Штамм бактерий АZомоNаS aGILIS для консервирования мяса Советский патент 1987 года по МПК C12N1/20 C12N1/20 C12R1/01 A23B4/12 

1

Изобретение относится к микробиологии и представляет собой штамм аэотфиксирукнцих бактерий , устойчивый к антибиотикам, используемый для консервирования мяса.

Целью изобра-тения является получение нового штамма азотфиксирую- щих бактерий, который пр й выращивании на дешевой питательной среде накапливает биомассу, способную задержать гниение мяса, не изменив его товарной ценности.

Штамм бактерий Azomonas agilis, которьй при вьфащивании на дешевой питательной среде в течение двух суток накапливает большую биомассу, не патогенен и не токсичен, устойчив к стрептомицину .(10000 мкг/мл), способен предотвращать гниение мяса

Штамм бактерий Azomonas agilis вьщелен из почвы г. Алма-Ата путем посева проб почвы на среду Эшби с последующим выделением чистых культур .азотфиксирующих свободно- ,живущих аэробных бактерий по признак синтеза витаминов, аминокислот, молочной кислоты, обладающих антагонистическими свойствами в отношении гнилостных и гноеродных бактерий.

Выделенному штамму бактерий Azonomas agilis, отвечающему указанным требованиям, присвоен номер 8. Штамм депонирован в центральном музе промьшшенных микроорганизмов института ВНИИГенетика, под номером В-3163.

Штамм идентифицирован по определителю бактерий Берги,

Штамм Azomonas 8(В-3163) растет на МПА, агаре Хомтингера, молоке, молочной сыворотке, среде Эшби, сред Бейеринка, на агаре Богданова, на экстракте трав, на агаре с навозом, на агаре с калом животных.

На всех средах колонии 8-формы слизистые, сочные, непигментирован- ные клетки палочковидной формы с закругленными концами в виде овои- дов, полиморфны. На среде Эшби клет мелкие, на молоке обнаруживаются длинные нити, на агаре Хоттингера - длинные толстые палочки. На МПБ вызывает помутнение среды, грамвари абелен, растет при-рН 4,5-9,0, оптимальный рН 7-7,5. Оптимальная температура роста 20-30°С, при 65°С погибает .

02

Аэроб может расти при пониженном давлении кислорода. Несимбиотически фиксирует азот

в присутствии углеродов.

Желатин не разжижает, редуцирует метиленовую синь. Не разлагает дуль- цит, разлагает глюкозу, лактозу, сахарозу, маннит, мальтозу с образованием кислоты и газа. Не обладает амилолетической активностью, не гемолизИрует эритроциты барана. Ката- лазоположительньгй.

Отношение к источ никам азота:

используют аммиак, аминокислоты. Галатолерантен, фагоустойчив, образует молочную кислоту на стерильном обезжиренном молоке и молочной сыворотке 0,531 кислотностью

62°Т, рН 5,07. Образует витамины группы В (В , В , В). Хранится лиофильно высушенным или на стерильном обезжиренном молоке, или на среде Эшби при 37 С. Обладает генетической меткой, устой-чив в стрепто-, мицину (10000 мкг/мл).

Антагонистические свойства штамма. Средой для контакта служило стерильное обезжиренное молоко и стерильная вода.Использовались культуры: Proteus vulgaris Staphylococcus aureus, Pseudomonas aeruginosa. Salmonella dublin, Salmonella abortus equi. Salmonella Cholerae suis,

Salmonella pullorum, Aeromonas punctata.

В каждую пробирку добавлялось одинаковое количество изучаемой культуры (500 000 000 клеток) и одинаковое

количество культуры Azomonas agilis (50 000 000 клеток) на каждый миллилитр контактной среды. Через сутки проводили высев на элективные питательные среды. На специальных средах

наблюдался рост только штамма Azomonas agilis. Следовательно, штамм Azomonas agilis надежно задерживает рост культур Proteus vulgaris, Staphylococcus aureus, Pseudomonas aeruginosa,

Salmonella dublin. Salmonella abortus egu i Salmonella Cholerae suis, Salmonella pullorum, Aeromonas punctata.

Пример использования штамма для

55

получения препарата для консервирования мяса. .

Для культивирования штадмма исполь- зуют молочную сыворотку, рН которой доводят до 7,4 стерилизуют при давлении 1,5 атм 30 мин. В стерильную питательную среду зас евают штамм Azomonas agilis 8 в количестве 500 миллионов микробных тел на 100 мл среды. Культивируют в термостате при 31°С в течение 2 сут. 2 суточная культура штамма Azomonas agilis 8 является консервантом, который можно сушить лиофильно или распылительно, ig при обычном режиме.

