Щтамм бактерий LISтеRIа моNосYтоGеNеS, используемый для изготовления антигена для диагностики листериоза Советский патент 1993 года по МПК A61K39/02 C12N1/00 

Изобретение относится к области мпдицины я ветеринарии, а гтенно к микроПиологин и иммунологии, выявлению специфических противолистериоэ- иь1х антител.

Целью изобретения является штамм листерий ВГНКИ, обладающий высокой агглютинабельностью и серологической специфичностью, используемый д.пя получения инактивированного антигена

Штамм Listeria nranocytogenes № получен путем селекции на питательной среде. Этот штамм депонирован в коллекции микроорганизмов Всесоюзного ордена Трудового Красного Знамени государственного научно- контрольного института ветеринарных препаратов под № Д/7-3,

Особенностью штамма является вы- сокая агглютинабельность, серогруп- повая специфичность, высокая потенция роста, способствующая получению большого количества биомассы, используемой для изготовления антигена, что предопределяет рентабельное; его производство.

Штамм Listeria monocytogenes ВГНКИ № Д/7-3 характеризуется следую пц1ми признаками.

Морфологические признаки: бактерии представляют собой мелкие грам- полржительные подвижные палочки без спор и капсул; длина палочек 1 - 1,5 мк, ширина 0,5-0,7 мк; клетки с перитрихиально расположенными жгутиками,

Культуральные свойства; на мясо- пептонном агаре бактерии образуют нежные, с голубоватым оттенком, колонии S-формы; в мясо-пептонном бульоне через 16-18 ч отмечается равномерное помутнение среды, в дальнейшем бульон просветляется,, на дне пробирки образуется довольно плотный осадок, который iiiJH встряхивании поднимается а виде косички; на кровяном агаре с эритроцитами барана бактерии образуют /ft-гемолиз. , Ферментативные свойства: листерии сбраживают до кислоты без газа глюкозу мальтозу, рамноэу, салицин, трегалозу, эскулин и не разлагают дульдит, инулин, раффинозу; не образуют индол и сероводород, но обладают каталазной ферментативной активностью.

Вирулентные свойства: штамм вирулентен дпя лабораторных животных, при нанесении на конъюнктиву морской

15

.

to

23829.I

спинки вызывает кераток(пп- юнктнвит на 2-4 сут.

Антигенная структура: 0-У, У1; Н-А,В,С,

Антигенная формула штамма Listeria monocytogenes ВГНКИ № широко представлена в природных штан мах второй серологической группы, на которые вырабатьгеаются противолис териозные 7 S- и 19 S-антитела в сыворотке крови. Полученный из данного штамма листериозный инактивирован ный антиген обладает в реакции агглютинации высокой активностью, серо- групповой специфичностью, а также позволяет дифференцировать прстин- фекционные антитела от поствакци

нальных, что весьма важно при диаг- ностике листериоза.

П р и м е р 1. Для изготовления антигена штамма Listeria monocytogenes ВГНКИ № Д/7-3 высевают в колбу с мясо-пептонным бульоном и инкубируют при 37 С в течение 18-20 ч. Затем чистой, не содержащей посторонней микрофлоры бульонной культурой засевают матрасы с 2,5%-ным мясо- пептонным агаром, которые помещают (агаром вниз) в термостат при на 18-20 ч для получения обильного роста бактерий. Вьфосшую биомассу смывают стерильным физиологическим раствором. Полученную взвесь бактерий автоклавируют 30-45 мин при 1-1,5 атм. Затем антиген трижды центрифугируют в физиологическом растворе в течение 30 мин при 5000 G и готовят концентрацию 200 млрд микробных тел в 1 мп, используя оптический стандарт мутности ГИСК им. Л,А. Тарасеаича, после чего антиген лиофильно высушивают.

Пример 2. Антигены, полученные аналогично примеру 1, использ ова- ли для постановки РА с целью диагностики листериоза. Содержимое ампул (лиофилизированный антиген) растворяют в 100 мл физиологического раствора, при этом антигены приобретают вид белой или слегка желтоватой суспензии. Концентрация антигенов после растворения составляет 5 млрд микробных тел в 1 мл.

РА проводят в 1 МП: в серологичес- кую пробирку наливают 0,5 мл разве- денной исследуемой сыворотки крови и добавляют 0,5 МП растворенного антигена. Содержимое пробирки тщательно

пгремсшнвают, пометяют в термостат при на 18-20 ч. Затем их оставляют при комнатной температуре в течение 1,5-2 ч, после чего учитывают результаты реакции. Реакция признает- ся положительной при обнаружении чет- .ко выраженного осадка на дне пробирки при полном просветлении жидкости над осадком, который при встряхивании пробирки разбивается на крупные хлопья, комочки (агглютинация антигена) .

Для сравнения исследовали антигены, полученные из штаммов листерий 634 и 634/20. Результаты исследования приведены в табл. 1 и 2.

Таблица 1

Сравнительное изучение активности антигенов 2-й серологической группы в реакции агглютинации

4в

t: 160

1:5120

Редактор С. Рекова

Составитель В. Романова Техред М.Ходанич

Заказ 1099 , ТиражПодписное

ВНИИПИ Государственного комитета СССР

по делам изобретений и открытий 113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., д. 4/5

Производственно-полиграфическое предприятие, г. Ужгород, ул. Проектная,

5 fO

4

.Таблица

Активность сывороток кроликов, гипериммунизированнмх различными антигенами 2-й серологической группы, в РА с гомологичным антигеном

35

Таким образом, результаты сравнительных исследований показали преимущество антигена, полученного из штамма листерий 634/20.

Корректор И. Эрдейи

Штамм бактерий Listeria пюпо- cytogenes ВГНКИ № Д/7-3, используемый для изготовления антигена для диагностики листериоэа. со сх ю со ее