Способ выявления ионизированных форм калия в тканях Советский патент 1986 года по МПК A61B10/00 

1

Изобретение относится к биологии и медицине, преимущественно к анато мии и нейроморфологии.

Цель изобретения - упрощение и повьщ1ение чувствительности способа за счет обработки срезов ткани хлорной кислотой.

Способ осуществляют следующим образом.

Срезы исследуемой ткани обрабатывают концентрированной хлорной кислотой в течение не менее 4-5 мин, затем отмывают срезы, высушивают и подсчитывают выпавшие микрокристаллы в скрещенных поляроидах поляризационного микроскопа.

Пример 1, Срезы различных полей коры головного мозга людей (аутопсия) фиксируют 10%-ным формалином или 96%-ным спиртом, затем делают парафиновые срезы толиш- ной 15 мкм.

Срезы сухими наклеивают на сухое обезжиренное предметное стекло, прижимая пальцем. Депарафинируют известным способом, но из 96%-ного спирта, минуя воду, переносят в 40%- ный спирт. Избыток спирта вокруг среза убирают.

Непосредственно на срезы, увлажненные А0%-ным спиртом, наносят 1-2 капли неразбавленной хлорной кислоты, на срок не менее 4-5 мин.

Капли кислоты как бы шевелятся на поверхности среза в первые секунды обработки, поэтому надо сразу же плашмя положенным концом стеклянной палочки легко разнести их по всей поверхности среза. В данном случае часть срезов отлипает от стекол, что затрудняет работу с ними.

Избыток спирта и кислоты на срезе недопустим, так как ведет к .ша- НИИ1 осаждаемых кристаллов по всей увлажненной поверхности, в результате чего кристаллы обнаруживаются не только на поверхности среза, а даже вне его, просто на стекле. Необходимо, чтобы осаждаемые кристаллы закреплялись в тканевой основе среза по возможности ближе к месту, откуда извлекаются ионы калия для образования кристалла.

Хлорную кислот наносят на срезы на срок 4-5 мин и более. Ополаскивают срезы от кислоты 40%-ным спиртом, аккуратно капая его из пипетки на

518562

косо поставленное стекло расположения среза.

Затем таким же образом ополаскивают срезы 96%-ным спиртом, высуши5 иают срез фильтровальной бумагой (промокают), просветляют ксилолом и заключают в бальзам.

Докрашивание срезов ведет к значительной потере осажденных кристал 0 лов и поэтому не может быть рекомендовано.

Поскольку большинство выпадающих кристаллов хлорного калия в срезах имеют очень мелкие размеры (менее

5 10 мкм), прозрачны и бесцветны или окрашены в очень слабый желтый цвет и их показатели преломления мало отличаются от показателей преломления среды (бальзам), возможности обычного

20 рабочего или исследовательского микроскопа не позволяют их обнаружить в срезах тканей даже специалисту - кристаллооптику.

Истинное количество кристаллов об25 наруживается только в скрещенных поляроидах поляризационного микроскопа на черном фоне изотропной среды по четырехкратному просветлению и закономерному угасанию каждого зер30 на (кристалла) при вращении столика микроскопа на ЗбО. Исследование в скрещенных поляроидах дает возможность легко обнаружить все имеющиеся в срезе мельчайшае кристаллы, даже

35 если имеется только один, наблюдать распределение кристаллов в среде, дифференцировать свечение кристаллов от свечения случайных объектов по просветлению и закономерному угаса40 нию при вращении столика микроскопа, учитывать количество осажденных кристаллов, фотографировать светяпиеся объекты. Именно излучение срезов в скрещенных поляроидах поляризацион45 ного микроскопа незаменимо при использовании микрохимического способа выявления ионизированных форм калия в биологических объектах хлорной кислотой.

50 Микрофотосъемка производится при увеличении на пленку Мик- рат-200. Поскольку изображение характеризуется высокой контрастностью и малой освещенностью, время экспо55 зиции должно быть значительно большим, чем при фотографировании обычного микроскопического изображения в видимом свете. На исследуемом ма3

териапе время экспозиции достигает 40 мин, поэтому важно, чтобы микроскоп и фотоаппарат были хорошо фиксированы и чтобы отсутствовали вибрации.

По микрофотографиям выявляют ионизированные формы калия в срезах различных полей коры головного мозга людей, В поле зрения 21- и 10-го полей коры головного мозга людей с психическими заболеваниями обнаружено 99, 7 Я, 5 и 94,6t6,2 кристалла соответственно, а у здоровых людей 176,,6 и 186,741,4 кристалла соответственно.

Чувствительность способа 0,027мкг калия.

518564

Пример 2. Способ опробован на срезах сердечной мышцы. Порядок обработки срезов соответствует разработанному для срезов мозга (при- 5 мер 1) за исключением того, что для срезов сердечной мышцы лучше пользоваться не хлорной кислотой, а смесью ее с 40%-ным спиртом (1ч. хлорной кислоты на 3 ч. спирта). При этом О реже отлипают срезы. Техника нанесения этой смеси такая же, как и для кислоты (пример 1), а время экспозиции в кислоте не менее 20 мин.

Изучение срезов в скрещенных по- 5 ляроидах поляризационного микроскопа и микрофотосъемку проводят, как в примере 1.