Способ определения спектра жирных кислот в биологической жидкости Советский патент 1987 года по МПК G01N33/92 

Изобретение относится к медицине, в частности к определению состава жирных кислот в плазме крови больных ишемической болезнью сердца.

Цель изобретения - повьшение чув- ствительност способа за счет расширения спектра определения кислот.

П р и м е. р. 1 мл плазмы крови экстрагируют 20 мл хлороформно-мета- нольной смеси (2:1) 3 мин. Нерастворимую фракцию белков отфильтровьтают через бумажный фильтр. Фильтр промывают 5 мл хлороформно-метанольной смеси (2:1). К объединенному фильтрату прибавляют 5 мл воды, энергично встряхивают 1 мин и центрифугируют. Верхний водный слой отделяют и от- брасьгаают. Хлороформный слой упаривают до сухого остатка, добавляют 5 мл раствора едкого калия (0,5 моль/л), нагревают в течение 5 мин на водяной бане при 90-100°С, затем охлаждают до и подкисляют серной кислотой (2,5 моль/л) до рН 1. Свободные жирные кислоты экстрагируют тремя порциями диэтилово го эфира по 1 мл в течение 1 мин. Эфирные извлечения объединяют в микропробирке, оттянутой на корпус, и эфир испаряют в токе воздуха или азота. К полученной смеси свободных жирных кислот добавляют 30 мкл 10%-ного бутанольного раствора гидроокиси тетрабутиламмо- ния или 30 мкл 10%-ного этаНольного раствора гидроокиси тетраэтиламмо- ния, перемешивают и при помощи газо- хроматографического шприца вводят в количестве 5-10 мкл в испаритель xpiOMETOграфа, нагретый до .

Редактор Е.Копча Заказ 2655/49

Составитель Л.Конюхова Техред М.Ходанич

Корректор

Тираж 776Подписное

ВНИИПИ Государственного комитета СССР

по делам изобретений и открытий 113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., д. 4/5

.Производственно-полиграфическое предприятие,.г. Ужгород, ул. Проектная, 4

5

0

По известному способу на хромато- грамме .регистрируются кислоты, начиная с лауриновой. Анализ проводят на газовом хроматографе Биохром-1 с плазменно-ионизационным детектором , на Стеклянной капиллярной колонке длиной 50 м и внутренним диаметром 0,2 мм с неподвижной фазой OV-101. Газ-носитель - азот, давление н-а входе 0,15 МПа, расход водорода 25 мл/мин, расход воздуха 300 мл/мин, деление потока на входе 1:20, температура детектора поддерживалась на уровне , испарителя 330-350 С.

Температура колонки программировалась от 110.до со скоростью 4 град/мин, диапазон чувствительности усилителя 1,2-10 А.

Выход зтилойых эфиров составляет 98%. На хроматограмме в виде бутиловых эфиров регистрируются кислоты, начиная с гептановой, в виде

5

этиловых эфиров - начиная с новой.

капри0

Формула изобретения Способ определения спектра жирных кислот в биологической жидкости путем экстракции пробы, упаривания, зтерификации промежуточных продуктов с последующим газохроматографическим анализом, отличающийся тем, что, .с целью повышения чувствительности способа за счет расширения спектра определения кислот, в качест- 5 ве этерифицирующего агента используют тетраалкиламмониевые основания, а этерификацию проводят в испарителе хроматографа при температуре 330- 3504.

Корректор В.Бутяга

Изобретение относится к меди- цине, предназначено для определения состава жирных кислот в плазме крови больных ишемической болезнью сердца. Цель изобретения - повьшение чувствительности способа путем расширения спектра определения кислот. Для этого порцию плазмы крови экстрагируют с хлороформно-метанольной смесью (2:1) 3 мин. Нерастворимую фракцию белков отфильтровьтают через бумажный фильтр. Фильтр промьгвают 5-10 мл хлороформно-этанольной смеси (2:1). К объединенному фильтрату прибавляют 5 мл воды, энергично встряхивают и центрифугируют. Верхний водный слой отделяют и отбрасывают. Хлороформный слой высушивают, добавляют раствор едкого калия, инкубируют при 90-100°С, охлаждают до и подкисляют серной кислотой до рН 1. Свободные жирные кислоты экстрагируют тремя порциями до диэтилового эфира. Эфирные извлечения объединяют и эфир испаряют. К полученной смеси свободных жирных кислот добавляют 10%-ный бутанольный раствор гидроокиси тетрабутиламмо- ния или 10%-ный раствор этанольного раствора гидроокиси тетраэтиламмон1-и, перемешивают и вводят в испаритель хроматогра фа с 330 с. Анализ кислот проводят на газовом хроматографе Биохром-1 с плазменно-ионизацион- ным детектором на стеклянной капиллярной колонке с неподвижной фазой OV-101. Газ-носитель - азот, давление на входе 0,15 МПа, расход водорода 25 мл/мин, воздуха 300 мл/мин, t в детекторе и 330-350°С - в испарителе. Выход бутиловых эфи- ров 98%. И (Л с со N5 О СП О5