Способ оценки противоишемического действия биологически активных веществ Советский патент 1987 года по МПК A61B5/02 

10

1 ,1309955

Изобретение относится к медицине, а именно к способу оценки противоивш- мического действия биологически ак тивных веществ, и может быть использовано для определения механизмов действия кардиопротекторЪв, оценки эффективности кардиоплегии.

Целью изобретения является повышение достоверности оценки.

Способ осуществляют следующим образом.

Животному производят вскрытие грудной клетки, иссечение сердца из организма и подключения его к специальному устройству для перфузии изолированного сердца. Далее вводят в коронарное русло исследуемое вещество, пережимают аорту для создания ишемии миокарда на заданный промежуток времени, производят восстановление сократительной активности миокарда при реперфузии и измерение его сократительной активности после ише- мического повреждения по отношению к контролю, причем остановку сердца производят введением в коронарное русло 15-25 ммоль раствора калия, после пережатия аорты кровь в полости левого желудочка заменяют обескислороженной жидкостью, затем из сердца выделяют папиллярную мышцу или трабекулу, определяют максимальное изометрическое усилие, развиваемое ею при нескольких значениях частоты сокращений, и на основании расчета сократительной активности миокарда усваивают ритм сокращений R, по формуле судят о противоишемическом действии биологически активного вещества

Производят декапитацию экспериментального животного, вскрывают грудную клетку, вводят в аорту канюлю и производят перфузию раствором Тироде в течение 5 мин при 36-37 С с парциальным давлением кислорода в растворе 600-700 мм рт.ст. при перфузионном давлении 65-70 мм рт.ст. Затем производят перфузию раствором Тироде с 20 мМ КС1 и 10 г/МП папаверина в течение 5 мин при 36-37°С с парциальным давлением кислорода в растворе 600-700 мм рт.ст. при перфузионном давлении 65-70 мм рт.ст. Затем в же15 лудочек вводили 2 канюли и произво- дили замену оксигенированного раствора внутри желудочка на неокс игени- рованный раствор Тироде с парциальным давлением кислорода 5-10 мм рт.ст,

20 После этоГо производили ишемическое повреждение миокарда в течение 30 мин. Затем сердце помещали в раствор Тироде

25

с парциальным давлением кислорода 600-700 мм рт.ст. при 28-29°С

и вьфезали папиллярную мьшдцу, которую закрепляли в установке, перфу- зируя ее аналогичным раствором.Мьшцу стимулировали импульсами длительностью 5 мс с частотой 0,5 Гц и ампли30 тудой в 1,5-2 раза въте пороговой (40 В) . Б этом режиме мьпнцу адаптировали в течение 50-60 мин до установления стабильных сокращений,затем регистрировали максимальное изомет35 рическое усилие. Далее частоту стимуляции меняли от 0,1 до 0,9 Гц с шагом 0,2 Гц, причем переход на новую частоту стимуляции производили после установления стационарного уровня

40 сокращений. Затем рассчитывают коэффициент регрессии изометрического усилия по частоте по приведенной формуле, который является мерой сократительной активности препарата. За45 тем коэффициент регрессии R сравнивают с кoэффицJieнтoм регрессии R без ишемии и без испытуемого биологически активного вещества и Н. - с ишемией, но без испытуемого вещества, и роженной жидкости используют дезокси- 50 по их соотношению определяют степень генированную кровь или выСокомолеку- защиты миокарда испытуемым биологически активным веществом. Предварительно в серии контрольньк экспериR - .

Pv,A Т.

(ЬА; - 2: i .s: (F; -5::|-)

1 -к} 1ь 1 1 л ii

Y

JldnAj - 21 )2

где

A

i n

- максимальное изометрическое

усилие при частоте F номер измерения; количество измерений.

(

Кроме того, в качестве обескислолярную жидкость, например вазелиновое масло.

Способ подтверждается следующими : примерами.

Пример 1. Оценка противо-- ишемического действия папаверина на миокард.

