Способ определения чувствительности микробитестов для выявления дрожжей и плесневых грибов в молочных продуктах Советский патент 1986 года по МПК C12Q1/02 C12Q1/04 C12Q1/02 C12R1/19 C12R1/645 

Изобретение относится к молочной промышленности и может быть использовано при контроле качественных по- казате ей централизованно вырабатываемых микробитестов для определения дрожжей и плесневых грибов в молочных продуктах.

Целью изобретения является повьше ние чувствительности микробитестов, выявляющих дрожжи и п.песневые трибы в молочных продуктах.

Предлагаемьй способ заключается в том, что в известном способе,вклю чающем выращивание тест-культур, по лучение смызов их клеток, норма,гшза- цию физиологическим раствором до мут ности определенной степени,, разделение и высев на микробитесты и с последующим культивированием и оценкой результатов, одновременно используют тест-культуры микроорганизмов, представляющих определяем то микробитеста ми микрофлору, и тест-культуру присутствующей в молочиБк продуктах кишечной палочки.

Способ определения чувствительности микробитестов определения дрожжей и плесневых грибов осуществляют следующим образом.

Тест-культуры Candida mycoderma BKMY-933 и Geotrichum candidum BKMF-145 выращивают в течение суток при 25 С, а тест-культуру Escherichia coli ВКМВ- 1;25 -18 ч при на скошенном питательном агаре с гидролизованным молоком в пробирке. Далее готовят отдельные смывы упомянутых культур, смывая выросшие колонии со скошенного агара с 5 мм физиологического раствора.

Содержание клеток в каждом смьше нормализуют физиологическим раствором по оптическому стандарту мутности на 10 ед. Полученные смьшы разводят физиологическим раствором до V-ro разведения. Из V-ro разведения каяодого смьюа производят посев на пять микробитестов для определения дрожжей и плесневых грибов (всего на 15 микробитестов). Дпя этого полиэтиленовый мешочек с одного конца ра резают ножницами, мнкдобитест вынимают из него за перфорированный коне и погружают в пробирку с V-ым разведением нормализованного сньша соответствующей тест-культуры. Смачивание проводят в течение 5 с, после чего микробитест помещалэт в полиэтиленовый мешочек поперек для того.

O

S

0

5

0

5

40

45

50

55

чтобы в нем сохранился воздух, запаивают и термостатируют при 25°С 4 сут. Затем проводят уъет результатов по примерам.

Пример 1. При исследовании чувствительности микробитестов партии 1 на 15 микробитестах определены хсоличества микроорганизмов, соответственно при посеве Candida mycoderma- 15,13,7,12 и 16 круглых выпуклых колоний кремового цвета дрожжей; при посеве Geotrichum candidum - 20,19, 18,21 и 25 колоний белого цвета плесневого гриба; при посеве Eschferichia coli 0,0,0,0 и О красных колоний кишечной палочки.

Чувствительность проверенной пар-- тии микробитестов нормальная. Их можно применять для определения количества дрожжей и плесневых грибов в молоке и молочных продуктах.

Пример 2. При исследовании чувствительности микробитестов партии 2 на 15 микробитестах определены количества микроорганизмов, соответственно при посеве Candida mycoderma - 10,14,8,13 и 7 круглых выпух- лых колоний кремового цвета дрожжей; при посеве Geotrichum candidum- 15, 19j 13, 17 и 19 колоний белого цвета плесневого гриба; при посеве Escherichia coli - 25,24,19,21 и 22 красных колоний кишечной палочки.

Чувствительность проверенной партии микробитестов низкая (недостаточная) . Причиной этого могут быть ошибки в технологии изготовления микробитестов - неправильно осуществлена закладка компонентов питательной среды для пропитьгоания бумаги или ошибочное определение активной кислотности среды и ,

Микробитесты непригодны для определения количества дрожжей и плесневых грибов в молоке и молочных продуктах.

На наличие дрожжей и плесневых грибов исследуют сливочное масло (готовый продукт), сгущенные молочные консервы (готовый ), молоко пастеризованное из ванны для производства тяорога (в случае вспучивания творога), сливки пастеризованные ,из ванны для производства сметаны (в случае вспучивания сметаны).

