Способ выявления структур нервных элементов на гистологическом препарате Советский патент 1987 года по МПК G01N33/48 A61B10/00 

Изобретение относится к экспери- ментальной и клинической медицине, а именно к нейрогистологии, и может , быть использовано для решения психиатрических и неврологических задач при Изучении взаимоотношений между системами нервных элементов в мозге, а также в микрохирургической практике для определения наиболее рациональных подходов при операции на мозге.

Целью изобретения является удлинение времени сохранности препаратов,

Указанная цель достигается тем.

10

рез 10 ч после начала эксперимента подлежащий изучению участок мозга помещают на 10 ч в смесь, состоящую из 2 мл 10% и 100 мл 70% спирта. Далее проводят стандартную проводку и заливку мозга в парафин, получают непрерывные серийные срезы и окрашивают их по методу Тимма.

Таким .образом удается заполнить хлоридом кобальта элементы мозга, находящиеся не далее 25 мм от места аппликации этого- вещества. Сенсорны волокна и их терминальные ветвления заполнены кобальтом и имеют четкие

что перед осуществлением способа про- -5 контуры, дендриты можно проследить

на расстоянии 100-150 мкм от тела нейрона, набухания и фрагментирова- ния волокон, изменения формы и объ ма нейронов не происходит.

водят фиксацию мозга 10% этиловым L спиртом в физиологическом растворе при 4°С в течение 2 ч, далее прово- дат аксональпый ионофорез хлорида кобальта на препарате мозга in vitro в 10% этиловом спирте на физиологическом растворе,.. последующее выдерживание мозга в смеси, состоящей из 2 мл 10% и 100 мл 70% этилового спирта, стандартную проводку и заливку мозга в парафин, приготовление препаратов и окраску срезов по методу Тимма.

Пример 2. При проведении способа на мозге экспериментального животного его умерщвляют чрезмерной дозой нембутала (60 мг/кг). Для удаления крови мозг перфузируют через сердце или сонные артерии холодным (4°С) физиологическим раствором, содержащим 134 таМ-NaCl, 5,6 iiiM KCl, 2,3 тМ CaCl2 бНгО, 0,25 М сахарозы

в 1 шМ трис-НС1 буфере, ,4. Для Изобретение иллюстрируется следую- 30 фиксации нервной ткани мозг перфущими примерами.

Пример 1 (по прототипу). Животное умерщвляют чрезмерной дозой нембутала (60 мг/кг), мозг перфузизируют холодным (4с) 10%-ным этиловым спиртом в физиологическом растворе в течение 30 мин. Затем мозг достают из черепной коробки и номеруют через сердце холодным (4 С) фи- д щают в фарфоровую чашку с 10%-ным зиологическим раствором, содержащим этиловым спиртом в физиологическом 154 итМ NaCl, 5,6 шМ КС1, 2,3 шМ CaClf растворе. Центральные концы волокон

тракта или корешка нерва помещают в полиэтиленовую трубку и фиксируют

бН-О,, 0,25 М сахарозы в 1 тМ -трисНС1 буфере, ,4. Мозг достают из

черепной коробки и помещают в фарфо- 0 к стенке трубки тканевым клеем или

ровую чашку с физиологическим раствором. Центральные концы волокон тракта или корешка нерва помещают в полиэтиленовую трубку и фиксируют в стенке трубки тканевым клеем или вазелином. Через свободньй конец трубки наливают 130 гаМ раствор хлорида кобальта. Последовательно подключают источник постоянного тока, микроамперметр, реостат и два платиновых электрода. Один платиновьм электрод (плюс) помещают в находящийся в трубке раствор хлорида ко- j бальта, а другой (минус) - в раствор омывающий мозг. Пропускают постоянный электрический ток силой 40 мкА в течение 10 ч. Эксперимент проводят при 4-6 С, через каждьй час полностью меняют раствор, омьшающий мозг. Че

рез 10 ч после начала эксперимента подлежащий изучению участок мозга помещают на 10 ч в смесь, состоящую из 2 мл 10% и 100 мл 70% спирта. Далее проводят стандартную проводку и заливку мозга в парафин, получают непрерывные серийные срезы и окрашивают их по методу Тимма.

Таким .образом удается заполнить хлоридом кобальта элементы мозга, находящиеся не далее 25 мм от места аппликации этого- вещества. Сенсорные волокна и их терминальные ветвления заполнены кобальтом и имеют четкие

контуры, дендриты можно проследить

на расстоянии 100-150 мкм от тела нейрона, набухания и фрагментирова- ния волокон, изменения формы и объеа нейронов не происходит.

