Способ диагностики гемолитической болезни новорожденных Советский патент 1987 года по МПК G01N33/48 

Изобретение относится к медицине и может быть использовано в педиатрии и акушерстве для ранней доклинической диагностики гемолитической болезни новорожденньпс (ГВН).

Цель изобретения - повышение точности и сокращение времени диагносБыпа заподозрена ГБН. Для исследования на пяти предметных стеклах нанесены тонкие мазки крови новорожденного, высушены и зафиксированы в холодном ацетоне. Препарат 1 после смачивания в физрастворе заключен под покровное стекло без обработки комплементом и антикомплементарной сытики.

Поставленная цель достигается тем, ю вороткой (для контроля на аутофлюорес- что в мазках крови ребенка выявляется ценцию). Препарат 2 антикомплементарной меченой сывороткой без предварительной инкубации с комплементом (для выявления эндогенного фиксированного 15 комплемента)„

Препарат 3. обработан люминесцирую- щей сывороткой против иммуноглобулинов кролика (контроль на неспецифификсация комплемента на эритроцитахs что указывает на ГБН. Способ основан на патогенетических процессах, отражающих суть ГБН, - при реакции анти Тел матери и эритроцитов плода происходит фиксация на эритроцитах комплемента и его активация.

Способ осуществляют следующим образом.

На предварительно обезжиренное предметное стекло наносят тонкий мазок крови новорожденного (можно ис- пОльзовать пуповинную или периферическую кровь), высушивают при комнатной теьтературе и фиксируют в холодном (+4 С) ацетоне в течение 15 мин. Фиксированный препарат ополаскивают в забуференном физрастворе (0,01 М

20

ток). Препараты 4 и 5 обработаны раст вором комплемента, затем препарат 4 обработан. люминесцирующей сывороткой против иммуноглобулинов кролика (контроль неспецифического связыва- 25 ния комплементом люминесцирующих

антисьгоороток), а препарат 5 обработан меченой антикомплементарной сы- вороткой. Все препараты просмотрены под люминесцентным микроскопом. Вы- 30 явлено специфическое свечение антифосфатньш буфер) рИ 7,4) и на. него на- , комплементарной сыворотки в препара- носят комплемент, разведенный физраст- те 5 и более слабое ее свечение в вором 1:10. Инкубируют во влажной ка- препарате 2 (за счет эндогенного ком- мере при З7 с в течение 20 мин. Затем племента) . В других контрольных пре- препарат отмывают проточной водопро- 5 паратах свечения нет с На этом основа- водной водой в течение 20-30 мин и нии была диагностирована ГБН. ополаскивают в физрастворе. На влаяс- иый препарат наносят антикомплементарную сыворотку, меченую флюорохромами, в рабочем разведении, указанном на ампуле. Инкубируют во влажной камере при комнатной температуре в течение 40 мин. Отмьшают препарат в трех порциях физраствора по 10 мин в каждой. Мазок заключают под покровное стекло в 90%-ный глицерин, разведенный физраствором.

Препарат просматривают в люмиПример 2. У новорожденного С,, родившегосй; 20.02,84, группа крови А (11), резус +. У матери группа

40 крови О (IJ), резус +. Роды преждевременные на сроке 32-34 недели. На вторые сутки появилась желтуха. Была заподозрена ГБН. Однако на основе известного способа диагностики ГБН вра45 чами-акушерами: этот диагноз не подтвердился и бьша установлена физиологическая жептуха новорожденных.

Для уточнерия диагноза проведены

несцентном микроскопе при иммерсионисследования, аналогичные описанным ном увеличении. ГБН диагностируют при gg в примере 1. Б препарате, обработан- наличии специфического свечения анти-- ном комплементом и меченой антикомпкомплементарной сыворотки на оболочках эритроцитов.

Пример 1. У новорояоденной К, родившейся 16.02.84, группа крови А (II), резус Ч. У матери группа крови О (I), резус -. К концу первых суток жизни у ребенка развилась желтуха.

Быпа заподозрена ГБН. Для исследования на пяти предметных стеклах нанесены тонкие мазки крови новорожденного, высушены и зафиксированы в холодном ацетоне. Препарат 1 после смачивания в физрастворе заключен под покровное стекло без обработки комплементом и антикомплементарной сыческую фиксацию меченых антисыворокомплементарной сыворотки в препара- те 5 и более слабое ее свечение в препарате 2 (за счет эндогенного ком- племента) . В других контрольных пре- паратах свечения нет с На этом основа- нии была диагностирована ГБН.

Пример 2. У новорожденного С,, родившегосй; 20.02,84, группа крови А (11), резус +. У матери группа

крови О (IJ), резус +. Роды преждевременные на сроке 32-34 недели. На вторые сутки появилась желтуха. Была заподозрена ГБН. Однако на основе известного способа диагностики ГБН врачами-акушерами: этот диагноз не подтвердился и бьша установлена физиологическая жептуха новорожденных.

Для уточнерия диагноза проведены

лементарной сьшороткой, обнаружено специфическое свечение оболочек эрит- , роцитов. Более слабое свечение анти- (g комплементарной сыворотки имелось в препарате, не обработанном предварительно комплементом. В трех других контрольных препаратах свечения нет. В данном случае предлагаемым способом диагностирована ГВН по системе АВО. Таким образом, предлагаемый способ позволяет более достоверно диагностировать ГБН.

