Способ окраски полутонких аралдитных срезов Советский патент 1989 года по МПК G01N1/30 

СО С

Изобретение относится к области медицины и может быть использовано в гистологии. Целью изобретения является выявление тонких клеточных и тканевых структур для исследования на светооптическом и электронномикроскопических уровнях. Способ окраски полутонных аралдитных средств заключается в использовании комплексного красителя, содержащего метиленовый синий, азур 11, спирт, глицерин, этиловый спирт, дистиллированную воду, с последующей для ференцировкой в растворе малеиновой кислоты в 50%-ном этаноле.

Изобретение относится к медицине и может быть использовано в гистологии.

Целью изобретения является выявление тонких клеточных и тканевых структур для исследования на свето- оптическом и электронно-микроскопическом уровнях.

П р и м е р. Проводится морфологическое исследование кусочка коронарной артерии больного Н., полученного во время операции аорто-коронарного шунтирования. Немедленно после взятия кусочек фиксируют в модифицированном фиксаторе Карновского,содержащем половинную концентрацию формальдегида и глютаральдегида (2 и 2,5% соответственно) на 0,1 М како- дилатном буфере рН 7,4 с добавлением сахарозы до 0,15 М концентрации, в течение 2 ч при 4 С. После трехкратной промывки образца в 0,1 М какоди- i латном буфере рН 7,4 с 0,15 М сахарозой при 4ЛС в течение 0,5 ч выполняют постфиксацию 1%-ным раствором , четырехокиси осмия на том же буфере с сахарозой 2 ч при 4°С.

Дегидратацию в спиртах и окиси пропилена, заключение в аралдит выполняют общепринятым способом. Полутонкие и ультратонкие срезы образцов f получают при резке блоков на ультратоме. Полутонкие срезы окрашивают ,по предлагаемому способу, ультратон- кие срезы после нанесения на сетки контрастируют цитратом свинца по Рейнольдсу и насыщенным раствором уранилацетата в 70%-ном спирте. Просмотр и фотографирование полутон- ких срезов проводят на установке Axiomat (фирма Opton, ФРГ), ультратонких - на трансмиссионном электронном микроскопе ЕМ-100В при ускоряющем напряжении 75 кВ,

Полутонкие срезы окрашивают 30 с в растворе красителя следующего состава, мас.%:

Метиленовый синий 0,2 Толуидиновый синий 0,2 Азур II0,2

Бикарбонат натрия 3,0 Глицерин20,0

Этиловый спирт30,0

Дистиллированная вода46,4

и дифференцируют 10-15 с (или до момента отхождения голубого облачка) 0,2%-ным раствором малеиновой кислоты в 50%-ном этаноле.

Результаты окрашивания. Микроскопическое исследование окрашенных полутонких срезов показало, что биоп- ,тат коронарной артерии представляет 1 собой липидно-фиброзную бляшку. Цитоплазма основных клеточных элементов бляшки - пенистых клеток - приобретает голубой цвет, ядро - синий, ядрышки и хроматин ядра - темно-синий. На фоне голубой цитоплазмы отчетливо выделяются крупные серо-коричневые липидные . капли, мелкие сине-зеленые липидные вакуоли, темно- красные лизосомы. Кроме пенистых клеток хорошо видны сохранившиеся эн- дотелиальные и гладкомышечные клетки, бледно-голубые кристаллы холестерина в центральной зоне бляшки,мета- хромазия межуточного вещества,связанная, по-видимому, с накоплением кислых гликозаминогликанов, В бляшке присутствует большое число средних и малых лимфоцитов, а также клеток плазмоцитарного ряда, что не является частой находкой в атеросклеро- тических поражениях. Обнаруженные особенности бляшки могут свидетель- стврвать об аутоиммунном .компоненте в патогенезе атеросклероза у данного больного. Для уточнения этого предположения проводится электронно

0

5

0

5

0

5

микроскопическое исследование параллельных ультратонких срезов, которое подтвердило присутствие промежуточных клеточных форм плазмоцитарного ряда и зрелых плазматических клеток, .выявило фрагментацию и лизис колла- геновых и эластических волокон в местах скопления этих клеток в бляшке, установило наличие лимфоцитарно-мак- рофагальных и лимфоцитарно-гладкомы- шечных контактов. Все эти ультра- структурные изменения дополняют и подтверждают диагноз, поставленный больному на основании изучения полутонких аралдитных срезов, окрашенных по предлагаемому способу, В соответствии с уточненным клинико-морфоло- гическим диагнозом больному в послеоперационном периоде рекомендованы иммуномодуляторы.

Формула изобретен и.я

Способ окраски полутонких аралдитных срезов путем их обработки красителем, содержащим раствор толуиди- нового синего в щелочной среде, с последующей дифференцировкой, отличающийся тем, что, с целью выявления тонких клеточных и тканевых структур для исследования на светооптическом и электронно-микроскопическом уровнях, в состав красителя дополнительно введены метиле- новый синий, азур II, этиловый спирт,- бикарбонат натрия и глицерин при следую- цем соотношении компонентов, мас.%: Метиленовый синий 0,1-0,2 Толуидиновый синий 0,1-0,2 Азур II0,1-0,2

Бикарбонат натрия 2,5-3,0 Глицерин10-20

Этиловый спирт 25-30 Дистиллированная водаОстальное а последующее дифференцирование проводят 0,1 - 0,2%-ным раствором малеиновой кислоты в 50%-ном этаноле.