Способ определения карфедона в плазме крови Советский патент 1991 года по МПК G01N33/50 

Изобретение относится к медицине, а именно к способам определения лекарств в биологических жидкостях

Цель изобретения - повышение специфичности и чувствительности способа.

Цель достигается тем, что анализируемую пробу обрабатывают хлороформом при соотношении 1:40, хлороформный экстракт упаривают досуха. К сухому остатку добавляют 0,1%-ный хлороформный раствор внутреннего стандарта 2,4,5,7,8,10 - гекса- метил-2,4,8,10-тетраазабицикло(4,4.0)дека- ндион-3,9 (ГТД) и вводят в хроматограф при температуре испарителя 300 С и температуре колонки 240°С, заполненной фенилме- тилсиликоном-5%ОУ-17 на инертоне супер (0,16-0,20 мм).

Попытка использовать в качестве экс- трагента другие низкокипящие растворители, такие как серный эфир, пентан, гексан, этилацетат, не увенчалась успехом, так как карфедон в них практически нерастворим.

Использование в качестве внутреннего стандарта других веществ, таких как пира- цетам, который по химической структуре близок к карфедону, было безуспешным, так как в указанных условиях на хроматограмме пик его накладывается на пики эндогенных веществ.

Снижение температуры колонки и испарителя ниже вышеуказанной резко снижало чувствительность способа, а увеличение температуры вышеуказанного интервала приводило к снижению селективности способа, так как пик карфедона накладывался на пики эндогенов.

Разделяемая способность системы была оптимальна на колонке ОУ-17, фирмы Chemapol о.п. Лахема Брно, так как использование других фаз, таких как Апиезон 1, SP-2100, SE-30 приводило к изменению симметричности пика карфедона, вносило дополнительные трудности с временем

os ел ю

00

ел

4

удержания, что приводило к снижению чувствительности и селективности способа.

Предлагаемый способ позволяет повысить селективность определения карфедо- на, увеличить чувствительность до МКГ количеств.

Способ осуществляют следующим образом.

Для нахождения относительных калибровочных коэффициентов карфедона по ГТД готовят смеси с точно известным содержанием карфедона и внутреннего стандарта в соотношениях 1:1; 2:1; 3:1; 1:2; 1:3 и хроматографируют в указанных условиях на хроматографе ЛХМ-80 в изометрическом режиме на колонке длиной 1 м, детектор плазменно-ионизационный, скорость ленты самописца 200 мм/ч.

Сигнал детектора является линейным по отношению к обоим определяемым веществам при данных соотношениях.

В качестве параметра для расчета пиков используют площадь пиков (W), которую рассчитывают как произведение высоты пика на ширину его на половине высоты.

Относительный калибровочный коэффициент оказался равным 1,015. Относительная ошибка определения по данным анализа калибровочных смесей составляет ±2,64% (, ,99).

Пример 1. Количественное определение карфедона в моче крыс (модельные растворы).

Готовят точные растворы карфедона в моче в концентрациях, указанных в табл.1.

1 мл приготовленной искусственной смеси помещают в цилиндр, объемом 60 мл, с притертой пробкой, добавляют 40 мл хлороформа и встряхивают на шейкере в течение 20 мин. После экстрагирования цилиндр помещают в морозильную камеру с температурой -15°С.

Водный слой замерзает, а хлороформный слой отбирают и помещают в другой цилиндр, после чего экстракт упаривают на роторном испарителе до объема 1-2 мл. Остаток количественно переносят в микропробирку с дном, оттянутым в капилляр, и упаривают досуха в токе азота.

К сухому остатку добавляют соответствующее количество 0,1 %-ного раствора ГТД в хлороформе. 1-2 мкл полученного раствора вводят микрошприцем в испаритель хроматографа (температура испарителя 300°С, температура колонки 240°С), Время удерживания карфедона 825( время удерживания ГТД 535 V

Измеряют соотношение площадей пиков карфедона и внутреннего стандарта. Содержание карфедона вычисляют по формуле

А XKi/sQ, где А - содержание карфедона в микрограммах;

X - отношение площадей пиков карфедона и ГТД;

Ki/s - относительный калибровочный коэффициент;

Q - количество добавленного внутреннего стандарта.

Результаты определения карфедона в моче (модельные растворы) представлены в табл.1.

П р и м е р 2. Количественное определение карфедона в плазме крови (модельные растворы). Плазму крыс получают центрифугированием в течение 10 мин при 3000 об/мин. Готовят точные растворы карфедона в плазме крови в концентрациях, указанных в табл.2. 1 мл приготовленного модельного раствора помещают в цилиндр объемом 60 мл с притертой пробкой, добавляют 40 мл хлороформа и перемешивают на

шейкере в течение 20 мин. После перемешивания поступают аналогично примеру 1.

Результаты количественного определения карфедона в плазме крови (модельные растворы) приведены в табл.2.

Примерз. Количественное определение карфедона в плазме крови крыс при внутримышечном введении карфедона в дозе 100 мг/кг. Отбирают кровь крыс-самцов до введения карфедона (контроль) и в течение 8 ч через определенные интервалы времени после внутримышечного введения карфедоиа.

Кровь крыс центрифугируют в течение 10 мин при 3000 об/мин. 1 мл полученной

плазмы помещают в цилиндр ( мл) с притертой пробкой, добавляют 40 мл хлороформа, перемешивают в шейкере в течение 20 мин, далее поступают аналогично примеру 1.

Результаты определения карфедона в плазме крови крыс при внутримышечном введении приведены в табл.3.

Из таблицы видно, что предлагаемый способ, учитывая индивидуальные особенности животных, позволяет надежно и достоверно определять среднее содержание карфедона в плазме крови крыс в различные интервалы времени после его введения.

Формулаизобретения

Способ определения карфедона в плазме крови путем обработки пробы, с последующим измерением, отличающийся тем, что, с целью повышения специфичности и чувствительности способа, пробу обрабатывают хлороформом в соотношении 1:40. хлороформный экстракт упаривают, растворяют в 0,1 %-ном хлороформном растворе 2,4,5,7,8, Ю-гексаметил-2.4,8,10-тет- раазабицикло (4.4.0)декандиона-3,9, а измерение проводят хроматографи ески

путем введения полученного раствора в колонку, содержащую в качестве неподвижной фазы 5% ОУ-17 на инертоне супер (0,16-0,20 мм) при температуре колонки и испарителя 240 и 300°С соответственно и скорости газа носителя азота 35 мл/мин.

Таблица 1

.Продолжение табл. 3

1JLl l lЈI T

Изобретение относится к медицине и может быть использовано для определения карфедона в плазме крови. Целью изобретения является повышение специфичности и чувствительности способа, что достигается тем, что анализируемую пробу обрабатывают хлороформом в соотношении 1:40, экстрагируют, упаривают, остаток растворяют в 0,1%-ном хлороформном растворе 2, 4, 5, 7, 8, 10-гексаметил-2,4,8,10-тетраазабицик- ло (4.4.0) декандионэ-3,9 и хроматографиру- ют на набивной колонке с фазой 5% ОУ-17 на инертоне супер (0.16-0,20 мм) при температуре колонки 240°С, температуре испарителя 300°С и скорости газа носителя 35 мл/мин. 3 табл.