Способ определения активности гиалуронидазы Советский патент 1986 года по МПК G01N33/48 

Изобретение относится к медицийе, биохимии и медицинской технике, а именно к определению активности гиа- луронидазы, препарат которой применяется в клинике, биохимических и ме дицинских исследованиях.

Цель изобретения - упрощение способа за счет использования в качестве субстрата стекловидного тела глаза.

Способ осуществляют следующим образом.

Пример. Фрагменты стекловидного тела доводят до рН 7,4, затем по 0,05 мл стекловидного тела набира ют в стеклянные градуированные тру-- бочки. Для каждого измерения берут по три параллельные пробы. В отмеренные объемы стекловидного тела с помощью микрошприца вводят по 0,01 МП раствора гиалуронидазы (активностью 10 ед./мг). В опытах активность препарата гиалуронидазы искусственно изменяют путем частичной замены растворов фермента раство ром сьшороточного альбумина. В одни контрольные пробы с интактным стекло

5

10

363712

видным телом вводят по 0,01 мл дистиллированной воды. В др угие - раствор гиалуронидазы с активностью 2,5 ед./мг, но предварительно инак- тивированной нагреванием (при 60 С 15 мин). Все пробы инкубируют в термостате при 37°С 60 мин. Далее пробы стекловидного тела переносят в отдельные чашки Петри и распределяют на дне в -пределах окружностей с диаметром 15 мм. Чтобы избежать движений воздуха и неравномерной скорости испарения воды из проб, чашки наполовину прикрьшают крышками. Момент нанесения проб и момент их полного высыхания регистрируют. Высупшвание проб проводят при 20-22 С. Активность гиалуронидазы выражают в относительных единицах, которые получают путем отношения времени высыхания контрольной пробы с дистиллированной водой ко времени высыхания пробы с ферментом.

В табл,, 1 приведено определение активности гиалуронидазы предлагае- 1-1ЫМ способом при рН 7,4 и инкубации реакционной смеси 60 мин.

Таблица 1

15

20

25

31

Активность гиалуронйдазы при предельных значениях рН (фактическая активность 1,0 ед./мг) и времени инкубации (фактическая активность 10 ед./мг) приведена в табл. 2 и 3.

Таблица 2

Отношение времени высыхания интактного стекловидного тела ко времени высыхания стекловидного тела с гиалуро- нидазой

7,0 8,3

1,08210,02 1,079tO,01

Таблица 3

Отношение времени высыхания интактного стекловидного тела ко времени высыхания стекловидного тела с гиалу- ронидазой

45 75

1,051±0,01 1,П9±0,01

Известную активность гиалуронйдазы, вьфаженную в ед./мг, можно сопоставить с относительными единицами активности, полученными предлагаемым способом, путем умножения этих относительных единиц на величину, полученную от отношения фактической величины активности к относительной величине активности. Например, после обработки пробы стекловидного тела раствором гиалуронйдазы, имеюРедактор С. Патрушева

Составитель Н. Гуляева Техред В.Кадар

Заказ 3083/46Тираж 778Подписное

ВНИИПИ Государственного комитета СССР

по делам изобретений и открытий 113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., д. 4/5

Производственно-полиграфическое предприятие, г. Ужгород, ул. Проектная, 4

36371,.4

щим активность 1,5 ед, получена ее относитейльная активность, равная 1,095. Для получения фактического значения активности, которое равно 5 1,5 ед., необходимо величину 1,095 умножить на величину 1,369. Эта величина получена из отношения 1,5 к 1,095. Поскольку между сравниваемыми величинами имеется определенная за0 висимость, то для удобства переведения относительных единиц активности исследуемых препаратов гиалуронйдазы в известные единицы можно составить соответствующую номограмму.

S Приготовление субстрата предлагаемым способом заключается во вскрытии глаза животного или трупа человека, извлечение сткеловидного тела и его отмеривании. Процедура приготовления

0 субстрата по сравнению с известным, способом исключает операции очистки фрагментации, стерилизации, гомогенизации пупочных канатиков и растворения гиалуроновой кислоты.

Формула изобретения

Способ определения активности гиалуронйдазы путем смешивания субстрата с ферментом, инкубации реакционной смеси и определения степени, гидролиза субстрата, отличающийся тем, что, с целью упрощения способа, в качестве субстрата используют стекловидное тело глаза, инкубацию проводят при рН 7,0-8,3 в течение 45-75 мин, а степень гидролиза Субстрата определяют по соотношению скоростей высыхания реакционной смеси и нативного препарата стекловидного тела, причем большее соотношение соответствует более.высокой .активности фермента.

Корректор 0. Луговая

Изобретение относится к биохимии, а именно к способу определения активности гиалуронидазы. Цель изобретения - упрощение способа за счет использования в качестве субстрата стекловидного тела глаза. Фрагменты стекловидного тела смешивают с растворЬм гиалуронидазы. Активность препарата гиалуронидазы изменяют путем частичной замены растворов фермента раствором сывороточного альбут ина. В одни контрольные пробы с интакт- ным стекловидным телом вводят по 0,01 мл дистиллированной воды, в другие - раствор гиалуронидазы с активностью 2,5 ед,/мг, но предварительно инактивированной нагреванием. Все пробы инкубируют при рН от 7,0-8,3 в течение 45-75 мин. Пробы стекловидного тепа переносят в чашки Петри. Отмечают момент нанесения проб и момент их полного высыхания. Активность гиалуронидазы выражают в относительных единицах, которые получают путем соотношения времени высыхания контрольной пробы с дистиллированной водой ко времени высыхания пробы с ферментом. 3 табл. S (Л to 05 СО vl