Способ определения сульфгидрильных групп в крови Советский патент 1986 года по МПК A61B5/00 

Изобретение относится к биохимии, в частности к способам физико-химического (электрохимического) анализа крови на содержание сульфгидрильных (SH)-групп.

Цель изобретения -- повышение точности способа и сокращение времени исследования за счет изменения носледовательности добавления реагентов и определенного соотношения азотпо-кислого серебра и сульфгидрильных групп.

Способ осуществляется следующим образом.

Вначале пробу крови приливают к буферному раствору, затем добавляют растнюр азотно-кислого серебра в количестве, заведомо большем, чем необходимо для связывания сульфгидрильных групп в крови, в соотношении с сульфгидрильными группами 1:(1,5- -2) и измеряют диффузионный ток, но величине которого с помощью номограммы определяют содержание сульфгидрильных групп.

Пример. 0,1 мл исследуемой крови ге- молизируют в бидистиллированной воде при разведении 1:20, 0,5 мл полученного гемо- лизата переносят в электролитическую ячейку, содержащую 20 мл буферного раствора NH40H и NH4NO:i. Затем добавляют 0,6 мл 0,001 М раствора азотно-кислого серебра. Далее измеряют диффузионный ток, характеризующий концентрацию избытка ионов серебра, оставщихся в исследуемом растворе, по величине которого определяют содержание SH-rpynn. При этом исследовательская установка снабжена номограммой, на которой отражена линейная зависимость диффузионного тока, измеряемого на последней стадии анализа, от концентрации избыточного азотно-кислого серебра. Для повьциения точности определения указанная линейная зависимость (для данного комплекта аппаратуры) может быть выражена простейшей формулой. Сила тока зависит от концентрации электролитов в растворе и от величины потенциала. При амперометри- ческих исследованиях разность потенциалов между двумя электродами электролитической ячейки поддерживают постоянной, что позволяет по силе тока судить о величине (и за изменением) концентрации электролитов в растворе.

Учитывая, что 1 мл 0,001 М раствора азот- но кислого серебра эквивалентен 1 мкМ сульфгидрильных грунп, содержание которых обычно относят к 100 мл субстрата, формула имеет вид

S

-b(Ii--lo),

гл,е S - количество SH-rpynn субстрата на 100 кл крови, в мкМ 100 мл; VSH - объем исследуемого субстрата, мл;

А - степе} ь разбавления крови; Aij - объем раствора 0,001 М азотнокислого серебра, мл; };. - масштабный коэффициент, определяемый для данного комплекта а-п- паратуры в холостом опыте, в мкМ/мкА; . - диффузионный ток, соответствуюищй избытку .4p.NO(, мкА; 1о фоновой диффузионный ток, мкА.

При постоянных условиях опыта (степень разбавления, объемы используемых растворов) формула может упроститься: S : с -- b(I,-Io),

К анализируемому раствору (гемолизату,

растворенному в буферном растворе NH4OH и NH-jNO.;), не содержащему электроактивных компонентов, которые могли бы обусловить диффузионный ток более I-2 мкА, добавляют избыток раствора AgNOj. Пос ледний взаимодействует с имеющимися SH- группами анализируемого раствора, в результате чего диффузионный ток, измеряемый после этой добавки, соответствует концентрации избыточной части введенного азотнокислого серебра. Зная исходное количество

ионов и величину их остатка, по израсходованному количеству определяют концентрацию SH-rpynn (CUg Cs). В описываемых условиях опыта Vs/, 0,5 мл; а 20; VA 0,6 .мл; b 40 мкМ/мкА; Ii 32 мкА;

0 1о 1 мкА. Тогда S 1160 мкМ/100 мл. При постоянных условиях опыта (постоянны степень разбавления, объемы исследуемого субстрата и раствора азотно-кислого серебра) С 2400 мкМ/100 мл и S также равно 1160 мкМ/100 мл.

В таблице гфиводятся дополнительные примеры на средние и граничные значения соотношения количеств SH-rpynn и AgNOs при определении SH-rpynn в 0,1 мл крови.

5

1220 1176 1216

4-5 4-5 4-5