Способ определения динамики таксиса анизотропных по форме микроорганизмов Советский патент 1985 года по МПК C12N1/00 

и

э д

00 1 Изобретение относится к микробио логии и может быть использовано для определения динамики анизотропных по форме микроорганизмов в прим нениях к микробиологической промьш лениости, а также к медицинским исследованиям. Предлагаемый способ позволяет проводить оперативное измерение так сиса анизотропных по форме микроорганизмов, а сЛедопательно, определять наличие подвижности у бактериальных клеток и оценивать динамику их поведения при воздействии градие та раздражителя. Известен способ определения таксиса микроорганизмов с помощью капилляра. Сущность способа заключает ся в том, что капилляр с раздражителем (в частности, с хемоэффектором - аттрактантом или репеллентом) открытым концом (противоположный коНец капилляра запаян) вводится в U-образную трубку, находящуюся на предметном столике микроскопа. Чере час капилляр извлекается из камеры, его содержимое выдувается в пробирку с питательной средой, и далее содержимое пробирки выливается в чашку с питательной средой после чего подсчитывается число колоний. Время измерения составляет около суток l . . К недостаткам способа относится плохая воспроизводимость результатов, обусловленная низкими точностя ми микробиологических операций (посевы, подсчеты колоний и т.д.) и невозможностью создания и изменения градиентов раздражителя в соответствии с требованиями эксперимента. 1Воспроизводимость метода составляет ii5% и позволяет определить наличие таксиса к определенным раздражителя Этот способ не может быть применен для изучения быстрой динамики проце сов таксиса, так как точность визуальных наблюдений в капилляре чрезвычайно низка получение результатов требует продолжительных затрат на проведение эксперимента. Наиболее близким к изобретению по технической сущности и достигаем му результату является способ опред ления таксиса по слежению за образо нием полосы бактериальной популяции 2 . 8 Для осуществления способа разработана установка, в которой испбльзован принцип определения числа бактерий по интенсивности светорассеяния в направлении, перпендикулярном падающему лучу лазера. Указанный принцип справедлив при концентрации бактерий ниже 10 клеток/мл. Задача заключается в определении изменений мигрирующей полосы бактерий после ее образования. В конкретном эксперименте по изучению таксиса Salmonella typhimurium перераспределение клеточной концентрации регистрируется через 15 мин после наслоения градиен.та хемоэффектора на равномерно распределенные по кювете бактерии. Однако вклад в интегральное светорассеяние обуславливается не только клетками, обладающими таксисом, а всеми клетками, имеющимися в суспензии. Кроме того, способ обладает низкой чувствительностью, так как регистрация эффекта изменения светорассеяния в ограниченном телесном угле при малых концентрациях клеток не позволяет получить высокого отношения сигнал/шум. Целью изобретения является повышение чувствительности и ускорение способа. Поставленная цель достигается тем, что при способе определения динамики таксиса анизотропных по форме микроорганизмов, включающем введение градиента раздражителя в суспензии бактерий, после введения градиента раздражителя спектрофотометрически регистрируют ориентацию клеток. Изменение оптической плотности обуславливается изменением светорассеяния за счет обнаруженного явления ориентации микроорганизмов при положительном или отрицательном таксисе в градиентах раздражителя. Указанный эффект, заключающийся в изменении светорассеяния из-за ориентации клеток, наблюдается только для клеток, обладающих анизотропной формой (палочки, цилиндры, эллипсоиды вращения и т.д.). Для клеток абсолютно сферической формы этот эффект не имеет места. Следует отметить, что большинство подвижных клеток, обладающих эффектом таксиса, имеет анизотропную форму. Поскольку ориентация клеток в градиенте раздражителя осуществляется

СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ ДИНАМИКИ ТАКСИСА АНИЗОТРОПНЫХ ПО ФОРМЕ МИКРООРГАНИЗМОВ, включающий введение градиента раздражителя в суЬпензию бактерий, отличающийся тем, что, с целью повышения чувствительности и ускорения способа, после введения градиента раздражителя спектрофотометрическн регистрируют ориентацию клеток.