Способ консервации изолированных клеток печени Советский патент 1987 года по МПК A01N1/02 

Изобретение относится к медицине, преимущественно к трансплантологии, гепатологии и цитофизиологии, и может быть использовано для создания банка изолированных клеток печени.

Цель изобретения - увеличение жизнеспособных клеток на 1 мл среды путем хранения взвеси клеток в атмосфере аргона.

Способ осуществляют следующим образом.

Изолированные клетки печени помещают в охлажденную до +2-4 С среду 199 в концентрациях 1,25-10 - 20х х10 клеток/мл. При к ампуле с взвесью изолированных клеток печени герметично подсоединяют вакуум-отсос и создают разрежение 10 мм рт.ст., после чего, не нарушая герметичности, ампулу заполняют газообразным аргоном (указанную процедуру повторяют 2-3 раза). Ампулы

с помощью горелки и хранят

На десятые и двадцатые сутки ампулы вскрывают, осторожно удаляют надосадочную среду 199 и заменяют ее тем же количеством свежей среды 199, охлажденной до +2-4 С, после чего заполнение ампул аргоном и запаивание их проводят вновь.Хранят ампулы при +2-4 С до 30 сут от начала консервации.

Результаты 30-суточной консервации изолированных клеток печени, пров-:;денной согласно предлагаемому способу в атмосфере аргона (А) , в сравнении с консервацией в атмосфере воздуха (В) при +2-4 С с двухкратной сменой среды 199 (%, М±т) представлены в таблице.

запаивают при +2-4°С.

Данные биохимических методов исследования и атомно-абсорбционной спектрофотометрии о содержании в среде консервации (среде 199) веществ, по которым можно судить о степени разрушения клеток, показывают, что концентрация АЛТ достоверно ниже при хранении изолированных кле

5

0

5

ток печени в атмосфере аргона на 46- 81%, ACT - на 25-72%, калия - на 29- 40%, кальция - на 8-17%, меди - на 5-20%, железа - на 6-22%, а концентрация натрия выше на 2-9%, что свидетельствует о менее выраженном внутриклеточном отеке. Закисление среды при использовании аргона наступает значительно медленнее.

Электронно-микроскопические исследования подтверждают, что использование аргона согласно предлагаемому способу позволяет уменьшить внутриклеточный отек, лучше сохранить мембранные структуры, ядро, митохондрии.

Консервированные согласно предлагаемому способу изолированные клетки печени биологически активны - при трансплантации в условиях острой печеночной недостаточности они компенсируют утраченные функции поврежденной печени, поддерживают метаболизм в течение критического пе0

риода недостаточности печени, усиливают в ней репаративно-восстановит тельные процессы и создают условия для выздоровления 43,3-70% животных с моделью острой печеночной недос- таточности.

Использование предлагаемого способа консервации изолированных клеток печени обеспечивает по сравнению с известными способами пролонгирование срока хранения и уменьшение степени Их гибели, что позволяет создать 30-суточный банк, где имеется от 52,810,4% до 90,3±3,2% (от исходного количества) жизнеспособных и функционально активных клеток.

5

Формула изобретения

Способ консервации изолированных клеток печени в закрытой стерильной емкости, содержащей газ и среду 199, отличающийся тем, что с целью увеличения жизнеспособных клеток на 1 мл среды, емкость над средой заполняют газообразным аргоном.

Изобретение может быть использовано, в трансплантологии для создания банка изолированных клеток печени. С целью увеличения жизнеспособности клеток на I мл среды изолированные клетки печени помещают в охлажденную до 2-4°С среду I99. Герметично подсоединяют вакуум-отсос и создают разрежение . мм рт.ст. Ампулу заполняют газообразным аргоном (данную процедуру повторяют 2-3 раза). Ампулы запаивают и хранят при 2 . На 10 и 20 сутки ампулы вскрывают, заменяют надосадоч- ную среду 199 свежей, заполняют аргоном и запаивают. Хранят ампулы при до 30 сут от начала консервации. 1 табл. i (Л ю 00 со и| со