Способ подготовки ткани к электронно-микроскопическому исследованию Советский патент 1987 года по МПК G01N1/06 G01N33/483 

Изобретение относится к экспериментальной медицине и может быть использовано при изучении структур паренхиматозных органов.

Цель изобретения - повышение ка- чества исследуемого объекта, достигается за счет сохранения естественного соотношения тканевых структур при фиксации в два этапа, при этом второй этап совмещен с контрастиро- ванием.

Пример 1. Животному, находящемуся под наркозом, через канюлю, вставленную в грудную аорту,про- мывают сосудистое русло гепаринизи- рованным раствором до появления чистого раствора в канюле, дренирующей нижнюю полую вену (или в отводящем сосуде от органа, если объектом исследования является один орган).Про- мывающий раствор содержит, вес.%: NaCl7,4 - 7,8

КС10,3 - 0,4

0,5 М трис-НС 40,0 - 42,0 Новокаин 1,0-1,5 Дистиллированная вода Остальное К приготовленному раствору добавляют 1000-1100 ME гепарина. Температура раствора 36-37°С.

После промывки сосудистого русла проводят предварительную фиксацию (первый этап) тканевых элементов ми роциркуляторного русла и прилегаю

щей ткани путем введения тем же спо- . 35 тронно-микроскопическому исследовасобом в течение 15мин4%-ного раствора глютарового альдегида на 0,5 М фосфатном буфере из расчета 50 мл на 1 кг массы животного. Фиксирующий раствор содержит, мл: 25%-ный глютаровый альдегид 160 Фосфатный буфер 840 Через 15 мин предварительной фиксации проводят дофиксацию (второй этап) тканевых элементов микроцирку- ляторного русла и прилегающих тканей с одновременной инъекцией сосудисто- о русла. С этой целью через вставРедактор И. Горная

Составитель А. Агуреев

Техред н.Глущенко Корректор О. Луговая

879/43

Тираж 777 . Подписное ВШШПИ Государственного комитета СССР

по делам изобретений и открытий , 113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., д. 4/5

Производственно-полиграфическое предприятие, г. Ужгород, ул. Проектная,4

ленную канюлю вводят взвесь китайской тупш в растворе глютаро- вого альдегида. При этом инъецируе 1ая смесь содержит, мл: 25%-ный глютаровый альдегид130

Фосфатный буфер 0,5 М 800 Тушь50

Введение осуществляют до появления окрашенного раствора в дренирующей канюле. ПосЛе этого извлекают орган, выделяют соответствующие участки и готовят криостатические срезы толщиной 150-200 мкм, при малом увеличении светового микроскопа фотографируют интересующий участок и преци- зионно из него забирают материал для последующего электронно-микроскопического исследования.

Пример 2. Способ осуществляют как описано в примере 1, при этом предварительную фиксацию проводят в течение 20 мин.

Способ позволяет благодаря предварительной фиксации in vivo сосудистого русла и прилегающей ткани лучще сохранить в препарате естественные соотношения в тканевых структурах.

Формула изобретения

Способ подготовки ткани к элекнию, включающий внутрисосудистую фиксацию ткани путем перфузии буферным равтвором глутарового альдегида с последующим контрастированием взве40 СЬЮ китайской туши, отличающийся тем, что, с целью повышения качества подготовки за счет сохранения естественного соотношения тканевых структур, ткань предвари45 тельно перфузируют в течение 1520 мин фиксирующим раствором, а koHT- растирование взвесью китайской туши проводят в фиксирующем растворе до насыщения ткани красителем.

Для повышения качества подго- товки ткани животному чепез канюлю, вставленную в грудную аорту, промывают сосудистое русло гепаринизиро- ванным раствором до появления чистого раствора в канюле, дренирующей нижнюю полую вену, температура раствора 36- . Вводят в течение 15-20 мин 4%-ный раствор глютарового альдегида на 0,5 М фосфатном буфере. Через 15 мин вводят взвесь туши в 4%-ном растворе глютарового альдегида на 0,5 М фосфатном буфере до появления окрашенного раствора в дренирующей канюле. Орган извлекают, прецизионно забирают из интересующего участка материал для электронно-микроскопического исследования. с S (Л с: ю QD 00 СД ОО О