СПОСОБ АМПЕРОМЕТРИЧЕСКОГО ОПРЕДЕЛЕНИ5^'«=-—-•->&-.-—-^ Советский патент 1965 года по МПК G01N33/49 G01N33/84 

Известные способы амперометрического определения сульфгидрильных групп в сыворотке и цельной крови в присутствии буферного раствора NH40H и МН4МОз с помощью раствора азотнокислого серебра, например титрованием, весьма трудоемки и требуют значительной затраты времени.

Предложен способ, по которому в буферный раствор предварительно вносят раствор азотнокислого серебра, измеряют диффузионный ток, затем добавляют исследуемый субстрат, вновь измеряют диффузионный ток и определяют концентрацию сульфгидрильных групп по разности потенциалов.

Такой анализ позволяет затрачивать на одно определение не более 5-6 мин.

Для определения концентрации сульфгидрильных групп в 25 мл буферной смеси, содержащей 0,01 моль аммиака и 0,08 моль нитрата аммония, вносят некоторое количество (0,001 М) раствора нитрата серебра. В силу возникновения диффузионного тока стрелка микроамперметра отклоняется вправо; при этом количество раствора нитрата серебра не должно быть таким, чтобы стрелка отклонялась за пределы шкалы. При добавлении исследуемого раствора происходит уменьшение диффузионного тока за счет связывания ионов серебра сульфгидрильными группами, и стрелка микроамперметра отклоняется на определенное число делений влево. Учитывая, что 1 мл 0,001М раствора нитрата серебра эквивалентен 1 М сульфгидрильных групп, содержание которых обычно относят к 100 мл субстрата, расчет производят по формуле

и . Л 100

N -т

где К. - количество раствора нитрата серебра,

мл;

т - количество субстрата, мл; N - отклонение стрелки вправо, деления; п - отклонение стрелки влево, деления.

Пример. 0,1 мл цельной крови гемолизируют в бидистиллированной воде при разведении 1 : 20, берут 0,1 мл гемолизата и вносят в 25 мл буферной смеси, в которую предварительно добавляют 0,5 мл 0,001 М раствора нитрата серебра. Отклонение стрелки микроамперметра вправо при введении нитрата серебра составляет 84 деления, а отклонение влево при введении гемолизата крови- 1 делений. Концентрация сульфгидрильных групп (с учетом разбавления) в миллимолях на 100 мл сыворотки крови составляет 3 Предмет изобретения Способ амперометрического определения сульфгидрильных групп в сыворотке и цельной крови в присутствии буферного раствора5 NHiOH и с помощью раствора AgNOs, отличающийся тем, что, с целью уско4рения и упрощения исследования, в буферный раствор предварительно вносят раствор AgNO:,, измеряют диффузионный ток, затем добавляют исследуемый субстрат, вновь измеряют диффузионный ток и вычисляют содержание сульфгидрильных групп по разности потенциалов.