Определение количества дрожжей и плесневых грибов -в молоке и молочных продуктах проводят после предва- рительного разведения этих продуктов

to

физиологическим раствором. Для анализа приготовляют следующие разведения: сливочного масла 1,11; сгущенные молочные консервы I; молоко пастеризованное из ванны для производства творога I, II; сливки пастеризованные из ванны для производства сметаны I, II, Перед употреблением полизти- леновый мешочек с микробитестом вынимают из бумажного пакета и с одного конца разрезают его ножницами. Микробитест вынимают из полиэтиленового мешочка за перфорированный конец и погружают в исследуемое разве- дение на 5с. При погружении микроби-Т5 тест впитьгоает 0,2 см жидкости.

Затем Микробитест вновь вкладьша- ет в полиэтиленовый мешочек поперек для того, чтобы в нем сохранился воздух, необходимый для роста дрож- 20 жей и плесневых грибов. При герметизации мешочка нбвый шов делают также поперек первоначального шва.

Разрезанную сторону мешочка зажимают между двумя стеклянными ш1астин-25 ами и запаивают на пламени горелки. Микробитесты термостатируют при (25+ в течение (72+6) ч в горизонтальном положении. Затем производят подсчет колоний дрожжей и плесневых грибов на обеих сторонах микробитес- та. Дрожжи растут в виде крупных, выпуклых колоний белого, розового или кремового цвета, а плесневые грибы - колониями разной окраски, (белой, розовой, зеленой, черной, коричневой и др.), по внешнему виду

30

35

Масло сливочное отличного качества

Масло сливочное низкого качества

Молоко сгущенное отличного качества

Молоко сгущенное низкого качества

аналогичными их колониями на чашках Петри.

Количество дрожжей и спор плесневых грибов в 1 см (г) исследуемого образца подсчитывают по формуле

N 5-а -10

to

Т5

20

25

30

5

где q- количество колоний дрожжей

или плесневых грибов на мик- робитесте;

В - разведение продукта. Результаты применения микробитес- тов, проверенных двумя способами определения чувствительности для определения дрожжей и плесневых грибов в молоке и молочных продуктах, представлены в таблице.

Следовательно, точно определить качество продукции возможно только при применении микробитестов, проверенных на IyБcтвитeльнocть предлагаемым способом.

Преимуществом предлагаемого способа является одновременное использование в качестве тест-культур представителей определяемой микрофлоры и кишечной палочки, присутствующей в молочных продуктах, что повышает чувствительность выпускаемых микробитестов, при этом отсутствие роста кишечной палочки на микробитестах свидетельствует об их высокой чувстви- тельно ти по отношению к, дрожжам и плесневым грибам, выявляемым с их помощью в молочных продуктах.

О

О

Оценка результатов . невозможна

Оценка результатов невсзможна

Образец

Объект исследования

Количество КОЕ в 1 см, г

fгiкpoбитecть, проверенные на чувствительность

предлагаемым способом

Дрожки

Молоко пастеризованное из ванны для производства творога (в случае вспучивания творога)16000

Сливки пастеризованные из ванны для производства сметаны (в случае вспучивания сметаны)

Колонии, образующие единицы: образцы Q , &, (по предлагаемому способу) микробитесты чистые; образина , б (по известному способу) - на микро- тестах отмечены красные колонии кишечной палочки, однако из-за небольшой обсеменности продуктов еще можно установить, что ПРОДУКТЫ не со- держат дрожжей и плесневых грибов; образцы , г , Э , е (по известному спо- ;собу) - на микробитесгах сплошной рост кишечной пал очки, дрожжей и плесневых грибов. Подсчет колоний нельзя произвести из-за слившихся колоний разных микроорганизмов.

Редактор Л. Повхан

Составитель В. Соина

Техред М.Ходанич

Заказ 4687/29Тираж 490 .Подписное

ВНИИПИ Государственного комитета CCXIP

по делам изобрет- ний и открытий 113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., д. 4/5

Производственно-полиграфическое предприятие, г. Ужгород, ул. Проектная, 4

Продолжение таблицы

Количество КОЕ в 1 см, г

известным способом

Плесневые грибы

Дрожжи

Плесневые грибы

350

Оценка результатов невозможна

400

Корректор Л. Пилипенко