Способ иммуноферментного определения антигенов Советский патент 1987 года по МПК G01N33/53 

13377732

Изобретение относится к биохимиики планшета, где он реагировал с поди иммунологии и может быть использова-ложкой.

но для количественного иммуноферментно- Проявление связавшегося анатоксиго определения антигенов ,на проводили с помощью конъюгата

Цель изобретения - повьшение чувст-тех же F(ab)-фрагментов чистых противительности и специфичности методаводифтерийных антител с пероксидазой

за счет применения в качестве специ-хрена в присутствии субстратно-индикафических антител Р(аЬ)-фрагментовторной смеси (перекись водорода + 5иммуноглобулиново10аминосалициловая кислота)„

Способ осуществляют следующим об- Пример, F(ab)j,-фрагменты чисраэоМотых противодифтерийных антител, разИммуноферментное определение диф-веденные в 0,01 М фосфатно-буферном

терийного анатоксина и токсина: в ка-растворе, рН 7,2-7,4 до концентрации

честве специфических антител для фик-15белка 0,01 мг/мл, вносили в лунки

сации на твердой фазе (подложка)планшета. После инкубации в течение

и для конъюгации с ферментом исполь-18 ч при 4-6 С планшеты трехкратно

зовали F(ab)-фрагменты чистых проти-промывали 0,01 М фосфатно-буферным

водифтерийных антител раствором, рН 7,2-7,4, содержащим

Источником антител служила гиперим-200,05%.Твина 20 (этот раствор исполь- ьгунная противодифтерийная антитокси-зовали на всех последуюпщх этапах ческая сыворотка лошадиная (титр ан-постановки реакции)о Затем в сенси- титоксина 400 МЕ/мл)„ f аЬ)-фрагмен-билизированные лунки вносили серийные ты чистых противодифтерийных антителразведения дифтерийного анатоксина выделяли с помощью щадящего гидролиза 25и инкубировали 1,5 ч при 37 С, После иммунной сыворотки пепсином и после-удаления несвязавшегося антигена и дующей сорбцией - элюцией на специфи-трехкратного промывания планшета в ческом иммуносорбентео Специфическимлунки вносили конъюгат (Р(аЬ) -фраг- иммуносорбентом служил дифтерийныйменты чистых противодифтерийных антианатоксин, сорбированный на геле гид- 30тел, меченные пероксидазой хрена в рата окиси алюминия F(ab) -фрагментырабочем разведении и инкубировали чистых противодифтерийных антител под- 5 ч при 37 С. Несвязавшийся конъю- вергали дополнительной очистке нагат удаляли, планшеты трехкратно про- сефадексе G-200 для удаления следовмывали буферным раствором и в лунки растворимого комплекса дифтерийного 35ДО авляли субстратно-индикаторный анатоксина с F(ab),, -фрагментами чис-раствор Результаты реакции оценивали тых противодифтерийных антител. Удель-визуально по появлению коричневой ная активность (аЬ) -фрагментов чис-окраски в рабочем ряду и при отсутст- тых противодифтерийных антител равня-вии окраски в контрольных лунка лась 400 МЕ/мг азота. Полученный 40(F(ab)2-фрагменты чистых противо- препарат использовали для фиксациидифтерийных антител + конъюгат; ана- на плашиете, а также для приготовле-токсин + конъюгат). ния на его основе конъюгата с пере- Таким образом удается повысить доксидазой хрена (производства объе-чувствительность предлагаемого спосо- динения Биохимреактив)о Конъюгацию 45ба в 10-20 раз.

проводили перйодатным методом. Конъю-.

1 « Формула изобретения гат очищали на сефадексе ((J и подвергали лиофильному высушиванию Способ иммуноферментного определения антигенов, включающий адсорбцию

Для постановки реакции использова- 50специфических антител на твердой фали планшеты одноразового применения зе и выявление антигена с помощью

В качестве первого компонента, фикси-конъюгата специфических.антител с ферруемого на плашпете, использовалиментом, отличающийся тем,

F(ab),j-фрагменты чистых противодиф-что, с целью повьш1ения чувствительностерийных антител (подложка), 55 специфичности способа, в качестве

Модельным компонентом, являющимсяспецифических антител для адсорбции

антигенным аналогом дифтерийного ток-на твердой фазе и для конъюгата с

сина, служил дифтерийный анатоксин,ферментом используют F(ab) -фрагменты

который в разведениях наносили в лун-антител.

Изобретение относится к биохимии и иммунологиио Цель изобретения - повышение чувствительности и специфичности способа. Фрагменты чистых противодифтерийных антител смешивают с фосфатно-буферным раствором, вносят в лунки планшета и инкубируют. Планшеты промывают, в лунки вносят дифтерийный анатоксин и инкубируют. После удаления несвязавшегося антигена и промывания планшета в лунки вносят конъюгат и инкубируют. Несвязавшийся конъюгат удаляют, планшеты промывают и в лунки добавляют индикаторный раствор с Результаты реакции оценивают по наличию коричневой окраски в рабочем ряду. 00 со ел