Способ выявления антител против блестящей оболочки яйцеклетки у женщин Советский патент 1987 года по МПК A61K39/00 

Изобретение относится к медицине, а именно к иммунологии, и может быть использовано при лабораторной иммунологической диагностике бесплодия.

Целью изобретения является повышение точности способа путем проведени абсорбции сыворотки свиными эритроцитами, содержащими минимальное число эритроци- тарных антигенов типа Eg, Ef, Ek, Кц Lb.

Способ осуществляют следующим образом.

Свиные эритроциты, используемые для абсорбции исследуемых сывороток, типиру- ют по групповым антигенам с помощью панели антисывороток к следующим антигенам эритроцитов Ас, Еа, Ed, Ef, Eg, Ej, Ek, Em, Fb, Fc, Kf, Lb, Bb, Eb, Ее, Ea, Ka, Kb, U, Lj, Lk, Ц a, gb.

Затем к 0,5 мл исследуемой сыворотки крови человека добавляют 2 капли отмытых свиных эритроцитов, содержан их минимальное число эритроцитарных антигенов Eg , Ef, Ek, Kf, Lb, встряхивают, инкубируют 1 ч при 37°С, затем центрифугируют 20 мин при 500 g. Полученную абсорбированную сыворотку используют для определения антител против блестящей оболочки яйцеклетки. Каплю абсорбированной сыворотки наносят на мазок из взвеси свиных яйцеклеток, инкубируют 30 мин во влажной камере при комнатной температуре, трижды отмывают забуференным физиологическим раствором, высущивают и наносят каплю моноспецифической люминесцентной сыворотки против иммуноглобулинов человека классов g, М, А. Инкубируют ч во. влажной камере при комнатной температуре, трижды отмывают забуференным физиологическим раствором, высущивают, наносят каплю забуференного глицерина, накрывают покровным стеклом и учитывают результат с помощью люминесцентного микроскопа, отмечая наличие или отсутствие свечения блестящей оболочки яйцеклетки. Свечение блестящей оболочки свидетельствует о наличии антител против нее.

Пример. К 0,5 мл сыворотки крови больной В. добавляют 2 капли эритроцитов с минимальным содержанием эритроцитарных антигенов Eg, Ef, Ek, Kf, Lb. Пробирку встряхивают, инкубируют ч при 37°С, центрифугируют 20 мин при 500 g. 1 каплю надосадочной жидкости, представляющую собой абсорбированную сыворотку, наносят на мазок из взвеси свиных яйцеклеток. Мазок инкубируют 30 мин во влажной камере при комнатной температуре, трижды отмывают забуференным физиологическим раствором, высущивают. Па мазок наносят моноспецифическую люминесцентную антисыворотку против иммуноглобулинов человека классов g , М, А. Мазок инкубируют 1 ч во влажной камере при комнатной температуре, трижды отмывают забуференным физиологическим растворо.м и высущивают. При люминесцентной микроскопии выявляют интенсивное (-Ь + + + ) свечение блестящей оболочки яйцеклетки, что свидетельствует о наличии в сыворотке крови исследуемой больной антител против блестящей оболочки яйцеклетки.

При использовании эритроцитов, содержащих антигены Ef, Eg, Ek, Kf, Lb, частота неопределенных результатов составила 89%, в то -время как при использовании эритроцитов, содержащих антигены Eg, Ek, Kf, Lb, - 22°/o, a эритроцитов, содержащих антигены Ek, Kf или Ef, Lb, или Eg, Ek - 0%

Формула изобретения

Способ выявления антител против блестящей оболочки яйцеклетки у женщин путем абсорбции исследуемой сыворотки эритроцитами свиньи, инкубации ее с яйцеклетками свиньи с последующим выявлением связавшихся антител при помощи реакции непрямой иммунофлуоресценции, отличающийся тем, что, с целью повыщения точности способа, абсорбцию проводят эритроцитами свиньи, содержащими минимальное число эритроцитарных антигенов типа Eg, Ef, Ek, Kf, Цэ.

Изобретение позволяет повысить точность способа. Свиные эритроциты, используемые для абсорбции исследуемых сывороток, типируют по групповым антигенам с помощью панели антисывороток к следующим антигенам эритроцитов. Ас, Еа, Ed, Ef, Eg, Ej, Ек, Em, Eb, Fc, Kf Zb, Bb, Eb, Ее, Ea, Ka, Kb, Li. Lj, Lk, LJ, ga, gb. Затем к 0,5 мл исследуемой сыворотки крови человека добавляют 2 капли отмытых свиных эритроцитов, содержащих минимальное число эритроцитарных антигенов Eg, Ef, Ек, Kf, Lb, встряхивают, инкубируют 1 ч при 37°С, затем центрифугируют 20 мин при 500 g. Каплю адсорбированной сыворотки наносят на мазок их взвеси свиных яйцеклеток, инкубируют 30 мин во влажной камере при комнатной температуре, трижды отмывают за- буференным физиологическим раствором, высущивают и наносят каплю моноспецифической люминесцентной сыворотки против иммуноглобулинов человека классов g, М., А. Инкубируют 1 ч во влажной камере при комнатной температуре, трижды отмывают за- буференным физиологическим раствором, высушивают, наносят каплю забуференного глицерина и исследуют с помощью люминесцентного микроскопа. (О (Л ю со ю 00