Способ электрофоретического разделения полиионов Советский патент 1986 года по МПК G01N27/26 B01D57/02 

Изобретение относится к области биологии, в частности к биохимическим способам исследования гетерогенности полиионов.

Целью изобретения является повышение эффективности и сокращение времени разделения.

Способ осуществляют следующим образом.

Раст.вор исследуемых полиионов наносят на поверхность разделяющей среды, в которой-находятся электроды, подключенные к источнику тока.

Подают импульсы напряжения пило- образной формы и формируют плавное нарастание крутизны переднего фронта и резкий спад напряжения заднего фрота, причем нарастание напряжения осуществляют от базового постоянного напряжения 40-600 В. При этом ускорение электрофореза достигается тем, что увеличивается величина тока чере гель за счет уменьшения, препятствующего этому эффекту поляризации и образования двойного электрического слоя на электродах, в результате импульсного характера напряжения, пода .ваемого на электроды. Повышение концентрирующего эффекта и значительное увеличение разрешения осуществляется за счет формы импульса, т.е. плавное нарастание по параболе и резкий обрыв на заднем фронте импульса. В . результате плавного нарастания напряжения начало движения макромолекул с разной электрофоретической подвижностью в разделяющей среде - неодновременное, а отличается на некото-, рое значение времени Т в длительности ю пульса. Параболическая форма позволяет максимально удалить точки на оси времени при минимальном изменении напряжения по оси напряжения. Наксимальная крутизна задне-. го фронта обеспечивает устранение обратного эффекта, так как последовательное торможение макромолекул и, следовательно, сохранение &Т завй- сит от крутизны заднего фронта. При .куполообразном импульсе а Т О и эффект отсутствует. При одной и той же длительности импульса для максимального эффекта разделения необхо

димо добиться минимально возможного пикового напряжения, при максимально возможном базовом напряжении в этом случае д Т имеет максимальное зна- чение.

Пример, Элекгрофоретическое разделение об -амилазы проводят в сравнительном плане с использовани- ем источника питания постоянного

тока и импульсного источника питания.

Бьши опробованы следующие режимы разделения: 100., 150,200,250,300,350, 400, 450 и 500 В на пяти электрофорез- ных трубках.

Установлен оптимум эффективности разделения компонентов при 300 В. При этом режиме эффективность разделения комбинированным постоянным и импульсным методом выше, чем при постоянном напряжении.

Электрофореграммы еС-амилазы, полученные двумя сравниваемыми методами, показьшают, что импульсный способ разделения позволяет за то же время (1,5 ч) достичь большего продвижения компонентов (0,5 см), чем при постоянном режиме разделения. Кроме того, использование импульсного способа электрофореза позволяет при одинаковом нанесении белка добиться . более узких зон активности фермента, что указьгоает на больший концентри- рующий эффект способа, т.е. его эф- фективность, а точнее большую разрешающую способность.

Форм у л,а и 3 о б р е тения

.Способ электрофоретического разделения полиионов, включающий нанесение образца на разделяющую среду и воздействие на среду электрического напряжения «отличающимися

тем, что, с целью повышения эффек- тивности разделения и ускорения процесса, дополнительно накладывают импульсное напряжение пило образной формы с плавным нарастанием крутиз-;

ны переднего фронта к резким спадом заднего фронта, причем нарастание напряжения осуществляют от базового постоянного напряжения 40-600,В.

Составитель И.Клешнина. Редактор В.PieaHOBa Техред Л.Олейник Корректор М. Максимишинец

Заказ 3388/42 Тираж 778Подписное

БНИИПИ Государственного комитета СССР

по делам изобретений и открытий 113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., д.А/5

Производственно-полиграфическое предприятие,г.Ужгород, ул.Проектная,4

Способ электрофоретического разделения полиионов позволяет повысить . эффективность разделения и ускорить процесс за счет дополнительно накладываемого импульсного напряжения . пилообразной формы с плавным нарас- тднием крутизны переднего фронта и резким спадом заднего фронта, причем нарастание напряжения осуществляют от базового постоянного напряжения 40-600 В. 1 ил.