Штамм ацидофильных метилотрофных бактерий @ @ ВСБ-924-продуцент белка Советский патент 1986 года по МПК C12N1/32 C12N15/00 C12N1/20 C12R1/02 

а

00 Од

со оь

Изобретение относится к микробиологической промышленности и касается нового штамма ацидофильных метилотрофных бактерий - продуцента биомассы на основе метанола.

Получение микробной биомассы на основе метанола - один из эффектных путей обеспечения народного хозяйства и, в первую очередь, животноводства белково-витаминными концентратами.

Цель изобретения состоит в селекции нового штамма ацидофильных метилотрофных бактерий, способного развиваться при повьшенной температуре и расти на средах в метанолом при температуре ЗД-Зб С, обеспечивая выход биомассы, равный 40-50% к заданному метанолу.

Предлагаемый штамм метанолокислягацих бактерий Acetobacter methylicum ВСБ-924 вьщелен из спонтанного микробного комплекса, образующегося в процессе ферментации метанола ацидофильными метйнолокисляющими бактериями в нестерильных условиях, и далее селекционирован в процессе длительного пассирования на средах с мета-

НОЛОМ,

, Штамм Acetobacter methylicum ВСВ924 характеризуется следующими признаками.

Морфологические признаки.

Клетки штамма прямые, короткие палочки, одиночные или соединенные попарно, редко образуют короткие цепи.

Размеры клеток на синтетической среде 0,8-1,0 VI,1-1,6 мкм,

Бактерии грамотрицательные, подвижные, спор не образуют.

Колонии на минеральной среде с метанолом округлые, гладкие, выпуклые с блестящей поверхностью и ровным краем, не прозрачны, серо-белого цвета, вязкой консистенции, диаметром 1-2 мм,

Физиологические и культуральные свойства.

Факультативный метилотроф. Из С соединений использует метанол, не использует метиламин, диметиламин, триметиламин; из Сахаров использует глюкозу, сахарозу, не использует галактозу, ксилозу, лактозу, мальтозу, рамнозу; из.спиртов, кроме метанола, использует глицерин и спабо этанол, не использует пропаноЛ, изо-пропанол

н-бутанол, изобутанол, изоамиловыи, маннит, дульцит; из органических кислот использует ацетат, слабо пируват, сукцинат, не использует формиат, оксалат, лактат, пропионат, бутират, фумарат, малат, малеат,с|1 -кетоглутарат, цитрат.

На мясо-пептонном агаре не растет, На средах с желатиной не растет и желатину не разжижает.

Нитраты в нитриты не восстанавливает,

К брожению не способен, 5

Тесты на оксидазу каталазу положительные.

Для роста нуждается в пантотено0 вой кислоте, которая может быть заменена автолизатом или другими содержащими ее источниками. При незащищенной ферментации в присутствии небольшого числа неметилотрофных спутников может расти без добавок пантотеновой кислоты. Штамм чувствителен к типовому фагу МО-1 и устойчив к окситетрациклину,

0 „

в нестерильных условиях штамм

устойчив к инфицированию посторонней микрофлорой,

Штамм хорошо сохраняется в лабораторных условиях на агаризированных 5 средах с метанолом.

Бактерии относятся к облигатньш аэробам, хорошо растут на синтетических средах с метанолом, содержащих источники азота, фосфора, микроэлементы и другие минеральные компо- . ненты, при низких значениях рН среды 2,0-6,0, максимальный рост при рН 3,5-5,0, при рН 6,9 рост отсутствует.

Штамм развивается при температуре 28-5 7 С, оптимальная тe |Iпepaтypa роста 30-36 С.

При оптимальной температуре штамм растет со скоростью 0,21 ч, выходом биомассы к заданному метанолу 0 40-50% и содержанием белка 70-76%,

Штамм непатогонён.

Пример 1. Штамм бактерий Дcetobacter methyl icum ВСБ-924 вьгращивают непрерывным способом в нестерильных условиях в ферменте объёмом 0,8 м при 34°С на минеральной среде с рН 4,0 следуницего состава, г/кг сухой биомассы;

60,0

24,6

26,7

0,235

0,24

0,51

0,99

0,52

0,08

0,4

Содержание метанола в приточной среде 115 кг/м. Источником азота служит раствор аммиака, который одновременно используют и для поддержания рН на заданном уровне, Непрерывное выращивание осуществляют при скорости протока 0,16 Выход биомассы составляет 50,0% -к заданному метанолу. Биомасса содержит до 77% сьфого протеина.

П р и м е р 2. Штамм бактерий Acetobacter methylicum ВСБ-924 вьфащивают таким же способом и на такой же среде, как в примере 1, но при температуре , содержании метано ла в приточной среде 144 кг/м и скрости протока 0,12 ч Выход биомассы составляет 45,5% к заданному метанолу. Биомасса содержит 70,2% сырого протеина.

Примерз. Штамм бактерий Acetobacter methylicum ВСБ-924 выращивают таким же способом и на такой же среде, как в примере 1, но в ферментере объемом 30 л, содержании метанола в приточной среде 38 кг/м, скорости протока 0,21 ч при температуре , Выход биомассы от заданкого метанола составляет 42% и содержание сьфого протеина 74%.

П р и м е р 4. Штамм бактерий Acetobacter methylicum ВСБ-924 выращивали периодическим способом в колбах на качалке при температуре 30 С, рН среды 4,0 на минеральной среде следующего состава, г/л:

,0

(NH) ,5

,2

0,2

К,SO,

Раствор микроэлементов (0,5 л),

содержащий, г/л:

0,02

KI

Н,ВОз 0,02

MnSO

5HgO 0,02

(NH) 0,02 MoO,

FeSO,

A 7H,0 0,1

МеТанол вносят в среду в количестве 5 мл/л. В среду добавляют дрожжевой автолизат в количестве 2 мл/л. После 2 суток роста выход биомассь |ОТ заданного метанола составляет 40%.

П р и м е р 5. Штамм бактерий Acetobacter methylicum ВСБ-924 выра щивают таким же способом и на такой же среде, как ив примере 4, но при температуре 37°С. Выход биомассы от заданного метанола составляет 30%.

Штамм ацидофильных метилотрофных бактерий Acetobacter methylicum ВСБ-924(коллекция Центрального музея промышленных микроорганизмов ВНИИгенетика, коллекционный номер ЦМПМ В-2942) - продуцент белка.