Способ получения антирабического иммуноглобулина человека Советский патент 1986 года по МПК A61K39/205 

1

Изобретение относится к медицине а именно к производству лекарственных препаратов, для лечения людей, подвергшихся заражению бешенством.

Цель изобретения повышение специфичности целевого продукта,

Способ осуществляется следующим. образом,

Для получения антирабического иммуноглобулина был подобран контингент доноров в соответствии с инструкцией о медицинском освидетельствовании, учете и порядке получения крови.

Доноры-добровольцы в количестве 18 человек мужского пола в возрасте 24-28 лет были провакцинированы концентрированной культуральной ан- тирабической вакциной из штамма Внуково-32-107, изготовленной в институте полиомиелита и вирусных энцефалитов АМН СССР, которая представляет собой препарат, концентрированный по объему до 30 раз и очищенный в среднем в 6 раз по сравнению с другими антирабическими вакцинами, применяемыми в настоящее время в практике здравоохранения.

Вакцину вводят с соблюдением всех правил асептики в верхненаружный квадрант ягодицы.

В 1-й, 30-й и 90-й день всем донорам вводят по I,5 МП вакцины. Определение уровня вируснейтрализующи антител в сыворотке крови добровольцев проводят с И1 тервалом в 2 недели в течение 4-5 мес.

Эти исследования показали, что наилучшая выработка вируснейтрализующих антител (ВНАТ) отмечается на 40-60 дни после первой вакпинации, когда титры ВНАТ повышаются до уровня 1:1000 и более. Одна бустер-инъеция (1 мл КОКАВ), проведенная 8 донрам на 120 день от начала иммунизации вызвала повторный подъем ВНАТ до 1000-1280. В табл. 1 дано содержание вируснейтрапизующих- антител в.сыворотке крови доноров, иммунизированных антирабической вакциной

(КОКАВ).

в процессе иммунизации доноры находились под систематическим клини- ко-морфологическим, биохимическим и иммунологическим контролем. Местной и общей реакции на введение КОКАВ не отмечено ни у одного донора. Кровь у доноров берут с 30-го дня

58417I

от начала иммунизации 1 -раз в 2 недели; через каждые 10 плазмоферезов назначался перерыв в кроведачах на 1 мес. Всего осуществлено 10-15 5 плазмоферезов.

Вся иммуная плазма, полученная от доноров методом плазмофереза в течение 5-6 мес., по мере поступления замораживалась и хранилась в низ- котемпературных камерах.

Перед фракционированием весь исходный материал в зависимости от высоты титров специфических антител был разделе н на 2 группы: плазма с 5 высоким содержанием антител в титре свыше 1:400; плазма со средним содержанием антител в титре от 1:100 до 1:400.

В каждой из групп плазма была 20 слита и в этой сводной плазме вновь определен титр антирабических антител. Из этого сырья на холоду спиртовым методом получено две серии антирабического иммуноглобулина. 25 в табл. 2 дано содержание вируснейтрализующих антител в сводной плазме и иммуноглобулине.

В готовом препарате определяют: физические свойства, стерильность, 30 безвредность, апирогенность, стабильность и белок.

В табл. 3 дан аналитический паспорт на антирабический человеческий иммуноглобулин.

35

Проводят испытание реактогенности

полученного иммуноглобулина на 23 добровольцах (мужчины и женщины в возрасте 20-45 лет, не имеющие ника4Q ких противопоказаний к введению человеческого иммуноглобулина).

Реактогенность иммуноглобулина оценивают по характеру и числу общих (повышение температуры тела,

45 головные боли, головокружение, тошнота, повьш ение кровяного давления, высыпания на коже и слизистых, и прочие жалобы) и местных (эритемы, инфильтраты, их диаметр, продолжи5Q тельность, боли на месте введения препарата) реакции у лиц, получивших иммуноглобулин с регистрацией их в дневнике наблюдений. Учет реакций среды иммунизированных начинали че,g рез 30 мин после введения испытуемого иммуноглобилина, а также через If 2, 3, 4 ч, а затем ежедневно на протяжении 12 дней.