Титр клеток в культуральной жидкости 5-10 клеток. Сумма ниацина, тиамина, рибофлавина в лиофильно высушенном препарате 1,22 мг/г%, мо- 15 лочной кислоты 0,33.

Препарат содержит следующие витамины, мг/г%:

РР (ниацин)0,9

Bj. (тиамин)0,27 20

В (рибяфлавин-) 0,05 и аминокислоты, г/100 г продукта: Лизин0,489

ГистидинО,146

Аргинин0,119 25

Аспарагиновая0,302

Треонин 0,131 Серин0,146

Глутаминовая0,743

Пролин0,086 30

Глицин,0,050

Алании ,О,122

ЦистинО,156

Валин0,337

Метионин0,335

Изолейцин Лейцин0,442

Тирозин0,161

Фенилаланин0,182

Триптофан0,052 до

Сумма -3,999

Содержание белка 4,5 г/100 г. Содержание жира 2,3 г/100 г про- дукта.

Продукцию молочной кислоты опре- 45 деляют на средах с мелом. Вокруг ко- оний, продуцирующих молочную кисоту, образуется зона растворения ела. Для количественного выражения молочной кислоты делают посевы штам- 50 а на стерильное обезжиренное молоко, после 2-суточного роста и образования сгустка определяют кислотность молока градусах Тернера- и умножают на ,009 (1 мл 0,1 н. щелочи эквивален- 55 ен 0,009 г молочной кислоты в мооке) .

Количество витаминов и аминокисот определяют микробиологическим

35

g

5

0

5

0

5

методом (наиболее достоверным из всех существующих) с помощью индикаторных культур ауксотрофных мутантов для каждого витамина и аминокислоты (дрожжи и кишечная палочка). Pichia fermentans Lodder для определения тиамина, Saccharomyces cerevisial пантотеновой кислоты, Dibariomyces disporus - пиридоксина, Lygosaccharo- myces baillii - биотина, Saccharomyces carlsbergens - инозита, Lygo- fabospora marxiana (Hensen) - никотиновой кислоты.

Для определения биосинтеза аминокислот используют в качестве индикаторных культур ауксотрофные штаммы Кишечной палочки, дефицитные по метио- нину (ВКМ - В - 362), гистидину (ВКМ - В - 469), тирозину (ВКМ - В - 4.0) , триптофану (ВКМ - В - 471) ле йцину (ВКМ - В - 827), пролину (ВКМ - Б - 830), аргинину (ВКМ - 831), цистину и гистидину (ВКМ - В - 835), серину и глезину (ВКМ - В - 836), лизину (ВКМ - 363), полученные из отдела типовых культур института микробиологии АН СССР.

Пример использования препарата для консервир ования мяса.

Сухую культуру (или культуру, снятую с питательной среды) штамма Azomonas agilis наносят на всю поверхность свежего куска мяса весом -500 г и размороженного куска мяса, весом также 500 г, мясо помещают (каждый кусок отдельно) в целлофановый мешок и выдерживают при комнатной температуре (25-30°С) в течение 45 дней. Аналогичные куски мяса (контроль) выдерживают в„целлофановых мешках при тех же температурных условиях.

Через 45 дней свежее и размороженное, мясо, подвергнутое консервации сухой и нативной культурами штамма Azomonas agilis, извлекают из целлофановых мешков и исследуют на свежесть органолептически и бактериологически .

Результаты испытаний: при вскрытии целлофановых мешков с экспериментальным консервированным мясом не обнаружено гнилостного запаха. Структура и цвет мяса полностью сохранились. При посеве на специальные питатепьные среды не обнаружено .гнилостных микробов. Во всех случаях

S1331890

высевалась культура штамма Azomonas Формула изобретения agilis.

Таким образом, предлагаемьй штамм. Штамм бактерий Azomonas agilis позволяет консервировать мясо без до- UUIM В - 3163 для консервирования бавления химических веществ..

Изобретение относится к микробиологии и может брыть использовано для консервирования мяса. Целью изобретения является получение нового штамма бактерий, позволяющего консервировать мясо. Штамм аэробных свобод- ноживущих азотфиксирующих бактерий Azomonas agilis ЦМПМ В-3163 выращивают в молочной сыворотке или на стерильном обрате в течение 2 суток. При нанесении на всю поверхность мяса микробной массы штамма мясо предохраняется от гниения. Штамм устойчив к антибиотикам, продуцирует молочную кислоту - 0,53, витамины - РР, Bf, В и аминокислоты. Является антагонистом ПО отношению к гнилостным бактериям: Proteus vulgaris, Staphylococcus aureus, Pseudomonas aeruginosa. Salmonella dublin. Salmonella abortus equi ,Salmonella cho- p lerae suis, Salmonella pullorum, Aeromonas punctata. fS (Л CO 00 00 CD P