Средство для индукции тромбоцитопоэтинов в циркулирующей крови Советский патент 1985 года по МПК G01N33/48 A61K31/787 A61P7/00 

ел ел

;О

9 1 Изобретение относится к исследованию крови, а именно к использованию химическ1-1х агентов для обогащения крови животных эндогенными сти Iyлятopaми тромбоцитопоээа (тромбоцит оноэ тинами), и может быть применено в (биотехнологии и медико-биоло гическ: : исследованиях для получения препаратов плазмы с высокой активностью тромбоцитопоэтинов, стиму ляции мегакарноцито-тромбоцитопоэза повышения числа тромбоцитов в гемо- циркуляции, а- также при изучении молекулярной природы и функции тром боцитопоэтинов . Цель изобретения - упрощение индукции для тромбоцитопоэтинов в цир кулирующей крови. Пример .1, Для эндогенной индукции тромбоцитопоэтинов мышам (СВЛ СЗУВЬ) вводили виутр1шенно водные растворы поливинилпиридинов (см, таблицу) в объеме Ojlf-ffl на 10 г массы тела или 1з том же объеме антитромбоцитарную кроличью сыворот ку (в разведении, вызывающем 80-90% тромбоцитопенический эффект) долученпую от доноров, иммунизированных трехкратно.на протяжении 3 месяцев тромбоп.итами мышей (прототип метода Контрольным мышам аналогично вводили- но 0,1 мл на 10 г массы 0,9%-ный раствор хлорида натрия. Эндогенную индукцию тромбоцнтопоэтинов оценивали по развитию тромбоцитоза на 5-6 сут после введения стимулирующи агентов. Счет тромбоцитов проводили фазовоконтрастньа методом в камере Горяева. Поливинилпиридины различного .стровния и сополимер вииилпиридина (см. т.аблицу) вызывают у реципиенто /продуктивный тромбоцитоз, наступающий на 4-5 сут после инъекции агентов вслед за фазой первичной тромбо

Индукция тромбоцитоза у мыш,ей (CBAK.C57BL) F под влиянием поливинилпнридинов и антиТромбоцитарно,й сыворотки АЗ2 дитопении продолжительностью до 3 суто Аналогичный эффект оказывает антитромбоцитарная сыворотка. В контрольных опытах при введении физиологического раствора тромбоцитоз не развивается., Прим ер 2. Для получения плазмы крови, обогап енной тромбоцитопоэтинами, мышам СВА массой, 22 26 г (по 20 животных в группе) однократно вводили внутривенно поливинилпиридины в дозе 50 мг/кг (0,5%ный раствор) или сополимер 2-метил- -5-винилпиридина с метакриловой кислотой (5 мг/кг, р,05%-ный раствор). Аналогично другим.группам мышей инъецировали антитромбоцитарную сыворотку в дозе, вызывающей 80-90% тромбоцитопению,, или 0,9%-ный раствор хлортада натрия (контроль), Через сутки после введения агентов у доноров пункцией сердца собирали, кровь с добавлен11ем гепарина (10 ед/мл), клетки осаждали центри- фугированием, полученную плазму объеди1 яли по грзшпам и вводили мышам-реципиентам (8-10 животных, на группу) внутривенно по 0,3 мл дважды с интервалом 24 ч,,Тромбоцитопоэтиповую активность плазмы оценивали по развитию у реципиентов тромбоцитоза на 3-7 сут после инъекции. Донорская плазма мьтгей, стимулированньгх введением полимерных соединений, также как и плазма животньгл, получив лих антитробмоцитарную сыворотку, обладает тромбоцитоцоэтиновой активностью. Во всех случаях введение такой плазмы приводило к развитию у реципиентов тромбоцитоза, достигающего максимума (130-150% нормы) на 4-5 сут. Плазма контрольных доноров достоверно не изменяла числа тромбоцит,ов в русле крови.

Продолжение таблицы

Применение поли-2-винилпиридина или поли-4- винилпиридина, или поли-2-метил-5-винилпиридина, или сополимера поли-2-метил-5-винилпиридина с метакриловой кислотой в качестве средства для индукции тромбоцитопоэтинов в циркулирующей крови. Л

Поли-2-метил-5-винилпиридин

Сополимер 2--метил-5-винилпиридина с метакриловой

кислотой (2:1)

Антитромбоцитарная сьшоротка

0,9%-ный раствор хлорида

натрия При. меч а ни е. .

157 Полимерные соединения вводили внутривенно в вцде уксуснокисльрс растворов, рН 4,5; t - характеристическая вязкость в 1%-ной зкеусной кислоте, Различие статистически, достоверно по критерию Стьюдента (при Р 0,05) по сравнению с исходными показателями (до инъекции полимеров)