Способ фиксации образцов биологических тканей для гистологического исследования Советский патент 1987 года по МПК G01N33/48 

1

Изобретение относится к медицине а именно к гистологии.

Цель изобретения - улучшение качества фиксации тканей.

Способ осуществляют путем обработки образцов биологических тканей в течение 1-5 сут при 15-25°С жидкостью, содержащей формалин, ледяну уксусную кислоту и 96%-ный этиловый спирт, а также галаскорбин при следующем соотнощении компонентов, мас.%:

Галаскорбин 3-5

Формалин3-5

Этиловый спирт

96%32-52

Ледяная уксусная

кислотаОстальное

По окончании фиксации материал обрабатывают по известным методикам обезвоживают в 96%-ном и 100%-ном спирте, заключают в парафин, изготавливают срезы, окрашивают известными методами окраски.

Дополнительное улучшение, окраски достигают обработкой полученных после указанной фиксации гистологических срезов 1-2%-ным водным растворо четырехокиси осмия в течение 5 мин при 15-25 0, после чего окрашивают по известным методикам.

П р и мер. Кусочки органов и тканей толщиной 0,3-0,5 см фиксируют в течени е 1-5 сут при 15-25°С методом погружения в фиксирующей жидкости, приготовленной следующим образом,

4 г галаскорбина растворяют в 47,5 мл ледяной уксусной кислоты до полного растворения, добавляют 3,6 мл концентрированного формалина и 52 мл 96%-ного этилового спирта. -Объем фиксатора должен в 7-10 раз превышать объем фиксируемого материала. Оптимальный срок фиксации 3 сут. Фиксацию проводят в плотно закрывающихся емкостях. Хорошо про- фиксированные кусочки приобретают коричневый оттенок в связи с под- кращиваюпдам эффектом галаскорбина. Повторно фиксатор не используют. По ле фиксации кусочки, не промывая в воде, обезвоживают в двух порциях этилового спирта в течение суток, заключают в парафин и приготавливают срезы толщиной 3-10 мк по известным методикам.

Окраску депарафинированных срезов проводят по известным методикам

142512

например гематоксилином и эозином, азур-эозином, крезил-виолетом по Нисслю, галлоцианином по Эйнарсону, железным гематоксилином по Гейденг гайну, с сокращением сроков выдержки в красителях в 2-10 раз и более раз по сравнению с принятыми, контролируя визуально достаточность прокрашивания, или -после депарафинироJO вания и промывки в воде срезы вначале обрабатывают 1-2%-ным водным раствором четырехокиси осмия в течение 5 мин при 15-25 С, промывают в воде 1 мин и затем окрашивают по

15 известным методикам. При окраске протравными красителями предпочтительно использовать 2%-ный раствор четырехокиси осмия, при окраске Другими красителями - 1%-ный. 20 Сравнительное исследование проводили на образцах тканей 0,3 - 0,5 см из головного мозга, сердца, печени, почек и легких. Образцы из каждого органа обрабатыва25 ли раздельно по известному и предлагаемому способам фиксации. Все последующие этапы подготовки материала к исследованию проводились тождественно.

30 Варианты фиксатора, в которых соотношения ингредиентов выходят за пределы предлагаемого диапазона, дают менее эффективные результаты, В частности, увеличение концентра,5 ции галаскорбина приводит к грубозернистой фиксации.

Предлагаемый способ в более полном объеме обеспечивает стабилизацию и сохранение в тканях белков и .

Q нуклеиновых кислот, эффективнее предохраняет ткани от возникновения артефактов, связанных с заключением образцов в парафин (в частности, разрывов ткани), лучше сохраняет некото 5 рые легко разрушающиеся микростур- туры, например щеточную каемку эпителия извитых канальцев почки, повышает сродство к красителям, что позволяет сокращать время окраски в 10 и более раз, повышает прочность связывания тканевых структур с красителями, что препятствует быстрому выцветанию срезов, а также позволяет выявлять с помощью обычных общегис55 тологических окрасок (гематоксилином и эозином, азур-эозином) ряд микроструктур, которые при фиксации по известному способу выявляются только при использовании специальных

313142514

методов окрасок, например тигроид с целью улучшения качества фиксации нервных клеток и поперечную исчер- тканей, фиксатор дополнительно, со- ченность кардиомиоцитов,держит галаскорбин при следующих

соотношениях компонентов, мас.%:

Формула изобретения Галаскорбин 3-5 Способ фиксации образцов биоло- Формалин3-3

гических тканей для гистологического Спирт этиловый 96% 32-52 исследования путем обработки их жид- Ледяная уксусная костью, содержащей формалин, ледяную кислотаОстальное

уксусную кислоту и спирт этиловый, О при этом фиксацию проводят в течение от.личающийся тем, что, 1-5 сут при 15-25 С,

Изобретение относится к гистологии. Цель изобретения - улучшение качества фиксации тканей. Образцы биологических тканей обрабатывают жидкостью, содержащей формалин, ледяную уксусную кислоту, этиловый спирт и галаскорбин. Затем осуществляют обработку материала по известным методикам. Способ позволяет лучше сохранить ряд микроструктур и повышает сродство к красителям.