Способ диагностики дизентерии Советский патент 1981 года по МПК A61B10/00 

- (54) СПОСОБ ДИАГНОСТИКИ ДИЗЕНТЕРИИ

Изобретение относится к медицине, а именно клинической иммунологии.

Известен способ диагностики дизентерии путем проведения реакции между исследуемой сывороткой крови и эритроцитарным диагностикумом с последующим определением титров антител 1 и 2.

Однако известный способ не обеспечивает высокой точности.

Цель изобретения - повышение точности способа.

Указанная цель достигается, тем, что способ диагностики дизентерии осуществляют путем проведения реакции между исследуемой сывороткой крови и эритроцитарным диагностикумом с последующим определением титров антител, в качестве эритроцитарного диагностикума используют эритроциты, сенсибилизированные К-антигеном шигелл Зонне и при титре К-антител выше 1:160 диагносцируют дизентерию.

Поверхностный К-антиген Зонне получают путем препаративного ультрацентрифугирования из антигена Баувена указанных бактерий таким образом.

Убитые, и высушенные ацетоном бактерии Зонне (80-90/о R-форм бактерий в популяции) экстрагируют 1 н. трихлоруксуской кислотой по принятой методике. Антиген Баувена, разведенный в физиологическом растворе, подвергают ультрацентри.фугированию при 300000 в течение 4 ч. Надосадочную жидкость лиофильно высушивают. Выход К-антигена составляет около . 10%. При иммуноэлектрофоретическом изучении К-антигена он образует одну линию преципитации с сывороткой против живых бактерий Зонне и не реагирует с О-антисывороткой (120°С, 2 ч) этих бактерий. Препарат представляет собой полисахарид (более 80%) с небольшим содержанием (в виде следов) липидов и протеина. Этим антигеном сенсибилизируют формалинизированные эритроциты и таким образом получают эритроцитарный диагностикум Зонне. Для получения эритроцитарного диагностикума 1 мл 5%-ной взвеси формалинизи-. рованных обычным способом бараньих эрит- роцитов прибавляют к 9 мл забуференного физиологического раствора (ЗФР) с рН 6,4 и I мл раствора (0,1 мг/мл) К-антигена в 0,9%-ном растворе NaCl. Смесь инкубируют 30 мин при 37°С в термостате, затем эритроциты трижды отмывают ЗФР с рН 7,2

при. центрифугировании. Осадок нагруженных эритроцитов ресуепендируют в 5 мл ЗФР с рН 7,2, и эту смесь используют для постановки РИГА.

Пример. Больной А находится в стационаре с предположительным диагнозом дизентерия. Реакцию проводят следующим образом.

На полистироловые пластины с углублениями (или плашки из аппарата Токачи) наносят 2 ряда по 1-2 капли серийных двукратных разведений с,ыворотки крови больного (титрование можно производить петлями в аппарате Токачи). Затем к каждому разведению сыворотки первого ряда добавляют по I-2 капли эритроцитарного К-Диагностикума Зонне, второго ряда - эритроцитарного (коммерческого) диагностикума Флекснера. Пластины осторожно встряхивают и помещают в термостат при 37°С на 1 ч, перемещивая через 30 мин. Учет результатов, проводят через ч после инкубации и через 18 ч выдержки пластин во влажной камере. Реакцию оценивают по 4-крестовой системе (+4--f+, -t- + +, +-f, +, -). За титр антител принимают максимальное разведение испытуемой сыворртки, дающее чёткую агглютинацию эритрйагдтов на -f +.

Контролями .служат несенсибилизированные формалинизированные эритроциты с ЗФР рН 7,2; несенсибилизированные формалинизированные .эритроциты с Сывороткой крови больного в первых 3-4 разведениях; сенсибилизированные К-антигеном Зонне формалинизированные эритроциты с ЗФР рН 7,2 и эритроциты, сенсибилизированные о-антигеном Флекснера 2а, с ЗФР рН 7,2.

Испытание сыворотки крови больного А при использовании эритроцитарного К-Диагностикума Зонне позволило в течение 3 ч выявить антитела к поверхностному К-антигену шигелл Зонне в титре 1:1280. При использовании коммерческого диагностикума Зонне антитела в сыворотке крови данного

больного выявлены в титре 1:80, к эритроцитарному диагностикуму Флекснера - в титре 1:40.

Предлагаемый, способ определения Кантител позволяет показать их высокий уровень в сыворотке крови больного при от-Сутствии специфических антител к шигеллам Флекснера.;

Предлагаемый способ позволяет быстро и точно в течение 3 ч индентифицировать дизентерийную инфекцию и определить вид

возбудителя, вызвашего данное заболевание. Метод высокочувствителен, специфичен, информативен.

Формула изобретения

Способ диагностики дизентерии путем проведения реакции между исследуемой сывороткой крови и эритроцитарным диагнос: тикумом с последующим определением титров антител, отличающийся тем, что, с целью повышения точности способа, в качестве эритроцитарного диагностикума используют эритроциты, сенсибилизированные К-антигеном щигелл Зонне, и при титре Кантител выше 1:160 диагносцируют дизентерию.

Источники информации, принятые во внимание при, экспертизе

2.Сумароков А. А. и др. Оценка диагностической эффективности антигенных препаратов из шигелл Зонне. ЖМЭИ, 1977, № 11, с. 79-86.