Способ эксклюзионной жидкостной хроматографии полимеров Советский патент 1986 года по МПК G01N30/34 G01N30/48 

to

1C

to ю Изобретение относится к способам разделения эксклюзионной хроматографией пут.ем фракционирования на порис тых силикатных сорбентах синтетических полимеров (лавсана, термотропных полиэфиров) и биополимеров (синтетических полипептидов, пептидов и белков) по размерам и может найти использование в лабораторной практике и в заводских лабораториях в качестве экспресс-метода оценки молекулярной массы (ММ) и молекулярномассового распределения (ММР) полимеров. Цель изобретения - сокращение процесса .разделения и устранение разложения анализируемых полимеров при разделении. Трифторуксусная кислота (ТФУК) практически прозрачна в интервале 260-280 нм, который используется для спектрофотометрического детектирования полиэфиров, белков и пептидов. Ивовые свойства ТФУК позволяют эффективно использовать ее в качестве растворителя и элюента в эксклюзионной жидкостной хроматографии (ЭЖХ). На чертеже изображены кривые 1 и 2 спектрофотометрирования элюата двух образцов полиэтилентерефталата (ПЭТФ) с разной характеристической вязкостью. По оси ординат - поглощение D, по оси абсцисс - время уде живания t. Пример 1. Эксклюзионную жидкостную хроматографию полиэтилен терефталата (ПЭТФ) проводят на фторопластовой микроколонке с внутренним диаметром 0,5 мм и длиной 40 см Колонку заполняют смесью микросфери ческих силикагелей Лихросфер Si-100 и Si-1000, взятых в массовом соотношении 3:2. Эффективность колонКи составляет 10000 теоретических тарелок (тт). i В качестве растворителя и элюен та используют свежеперегнанную ТФУК с т.кип. 72-72,5°С (760 мм рт.ст.), содержание воды 0,5%. 0,5 мг ПЭТФ JC п 0,72 растворяют в 1 мл свежеперегнанной ТФУК (d 1,480) при 20°С в течение 20 мин. На вход коло ки вводят 0,2 мкл раствора ПЭТФ, т.е. 0,1 мкг полимера. Скорость элюции 5 мкл/мин. Время анализа 12 мин, время удерживания максимума пика to 8,8 мин. таи В ЭТОМ случае, если белки и пептиды содержат S-S-связи, проводят предварительное окисление надмуравьиной кислотой. Пример 2. Эксклюзионную жидкостную хроматографию пептида брадикинина проводят на микроколонке по примеру 1. 0,5 мг пептида с ММ 1060 растворяют в 0,25 мл ТФУК ( 1,480) с добавкой 2% воды и 1% бензола при 20°С в течение 1,0 мин. На вход колонки вводят, , 0,2 мкл раствора, т.е. 0,4 мкг пептида. В качестве элюента также используют ТФУК с 2% воды и 1% бензола. Скорость элюции 5 мкл/мин. Время анализа 14 мин. Время удерживания 12 мин. максимума пика t Пример 3. Эксклюзионную жидкостную хроматографию белка химотрипсиногена с ММ 25000 проводят на микроколонке по примеру 1. 2 мг белка обрабатывают 0,2 мл надмуравьиной кислоты. Полученную смесь вьщерживают в течение 12 ч при 20С и упаривают. Остаток растворяют в 1 мл ТФУК с 3% воды и 0,5% бензола. Скорость элюции 5 мкл/мин. Время анализа 14 мин. Время удерживания максимума пика t|t 9,3 мин. В качестве элюента также используют ТФУК. Пример 4. Для доказательства отсутствия денатурации полимеров в условиях анализа готовят растворы ПЭТФ и ТФУК с 1,480 (исходная) и с добавкой 1, 4 и 5% воды. Измеряют удельную вязкость и время удерживания tg полученных растворов через 30, 45 и 120 мин. Удельная вязкость почти не меняется. Формула изобретения 1. Способ эксклюзионной жидкостной хроматографии полимеров путем растворения полимера в растворителе, введения раствора полимера в хроматографическую микроколонку с сорбентом и разделения в микроколонке в потоке. з1люента, отличающийс я тем, что, с целью сокращения процесса разделения и устранения разложения полимеров при разделении, .в качестве сорбента используют силикагель, а в качестве растворителя и элюента используют вещество, содержащее трифторуксусную кислоту.

2. Способ по п. 1, отличающийся тем, что, с целью повьшения растворимости, при разделении синтетических полимеров, растворитель и элюент содержит трифторуксусную кислоту и воду, причем количество ингредиентов равно:трифторуксусная кислота в количестве 99,5-98%, остальное вода.

3. Способ по п. 1, отличающийся тем, что, с целью повышения растворимости и подавления адсорбционных взаимодействий полипептидов и белков с носителем, растворитель и элюент содержат трифторуксусную кислоту в количестве 9994%, вода Oj5-4%, бензол 0,5-2%.

Изобретение относится к способам разделения полимеров-в потоке элюента на силикатных сорбентах. Целью изобретения является сокращение процесса разделения и устранение разложения полимеров при разделении. Поставленная цель достигается тем, что в качестве сорбента используют силикагель, а в качестве растворителя и элюента используют вещество, содержащее трифторуксусную кислоту с незначительным количеством воды 0,5-4% и бензола 0,5-2%. с 9 2 3.п. ф-лы. 1 ил. (Л