Способ определения диметилсульфоксида Советский патент 1987 года по МПК A61K31/10 G01N21/78 

Изобретение относится к биохимий и медицине и может быть использовано в фармакологии для определения концентрации диметилсульфоксида (ДМСО) в биологических объектах и лекарственных препаратах.

Цель изобретения - упрощение способа за счет сокращения числа стадий

Цель достигается за счет того, что пробу с ДМСО добавляют в систему, содержащую лип1еды, в условиях, обеспечивающих протекание перекисно- го оки.сления липидов и образование малонового диальдегида, измеряют

уровень малонового диальдегида спект-15 лонового диальдегида можно использо25

рофотометрически в реакции с тиобар- битуровой кислотой, а концентрацию ДМСО определяют по ингибированию образования малонового диальдегида, причем степень ингибирования пропорциональна десятичному логарифму концентрации ДМСО. Концентрацию ДМСО в опытной пробе определяют по предварительно построенному Калибровочному графику зависимости оптической плотности от концентрации ДМСО„

I На чертеже показана зависимость оптической плотности от концентрации .ДМСО.

. Пример l.B качестве системы, обеспечивающей протекание пере- кисного окисления липидов и генерацию малонового диальдегида5 используют гомогенат мозга крысы. Крысу декат-1тируют, выделяют мозг и гомогенизируют в тройном объеме холодного физиологического раствора, Гомогенат центрифугируют 5 мин при 4000 и вносят по 200 мкл су- пернатанта в ряд пробирок, -В эти про-40 бирки вносят также в концентра ции от 0,5 мкг до 20 мг/мп, затем -последовательно вносят 200 мкл 8,i%- ного раствора доде1.ци1 сульфата натрия.

вать любую систему, содержащую липи- ды в присутствии кислорода: суспензию зритроцитов, эритроцитарные мембраны, гомогенаты тканей, модельные. 20 системы, содержание фосфолипиды или ненасыщенные жирные кислоты и т.д. Объекты, в которых определяется ДМСО, также могут быть любыми. В случае раствора ДМСО неизвестной концентрации этот раствор вносят в пробы непосредственно по примеру 1, Если необходимо определить концентрацию ДМСО в ткани, проводят экстракцию ДМСО из пробы обычнь М способом, например хлороформом, затем при необходимости концентрируют в ацетоне и добавляют в пробирки. Возможна экстракция ДМСО из тканей водой с последующим непосредственным внесением экстракта в пробу.

Пример 2, Крысам в течение трех недель вводят ДМСО в дозе мл 20%-ного ДМСО в день внутрибрюшинно. Затем крыс декапитируют, выделяют мозг, гомогенизируют и экстрагируют гомогенат хлороформом,, Хлороформен- ный экстракт переводят в ацетон, концентрируют и вносят аликвоту в пробы, содержащие супернатант гомогената

30

35

1,5 мл 0,8%-ного раствора тиобарбиту-45 мозга контрольных животных и все реровой кислоты, объем пробы доводят, до 4 дистиллированной водой и выдерживают на кипящей водяной бане в течение 60 мин. Пробы охлаждают и измеряют оптическую плотность при 533 нм. Определение малонового диальдегида проводят по известному методу.

Полученные данные представлены в таблице и на чертеже.

Как видно из чертежа, оптическая плотность линейно зависит от десятичного логарифма концентрации ДМСО в

интервале концентраций 0,5-200 мкг/мл. Таким образом,, концентрация ДМСО может быть определена по кривой или по формуле

DMCO где С

ОД К

DMCO

К од ДМСО

концентрация 10 мкг/мл ;

тангенс угла наклона ка- либро-вочной кривой; оптическая плотность при 533 нм. качестве системы генерации ма5

0

вать любую систему, содержащую липи- ды в присутствии кислорода: суспензию зритроцитов, эритроцитарные мембраны, гомогенаты тканей, модельные. 0 системы, содержание фосфолипиды или ненасыщенные жирные кислоты и т.д. Объекты, в которых определяется ДМСО, также могут быть любыми. В случае раствора ДМСО неизвестной концентрации этот раствор вносят в пробы непосредственно по примеру 1, Если необходимо определить концентрацию ДМСО в ткани, проводят экстракцию ДМСО из пробы обычнь М способом, например хлороформом, затем при необходимости концентрируют в ацетоне и добавляют в пробирки. Возможна экстракция ДМСО из тканей водой с последующим непосредственным внесением экстракта в пробу.

Пример 2, Крысам в течение трех недель вводят ДМСО в дозе мл 20%-ного ДМСО в день внутрибрюшинно. Затем крыс декапитируют, выделяют мозг, гомогенизируют и экстрагируют гомогенат хлороформом,, Хлороформен- ный экстракт переводят в ацетон, концентрируют и вносят аликвоту в пробы, содержащие супернатант гомогената

0

5

0

5

активы для определения малонового ди-V альдегида с тиобарбитуровой кислотой (пример 1), Пробы обрабатывают как описано выше и измеряют их оптическую плотность. По оптической плотности 0,09 при ПОМ01ЕУН кй-пибровочной кривой (чертеж) находят содержание ДМСО в пробе 0,1 мг/мл„ С учетом разведения гомогената, объемов экстрагентов и объема аликвоты рассчитывают, что содержание ДМСО в пробе мозга крыс составляет 35 мкг/мл,

ПредлагаемгзШ способ определения ДМСО по-сравнению с известными спо31324668

собами не менее чувствителен и точен. Чувствительность известного способа 0,1-1 мкг в пробе, предлагаемого - 0,5 мкг. Точность по известному способу - выход 76%, по предлагаемому - 5 среднее квадратичное отклоненние не более 10% (2-10%).

Формула изобретения

Способ определения димгтилсульфок- сида путем анализа физико-химических свойств исследуемой пробы, отличающийся тем, что, с целью упрощения способа за счет сокращения числа стадий, пробу с диметилсульфок- сидом добавляют в систему, содержащую липиды, смесь нагревают в кислой среде с тирбарбитуровой кислотой, спектрофотометрируют, а концентрацию диметилсульфоксида определяют по степени ингибирования развивающейся окраски.

553

.1

0,5 1.0 г,0 20

Составитель Л.Сабурова Редактор П.Гереши Техред И.Попович Корректор Т.Колб

Заказ 2988/4 Тираж 595Подписное

ВНИИПИ Государственного комитета СССР

по делам изобретений и открытий 113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., д. 4/5

Производственно-полиграфическое предприятие, г. Ужгород, ул. Проектная, 4

10

100 200 1000 2000 iglSMCo мкг/м