Способ определения активности @ -зависимых дегидрогеназ Советский патент 1985 года по МПК G01N33/48 

« 11 Изобретение относится к биохимии и может быть использовано в технической микробиологии и медицинской диагностике и предназначено для измерения микроколичеств NAJIH-зависимых дегидрогеназ. Цель изобретения - повышение точности способа. П р и м е р. В качестве ЫАДН-зависимой дегидрогеназы использовали лактатдегидрогеназу из сердечной свиньи с удельной активностью 200 ед/мг (Reanal-Венгрия) К образцу, содержащему 50 мкл миристинового альдегида, 1,09 М; 50 мкл флавинмононуклеотида, 2,5 «10 М; частично очищенный препарат люциферазы из Beneckea harveyi, содержащей и NAflH ФМН-оксидоредуктазу (активность люциферазы 7-10 активность NAJW ФМИ-оксидоредуктазы 0,01 мкмоль/мл) - 30 мкг; 100 мкл пирувата, 810 М; 0,1 мкг лактадегидрогеназы; 460 мкл 0,1 М; К, Na-фосфатного буфера, рН - 7,0 добавляли 100 мкл NAJIH 1,210 М. Из3мерение проводили в термостатируемой кювете при 30°С. Для учета неспецифического окисления NAJUi измерения, аналогичные описанным выше, проводили в отсутствии NAДH-зaвиcимой дегидрогеназы. Кинетика уменьшения биолюминесценции в присутствии и отсутствии- лактагидрогеназы соответствовала псевдопервому Порядку. Констанку псевдопервого порядка спада биолюминесценции рассчитывали по формуле Константы спада бяюлюминесценции в присутствии и отсутствии ЫАДН составляют 15,8 и 0,22 соответственно. Аналогично были посчитаны константы спада и для других концентраций лактатдегидрогеназы. Константа спада К прямо пропорциональна количеству лактатдегидрогена.зы.

СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ АКТИВНОСТИ NAДH-ЗАВИСИМЫХ ДЕГИДРОГЕНАЗ путем добавлення КАДН-зависимой депщрогеиазы, ее субстрата - акцептора злектроИОВ и NAДH в реакционную смесь,содержащую люциферузу, NAДH:ФMH-oкcидopeдyктазу и их субстраты с последуюш}1м измерением биолюминесценции,о тличающийс я тем, что, с целью повышения точности способа,ийпользуют субстрат - акцептор электронов в насыщающей концентрации, а МАДН в концентрации М и активность определяют по константе псевдопервого порядка спада биолюминесценции.