U

ментов были определены значения R 55 57 при ишемии, но без применения

противоишемических биологически актив- ных веществ, и R, 0,23. - без ишемии, а после действия папаверина

Производят декапитацию экспериментального животного, вскрывают грудную клетку, вводят в аорту канюлю и производят перфузию раствором Тироде в течение 5 мин при 36-37 С с парциальным давлением кислорода в растворе 600-700 мм рт.ст. при перфузионном давлении 65-70 мм рт.ст. Затем производят перфузию раствором Тироде с 20 мМ КС1 и 10 г/МП папаверина в течение 5 мин при 36-37°С с парциальным давлением кислорода в растворе 600-700 мм рт.ст. при перфузионном давлении 65-70 мм рт.ст. Затем в же5 лудочек вводили 2 канюли и произво- дили замену оксигенированного раствора внутри желудочка на неокс игени- рованный раствор Тироде с парциальным давлением кислорода 5-10 мм рт.ст,

0 После этоГо производили ишемическое повреждение миокарда в течение 30 мин. Затем сердце помещали в раствор Тироде

5

с парциальным давлением кислорода 600-700 мм рт.ст. при 28-29°С

и вьфезали папиллярную мьшдцу, которую закрепляли в установке, перфу- зируя ее аналогичным раствором.Мьшцу стимулировали импульсами длительностью 5 мс с частотой 0,5 Гц и амплиU

ментов были определены значения R 55 57 при ишемии, но без применения

противоишемических биологически актив- ных веществ, и R, 0,23. - без ишемии, а после действия папаверина

R 0,31. При определении их соотношения получили значение коэффициента 77%. Это означает, что предварительная пер фузия раствором папаверина (10 г/мл) с 20 Mil КС1 перед 30-ми- нутной ишемией защищает миокард крысы на 77%.

Пример 2. Оценка противо- ишемического действия раствора Тиро- де с 20 мМ КС1 на миокард крысы.

Вьщеление препарата и изменения проводились аналогично примеру 1 за исключением того, что до пережатия аорты в коронарное русло вводился раствор Тироде с 20 мМ КС1 . По фор- муле быпо найдено R 0,34 и при сравнении с контролем бьшо получено, что кардиоплегия раствором Тироде с 20 мМ КС1 перед 30-минутной ишемией защищает миокард крысы на 68%.

Пример 3. Оценка противо- ишемического действия дилтиазема.

Выделение препарата и измерения проводились аналогично примеру 1 за исключением того, что до пережатия аорты в коронарное русло вводился раствор дилтиазема в концентрации 5 хЮ г/мл на фоне 20 мМ KCl. По результатам измерений был определен R 0,26, что при сравнении с контролем дало основание определить,что кардиоплегия раствором дилтиазема с 20 мМ КС1 перед 30-минутной ишемией заш 1щает миокард крысы на 91%.

Предложенный способ проверялся в 15 экспериментах на папиллярной

ор А. Долинич 1816/2

Составитель А. Лычкова Техред А.Кравчук

Кор

Под

Тираж 596 ВНИИПИ Государственного комитета СССР

по делам изобретений и открытий 113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., д. 4/5

Производственно-полиграфическое предприятие, г. Ужгород, ул. Проектная, 4

0

5

0

5

0

5

мьшгце и трабекуле крыс. Среднеквадратичный разброс при оценке лекарственных препаратов по способу-прототипу составляет 12-26%, а при использовании предлагаемого способа - 4-7%, что повьш1ает достоверность результатов в 3 раза.

Формула изобретения

Способ оценки противоишемического действия биологически активньк веществ путем определения сократительной активности сердца до и после пережатия аорты в интактном и предварительно обработанном биологически активным веществом сердце с последующим сопоставлением полученных результатов, отличающийся Тчем, что, с целью повышения достоверности оценки, перед пережатием аорты производят остановку сердца, а после пережатия заменяют кровь в полостях желудочков обескислороженной жидкостью, после чего из сердца выделяют трабекулу или папиллярную стимулируют и определяют их максимальное изометрическое усилие, а про- тивоишемическое действие биологически активного вещества определяют путем сопоставления скорости изменения изометрического усилия в ответ на увеличение частоты стимуляции в тра- бекулах или папиллярных мьшцах,вьще- ленных из интактного или предварительно обработанного биологически активным веществом сердца.

Корректор Л. Пилипенко

..

Подписное

Изобретение относится к медицине, а именно к способу оценки противоишемического действия биологически активных веществ, и может быть использовано для определения механизмов действия кардиопротекторов. Целью изобретения является повьшение достоверности оценки. Сердце экспериментального животного подключают к специальному устройству для перфузии изолированного органа, вводят в коронарное русло исследуемое вещество, пережимают аорту для создания ишемии миокарда на заданный промежуток времени, производят восстановление сократительной активности миокарда при реперфузии и измерение его сократительной активности после ишемическо- го повреждения по отнощенню к контролю, причем остановку сердца производят введением в коронарное русло 15-25 ммоль раствора калия. о (Л 00 о со :о ел У1