в результате проведенных нсследо ваний установлено, что получен1гый антирабический человеческий иммуноглобулин серия 50/440 ME и серия 51/1497 ME не обладает реактогенны- ми свойствами.

Иммуноглобулин антирабический че ловеческий предназначен для антира- бического лечения лиц, получивших тяжелые и средней тяжести укусы, на несенные бешенными животными. Доза препарата 100 ME на 1 кг веса человека (взрослого старше 1 лет) при укусах средней тяжести и 200 ME при тяжелых укусах.

Например, при содержании 1000 ME в 1 мл иммуноглобулина человеческого антирабического человеку весом 60 кг необходимо ввести 6 мл препа-р рата (из расчета 100 ME на 1 кг веса тела).

Препарат вводят внутримышечно один раз за сутки до начала курса вакцинации.

Пример 1. Донорам-добровольцам внутримышечно вводят концентрированную антирабическую вакцину по 1,5 мл двухкратно с интервалом 30 дней. Получена сыворотка с высоким титром (2000-640) с 45 до 90 дня после первой вакцинации, В эти сроки методом плазмофереза пО лучают иммуноглобулин. Получен препарат, специфическая активность которого равна 1497 МЕ/мл (серия 51).

Пример 2. Донорам-добро- ,вольцам внутримьшечно вводят вакцину по 1,5 мл трехкратно с интер- валом 30 дней. Вируснейтрализующие антитела в крови доноров определялись в высоких титрах (2000-620) с 45 до ISO дня. Б эти сроки, т.е.

введена вакцина на 1-й и 30 день по 1,5 мл.

введена вакцина на 1-й, 30 день по 1,5 мл и на 90 день - 1 мл.

2584174

на протяжении 3 мес. у этих доноров производят забор крови для получения иммуноглобулина. Получен препарат активностью 1497 МЕ/мл (серия 51). 5 Пример 3. Группе доноров вводят по 1,0 мл вакцины двухкратно с интервалом 30 дней. Получен препарат с активностью 440 МЕ/мл (серия 50).

Пример 4. Группу доноров вакцинируют по 1,0 мп на , 30-й и 90-й дни. Получают препарат с высокой активностью (1497 МЕ/мп).

Однократная вакцинация и уменьшение дозы вакцины не обеспечивают в крови высокого уровня антител, пригодных для получения иммуноглобулина.

10

15

Положительный эффект заключается в том, что при использовании предлагаемого способа устраняется опасность возникновения поствакцинальных нейт- ропаралетических вплоть до смертельных исходов осложнений у доноров- продуцентов иммуноглобулина, ввиду применения безаллергенной, неэнце- фалитогенной концентрированной -куль- туральной антирабической вакцины, а также в том, что резко сокращается объем вводимой вакцины и количество инъекций, вместо 25-дневного курса вакцинации по 5 мл с суммарным объемом 125 мл препарата, обладающего энцефалитогенными свойствами, вводится 3-5 мл КОКАВ.

Предлагаемый способ дает возможность получения гомологичного ареак- тогенного с высоким титром антираби- ческих антител до 20.00 человеческого иммуноглобулина в количествах, необ- ходиьых для потребностей здравоохранения.

Таблица 1

11:537511 :72901497

21: 169501:2430440

Т а б ji и ц а 3

Показатели

Физические свойства (прозрачность, цвет)

Величина РН

Электрофоретичёс- кая чистота

Стерильность Пирогенность Стабильность Безвредность Токсичность

Количество содержания белка

Таблица 2

Результаты испытаний

Прозрачный, бесцветный

7,5+0,5

97% гамма- глобулина

Стерильный Апирогенен Стабилен Безвреден Не токсичен

10%