

В пробе эякулята определяют активность ферментов: креатинфосфокиназы

(КФК),гйдрооксибутиратдегидрогеназы (ГБДГ) и лактатдегвдрогеназы (ЛДГ)

Опраделение креагинфосфокиназы гкдрооксибутиратдегкдрогеназы, п&ктадегидрогеназы осуществляют спектрофотометрически по изменению оптической плотности субстрата при 340 им в течение 1 мин при 37°С для ГБДГ я ЛДГ и при аЗС для КФК,

Для определения креатинфосфокина- зы реакционная смесь содержит 20 мкл исследуемого образца эякулята ксторьй предварительно разводят фйзиоло гическим раствором 1г20(рабочий раствор), и 525 мкл субстрата, содержащего 100 ммоль 3 этанолаш1нового буфера, рН 7,0, 35 ммоль/л креатинфосфата, 20 ммоль/л глюкозы 9 ммоль/г глютатиона,, 10 ммоль/л уксуснокислого магннЯо 1 ммодь/л АДФ5, . ммоль/л НАДФ, 10 ммоль/л АМФ, 1,2 кЕ/л, мин, глюкозо-6-фосфатдегвдрсганаэы, 1,2 кЕ/л мин гексокиназ Получеиную смесь перемешивают и инкубируют при в течение 5 мин.

Затем при 340 им измеряют изменение оптической плотности в 1,0 см кювете через 1,0 мин, в течение 3 мин. Активность фермента рассчитывают по формуле; дА/мин х 3524 Е/л и выражают в международных единицах Е/л.

Для определения гйдрооксибутиратдегидрогеназы реакционная смесь содежит 20 мкл раствора эякулята, разведенного 1:20 физиологическим раствором, и 630 мкл сусбстрата, содержащего 3sО ммоль/л натриевой соли й(.-кетобутирата, 0,18 ммоль/л НАД-Н и 50 ммоль/л фосфатного буфера, рН 7,5, Полученную смесь перемешивают, инкубируют при 37°С в течение 1,0 ми а {затек при 340 им измеряют изменение оптической плотности через 1,0 мин в 1,0 см кювете в течение 3 НИН, Активность фермента рассчитьЕвают по формуле 5 д А/мин к 5000 Е/л и выражают в международных единицах Е/л.

Для определения лактатдегидрогена зы реакционная смесь содержит 20 мкл эякулята, разведенного Is 20 физиоло-гическим раствором, и 630 мкл субстрrSj, содержащего ммоль пирувата, i-моль/л НАДН 8,50 ммоль/л фосфатного буфераJ рН 7(5,, Полученную смесь перемешивают инкубируют при 37°С в течение 1,0 мин и измеряют изменение оптической плотности в IjO см кзовете в течение 3 минут. Активность рассчитьгаают по формуле: йА/мин-х 492 Е/л и вьфажают в международных еднницах Е/п,

Рассчитывают отношение величины активности ГБДГ г ЛДГ и при повьшгекии активности КФК относительно нормы (более 959 Е/л) и отношении ГБДГ/ЛДГ менее диагностируют.

П р и м ер 1 Вольной Бе, обсле ДОЕЛИ по поводу бесплодного брака, 25 KST,, рразсткческн здоров вторичEss& йолоБые признаки вьфажены, Иссладовгние эдкулята показало нормальмое содержание сперматозоидов, их. жизнеспособность, подвижность 89%, лейкоциты единичные, слизи нет. Проба Курпрока-Мшшера положительная, проба Сгожа-Гунера положительная, микроагглютинация по Баскину отрицательная. Данные предлагаемого способа; креатинфосфокиназа 1230 Е/л ГБДГ/ЛДГ 0,89 Заключение: сни женна ототодотзоряющей способности эякулята. Проведенное лечение позволило нормализовать КФК, ГБДГ, ОДГ. Через 2 месяца после лечения у супруги наступила беременность.

Пример 2. Больной К,, обследован по поводу бесплодного брака, 27 лет, практически здоров. Первичные и вторичные половые признаки вьфажены. Исследование эякулята по прототипу выявило нормальную оплодотворяющую способность. Определение КФК, ГБДГ, ДДГ показало, что активность КФК составляет 949 Е/л, а соотношение ГБДГ к ЛДГ равно 1,1, что указывало на отсутствие изменения оплодотворяющей способности эякулята. Рекомендовано комплексное обследование и лечение супруги. В последующем у нее наступила беременность.

1499404

Пример 3, Больной П,, обследован по поводу бесплодного брака, 25 лет. Практически здоров, Первичньш и вторичные половые признаки вьфажены. Исследование эякулята по прототипу выявило нормальную оплодотворякнцую способность. Определение КФК, ГБДГ, ЛДГ показало, что активность КФК была 951 Е/л, а соотношение ГБДГ к ДЦГ равно 0,99, что указывало на снижение оплодотворяющей способности эякулята. Рекомендовано комплексное лечение, после проведения которого у супруги наступила беременность.

Использование предлагаемого способа в медицинской практике повышает точность диагностики до 77,7%, Кроме того, способ прост в

исполнении, может быть осуществлен в лабораторных условиях.

СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ НАРУШЕНИЯ ОПЛОДОТВОРЯОДЕЙ СПОСОБНОСТИ ЭЯКУЛЯТА путем определения ферментативной активности эякулята, отличающийся тем, что, с целью повышения точности способа, в пробе определяют активность креатинфосфокиназы, гйдрооксибутиратдегидрогеназы, лактатдегидрогеназы, рассчитывают соотношение гидрооксибутиратдегид рогеназы к лактатдегидрогеназе и при снижении этого соотношения менее 1,0 и одновременном повышении активности креатинфосфокиназы от носительно нормы определяют нарушение оплодотворяющей способности эякулята.