Состав для криоконсервации миелокариоцитов Советский патент 1986 года по МПК A01N1/02 

1,0-1,1

2,0-2,2

До 100 мл

Изобретение относится к медицине, а именно к консервированию и трансплантации биологических тканей, в частности клеток костного мозга, и может найти применение в клиниках и станциях переливания крови.

Целью изобретения является повышение жизнеспособности миелокариоцитов в процессе консервации и увеличение срока сохранения криопротекторных свойств состава за счет повышения криозашитных свойств состава и его стабильности благодаря дополнительному введению натриевой соли сахарной кислоты, аминокровина и трехзамещен- ного фосфорнокислого натрия.

Состав содержит поливинилпирролидон (ПВП), глюкозу, апирогенную бидистилли- рованную воду, натриевую соль сахарной кислоты (НССК), трехзамешенный фосфорнокислый натрий и аминокровин при следующем соотношении компонентов, г:

Поливинилпирролидон17,0-20,0

Глюкоза10,0-11,0

Трехзамещенный фосфорно

кислый натрии

Натриевая соль сахарной

кислоты

Аминокровин

Апирогенная бидистилированная вода

Состав готовят следующим образом.

Сухую навеску ингредиентов, входящих в раствор, растворяют в 50 мл апирогенной бидистиллированной воды, после чего прибавляют 5-6 мл аминокровина и доводят апирогенной бидистиллированной водой до 100 мл. Для более быстрого растворения колбу с содержимым можно подогреть. После полного растворения веществ раствор фильт- руют, разливают во флаконы. Флаконы укупоривают, стерилизуют автоклавированием при режиме 1,2 атм 30 мин, рН раствора 5,7-6,6. Консервирующий раствор сохраняет свои криопротекторные свойства на протяжении 24 мес. При консервировании миело- кариоциты смешивают с консервирующим раствором в соотношении 1:1.

Подготовленную к замораживанию взвесь клеток костного мозга пропускают через трансфузионную систему для переливания крови с капроновым фильтром в алюминиевый контейнер емкостью 160 мл. Затем контейнер с взвесью миелокариоцитов помещают

0

5

0

5

0

5

0

в аппарат для программного замораживания, где скорость охлаждения клеток до температуры хранения биоматериала (-85°С, - 196°М) осуществлялась по ранее установленной программе. После оттаивания контейнера с костным мозгом в водяной бане при 40°С число морфологически сохранных кле- тоек по пробе Шрека составляет 91,2±0,9.

Согласно изобретению были приготовлены составы, рецептуры которых приведены в табл. 1 (составы 1 и 5 содержат ингредиенты в запредельных концентрациях (меньше мини.мальных и больше максимальных).

РезулЕ таты испытаний составов приведены в табл. 2,

Из табл. 2 видно, что предлагаемый консервирующий состав для миелокариоцитов (2,3,4) обладает лучшими криопротек- торными свойствами по сравнению с известным, так как позволяют сохранить .морфологическую сохранность клеток в процессе консервирования до 92%.

Состав 1, где концентрации ингредиентов меньше минимальных, не обеспечивает высокую защиту миелокариоцитов в процессе замораживания-оттаивания (82%). Концентрации ингредиентов больще максимальных (состав 5) снижают жизнеспособность миелокариоцитов после замораживания-оттаивания (83%).

Результаты исследований, характеризующие стабильность консервирующего состава на этапе хранения, представлены в табл. 3.

Из табл. 3 видно, что криоконсервирую- щий раствор для миелокариоцитов, содержащий ПВП, НССК, глюкозу, аминокровин и Трехзамещенный фосфорнокислый натрий, хранившийся в стеклянных бутылках для крови при 20-25°С, остается стабильным в течение 24 мес по физико-химическим и биологическим показателям биологический контроль свидетельствует что раствор стерильный, апирогенный и не токсичный,в то вре.мя как известный консервирующий состав сохраняет свои физико-химические свойства при 2-4°С в течение 6 мес. Реакция на подлинность ПВП, НССК, глюкозы, аминокровина и фосфатов в растворе положительная.

Предлагаемый состав для низкотемпературного консервирования миелокариоцитов поньцнает жизнеспособность клеток в процессе их консервирования.

Бидистиллировэнная вода

До 100,0 До 100,0 До 100,0 До 100,0 До 100,0

Суправитальная окраска 1%-ным раствором эозина

Таблица 1

Таблица 2