Пример 2. При проведении способа на мозге экспериментального ивотного его умерщвляют чрезмерной дозой нембутала (60 мг/кг). Для удаления крови мозг перфузируют через сердце или сонные артерии холодным (4°С) физиологическим раствором, содержащим 134 таМ-NaCl, 5,6 iiiM KCl, 2,3 тМ CaCl2 бНгО, 0,25 М сахарозы

в 1 шМ трис-НС1 буфере, ,4. Для фиксации нервной ткани мозг перфув 1 шМ трис-НС1 буфере, ,4. Для фиксации нервной ткани мозг перфузируют холодным (4с) 10%-ным этиловым спиртом в физиологическом растворе в течение 30 мин. Затем мозг достают из черепной коробки и номевазелином. Через свободный конец трубки наливают 130 тМ раствор хлорида кобальта. Последовательно подключают источник постоянного тока,

45 микроамперметр, реостат и два платиновых электрода. Один платиновьй элетрод (плюс) помещают в находящийся в трубке раствор хлорида кобальта, а другой (минус) - в раствор, омыва50 ющий мозг. Пропускают постоянный

электрический ток силой 40 мкА в течение 144 ч. Эксперимент проводят при 4-6°С, Через 144 ч после начала эксперимента подлежающий изучению

55 участок мозга помещают на lO ч в смесь, состоящую из 2 мл 10% и 100 мл 70% этилового спирта. Далее проводят стандартную проводку и заливку мозга в парафин, получают не1окрашивапрерывные серийные срезы и ют их по методу Тимма,

Пример 3. Для проведения способа на трупном материале мозга человека, мозг берут- в первые часы (2-4 ч) после смерти. Мозг достают иЬ черепной коробки и сразу же помещают в холодньш (4°С) 10%-ный этило вьй спирт в физиологическом растворе на 2 ч. Через каждые 30 мин раст вор полностью меняют. Затем мозг помещают в свежий 10%-ный этиловьй спирт на физиологическом растворе и проводят аксональньй ионофорез хлор дй кобальта по примеру 2.

Пример 4. Берут мозг экспериментального животного или трупный материал мозга человека, как описано в примерах 2 и 3, но перфузию мозга проводят в 5%-ном этиловом спирте на физиологическом растворе.

Пример 5. Берут мозг экспериментального животного или трупный материал мозга человека, как описано в примерах 2 и 3, но перфузию мозга и весь эксперимент проводят в 30-40% этиловом спирте на физиологическом растворе.

На гистологических препаратах, полученных в результате эксперимен- та по примеру 4 и 5 выявлено, что в случае применения 5%-ного этилового спирта нормальная структура нервной ткани не сохраняется при проведении опыта более 10 ч, а в случае применения 30-40%-ного этилрво

го спирта нормальная структура нерв- I

Редактор А.Долинич

Состав итель А. Рыбина Техред И.Попович

1299/42

Тираж 777Подписное

ВНИИПИ Государственного комитета СССР

по делам изобретений и открытий 113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., д. 4/5

Производственно-полиграфическое предприятие, г. Ужгород, ул.. Проектная, 4

79

нои ткани сохраняется на протяжении всего эксперимента, но аксональный ионофорез хлорида кобальта невозможе

Предлагаемый способ предварительной фиксации мозга в 10%-ном этиловом спирте на физиологическом растворе сохраняет нормальную структуру нервной ткани, инактивирует аутолити ческие процессы, экономит время путем одновременной фиксации мозга и проведения опыта, не препятствует аксональному ионофорезу хлорида кобальта, что позволяет решать многие важные, практические задачи в психиатрии и неврологии путем изучения рас- пределения афферентных и эфферентных волокон на гистологических препаратах, их взаимоотношения с пост- и пресинаптическими элементами.

. Формула изобретения

Способ выявления структур нервных элементов на гистологическом препарате путем аксонального ионофореза хлорида кобальта на препарате мозга in vitro при силе тока 40 мкА с последующим помещением мозга в состав, состоящий из сульфида натрия и этилового спирта, и окраской полученного гистологического препарата по методу Тимма, отличающий- с я тем, что, с целью удлинения вре30

мени сохранности препаратов, препа- 35 рат предварительно фиксируют 10%-ным этиловым спиртом на физиологичб:ском растворе при 4-6 С от 30 мин до 2 ч.

Корректор С.Шекмар

Изобретение относится к области экспериментальной и клинической медицины, а именно к нейрогистологии. Цель изобретения - удлинение времени сохранности препаратов. Проводят фиксацию мозга 10%-ным этиловым спиртом на физиологическом растворе. Затем осуществляют оксональный ионофо- рез хлорида кобальта на препарате мозга, который после этого помещают в смесь сульфида натрия и этилового спирта. Окраску гистологического препарата производят по методу Тимма. Изобретение позволяет изучить распределение афферентных и эфферентных волокон, их взаимоотношения: с пост- и пресинаптическими элементами. (Л с 00 00 00 vl