Пример З.У новорожденного В., родившегося 22.02.84, группа крови В (III), резус +. У матери группа крови А (II), резус +. К концу вторых суток у ребенка появилась жел туха и бьша заподозрена ГВН.

Дпя установления диагноза проведены исследования, аналогичные описанным в примере 1. При просмотре препаратов в люминесцентном микроско пе ни в одном из них свечения не.обнаружено. Таким образом, ГБН как причина желтухи отвергнута. Последую щим клиническим обследованием установлено, что причиной желтухи яви- лась кефалогематома (желтуха вследствие рассасывания кровоизлияния),

Для проведения диагностического исследования от момента.приготовлени мазка крови до просмотра препаратов в люминесцентном микроскопе требуется около 2ч.

Таким образом, ГБН может быть точ но диагностирована без использования комплекса из 7 методик в более корот кий срок. Кроме того, предлагаемый способ диагностики позволяет выявить ГВН в тех случаях, когда известный комплекс методик не показывает наличия изоиммунологического конфликта (пример 2).

Выло проведено исследование 73 новорожденных и их матерей известным и предлагаемым способами.

У 40 детей клинически был запо- дозрен изоиммунологический конфликт на основании наличия желтухи, s у 27, кроме того, имелась несовместимость крови матери и плода по резус-фактору или системе АВО. Известным спосо- бом ГВН была определена у 17 детей (42,5%). Предлагаемьм способом ГВН была диагностирована у 25 детей (62,5%).

Кроме того, у двух детей, у которых известным способом определялась ГВН, предлагаемый способ позволил отвергнуть установленный диагноз.

Дальнейшие клинические наблюде- ния и лабораторное обследование во

ВНШШИ Заказ 3958/42

Произв.-полигр. пр-тие, г. Ужгород, ул. ПроектнаЯ; 4

5 0

5

о

5

всех указанных случаях подтвердили точность предлагаемого способа.

У остальных 13 детей, у которых имелась желтуха в периоде новорож- денности, наличия ГВН как известным, так и предлагаемым способами не выявлено, у них имелась конъюгационная желтуха или желтуха вследствие рас- . сасывания кровоизлияний.

Исследования крови 23 здоровых новорожденных как известным так и предлагаемым способами дали отрицательные результаты.

Предлагаемый способ позволяет выявить изоиммунологический конфликт не только по системе антигенов резус и АВО, но и по другим; в том числе редким и малоизученным антигенам крови, диагностические сыворотки к которым отсутствуют или труднодоступны. Способ обнаруживает само возникновение реакции антиген - антитело - комплемент. Это обеспечивает его высокую специфичность и точность при диагностике изоиммунологического конфликта у новорожденных. Кроме того, способ позволяет выявить ГВН в начальной стадии ее развития, на доклиническом уровне, сразу после рождения ребенка

Предлагаемый способ прост, доступен широкому кругу специалистов, реализуется он при использовании отечественных аппаратуры и реактивов. Способ требует малых временных (около 2 ч) и трудовых затрат.

Таким образом, изобретение обеспечивает точность и надежность способа диагностики ГВН.

и

Формула изобретения

Способ диагностики гемолитической болезни новорожденных путем исследования крови, отличающийся тем, что, с целью повьнпения точности и сокращения времени диагностики, мазок исследуемой крови, взятый в течение 1-3 суток жизни новорожденного, обрабатьшают комплементом с последую- щим добавлением антикомплементарной люминесцирующей сыворотки и при выяв лении специфического свечения на поверхности эритроцитов диагностируют гемолитическую болезрь.

Тираж 776

Подписное

Изобретение относится к медицине, точнее к педиатрии и акушерству, предназначено для ранней доклинической диагностики гемолитической болезни новорожденных (ГЕН). Цель изобретения - повьшение точности и сокращение времени диагностики. Для этого на обезжиренное предметное стекло наносят тонкий мазок крови новорожденного, высушивают при 20-25 С, фикси- рзпот 15 мин в холодном ацетоне (4 С). Фиксированный препарат п)эомывают в фиксированном физрастворе (рН 7,4), на него наносят комплемент, -разведенный физраствором 1:10. Инкубируют 20 мин при 37°С. Препарат отмывают проточной водой, ополаскивают в физрастворе. На влажный препарат наносят антикомплементарную сыворотку, меченную флюорохромами. Инкубируют 40 мин. Отмлвают препарат в трех порциях физраствора по 10 мин в каждой. Мазок заключают под покровное стекло в 90%-ный глицерин, разведенный, физраствором. Препарат просматривают в люминесцентном микроскопе при иммерсионном, увеличении. При наличии специфического свечения антикомплементарной сыворотки на оболочках эритроцитов диагностируют ГЕН. Метод позволяет выявит-ь ГБН в начальной стадии ее развития на доклиническс уровне. Метод прост, требует мало времени и трудовых затрат, в нем используется отечественная аппаратура и реактивы. & (Л с 00 DO 4 О со